Sunteți pe pagina 1din 17

LP 5

ELECTROFOREZA

ELECTROFOREZA

1937 Arne Tiselius- aparat sofisticat care sa permita


separarea diferitelor particule in prezenta unui camp
electric

1948 Tiselius- Premiul Nobel pentru Chimie (separarea


coloizilor prin metode electroforetice)

1960 Vin Thorne - electroforeza acizilor nucleici

ELECTROFOREZA

Denumirea: gr. Electron= electric, lat. Phore = purttor,


evideniindu-se astfel rolul esential al campului electric

reprezint o metod de analiz i separare bazat pe


migrarea particulelor solide incarcate electric dispersate
ntr-un lichid sub aciunea unui cmp electric

Moleculele de ADN sunt incarcate negativ si vor migra


spre polul pozitiv

ELECTROFOREZA
Fortele care determina mobilitatea electroforetica depind de: voltajul
aplicat (65-75 V), sarcina neta a moleculelor, masa moleculara si
coeficientul de frictiune
- teoretic: 5 v/cm

ELECTROFOREZA

Cuva (tanc) de electroforeza


2 electrozi conectati la o sursa de curent
Gel de electroforeza (pentru o migrarea mai buna a moleculelor)
un lichid (tampon de electroforeza)

ELECTROFOREZA

Gelul de electroforeza

Gel de agaroza (polizaharid, D-galactoza and 3,6anhidro-L-galactopiranoza, extras din alge)


Gelurile de agaroza au o concentratie de 1-5%, in functie
de dimensiunea fragmentelor ce trebuie separate
Gelurile de agaroza permit separarea acizilor nucleici cu
dimensiuni intre 100-1500 pb

ELECTROFOREZA

Gel de poliacrilamida: permit separarea acizilor nucleici cu


dimensiuni intre 60-450 pb si a proteinelor
dezavantaje: neurotoxic si cancerigen
Gelurile de agaroza se formeaza prin incalzirea agarozei la cuptorul
cu microunde timp de 3-4 minute. Aceste geluri polimerizeaza
formand o retea cu ochiuri de dimensiuni variabile in functie de
concentratia gelului
Gelurile de poliacrilamida polimerizeaza la temperatura camerei in
prezenta unor agenti de polimerizare
Gelurile cu concentratie mica (< 3%) separarea moleculelor cu
MM mare
Gelurile cu concentratie mare (> 3%) separarea moleculelor cu
MM mica

ELECTROFOREZA
-

260
250

260, 250

200

200

+
Gel de agaroza

Gel de poliacrilamida

Gel de agaroza

ELECTROFOREZA
Tamponul de electroforeza
- TAE: Tris, acid acetic, EDTA
- TBE: Tris, acid boric, EDTA
- Acid citric
- Glicina
- Acid fosforic
TRIS = tris(hidroximetil)aminometan
Pentru vizualizarea fragmentelor de acizi nucleici :
- colorarea gelului: bromura de etidiu, Syber Green,
EvaGreen, GelGreen, GelRed sau
- Colorarea tamponului: bromura de etidiu

ELECTROFOREZA

Tipuri de electroforeza

1.
2.

1.
2.

In functie de suportul folosit:


Electroforeza in solutie libera = electroforeza capilara
Electroforeza pe diferite suporturi: hartie, film, geluri
In functie de planul de electroforeza:
Electroforeza orizontala acizi nucleici
Electroforeza verticala - proteine

Tipuri de electroforeza
Electroforeza

pentru acizi nucleici

1. In gel de agaroza
2. DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis): electroforeza in gel
in gradient denaturant
3. TGGE: (temperature gradient gel electrophoresis): electroforeza in
gel in gradient de temperatura
Ambele metode sunt folosite in domeniul biomedical (mutatii) si
ecologie microbiana
4. PFGE (pulse field gel electophoresis): electroforeza in camp
pulsatoriu
Gel de agaroza, dar voltajul este schimbat in 3 directii (1 catre
centru gelului, 2 care actioneaza intr-un unghi de 60 o)
Pentru genotipare, epidemiologie moleculara

Tipuri de electroforeza
DGGE

Tipuri de electroforeza
Electroforeza pentru separarea proteinelor
1. PAGE: in gel de poliacrilamida
2. SDS-PAGE: electroforeza in conditii denaturante
- Agenti de denaturare: SDS, uree si formamida
1. IEF (focusare izoelectrica): se realizeaza intr-un gradient de pH,
fiecare proteina migrand pana atinge punctul unde pH = pI
2. 2DGE (Two-dimensional gel electrophoresis): IEF si SDS-PAGE
(pH izoelectric si MM)

Tipuri de electroforeza

Tipuri de electroforeza

Electroforeza biochimie clinica

Electroforeaza proteinelor serice: albumina, 1 globuline,


2 globuline, 1 globuline, 2 globuline, globuline

malnutritie, malabsorbtie, sindrom nefrotic, neoplazii,


hepatita, boli autoimune
Electroforeza hemoglobinei anemie
Electroforeza lipoproteinelor boli cardiovasculare