Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
ELECTROFOREZA
ELECTROFOREZA
ELECTROFOREZA
ELECTROFOREZA
Fortele care determina mobilitatea electroforetica depind de: voltajul
aplicat (65-75 V), sarcina neta a moleculelor, masa moleculara si
coeficientul de frictiune
- teoretic: 5 v/cm
ELECTROFOREZA
ELECTROFOREZA
Gelul de electroforeza
ELECTROFOREZA
ELECTROFOREZA
-
260
250
260, 250
200
200
+
Gel de agaroza
Gel de poliacrilamida
Gel de agaroza
ELECTROFOREZA
Tamponul de electroforeza
- TAE: Tris, acid acetic, EDTA
- TBE: Tris, acid boric, EDTA
- Acid citric
- Glicina
- Acid fosforic
TRIS = tris(hidroximetil)aminometan
Pentru vizualizarea fragmentelor de acizi nucleici :
- colorarea gelului: bromura de etidiu, Syber Green,
EvaGreen, GelGreen, GelRed sau
- Colorarea tamponului: bromura de etidiu
ELECTROFOREZA
Tipuri de electroforeza
1.
2.
1.
2.
Tipuri de electroforeza
Electroforeza
1. In gel de agaroza
2. DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis): electroforeza in gel
in gradient denaturant
3. TGGE: (temperature gradient gel electrophoresis): electroforeza in
gel in gradient de temperatura
Ambele metode sunt folosite in domeniul biomedical (mutatii) si
ecologie microbiana
4. PFGE (pulse field gel electophoresis): electroforeza in camp
pulsatoriu
Gel de agaroza, dar voltajul este schimbat in 3 directii (1 catre
centru gelului, 2 care actioneaza intr-un unghi de 60 o)
Pentru genotipare, epidemiologie moleculara
Tipuri de electroforeza
DGGE
Tipuri de electroforeza
Electroforeza pentru separarea proteinelor
1. PAGE: in gel de poliacrilamida
2. SDS-PAGE: electroforeza in conditii denaturante
- Agenti de denaturare: SDS, uree si formamida
1. IEF (focusare izoelectrica): se realizeaza intr-un gradient de pH,
fiecare proteina migrand pana atinge punctul unde pH = pI
2. 2DGE (Two-dimensional gel electrophoresis): IEF si SDS-PAGE
(pH izoelectric si MM)
Tipuri de electroforeza
Tipuri de electroforeza