Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Fig. 1. Reprezentarea schematic a primei linii de aprare a organismului (dup Roitt, 1991).
pentru c dei numrul celulelor imunocompetente este mult mai mare, nu sunt utilizate
dect cteva la un moment dat, astfel ca aprarea organismului se realizeaz cu mare
economie de mijloace. Dup stimularea realizat prin contactul cu antigenul, clona
respectiv este activat i intr ntr-un proces de proliferare intens i de difereniere
funcional, celulele devenind efectoare, angajate (engl. commited), Ag-reactive. La baza
rspunsului imun se afl selecia clonal, care determin marea eficien a acestui
rspuns, derivat din capacitatea de amplificare a efectelor sale, consecutiv stimulrii
antigenice (fig. 2).
5. Activitatea de supraveghere a sistemului imunitar este facilitat de capacitatea de
circulare i recirculare a limfocitelor, din snge n organele limfoide secundare (ganglioni
limfatici, splin, amigdale, plci Peyer) care reprezint locul de ntlnire dintre limfocite
i Ag, i invers.
6. Memoria imunologic, netransmisibil ereditar, determin un rspuns imun mai rapid,
mai intens, mai durabil, la a doua ntlnire i urmatoarele, cu acelai antigen = rspuns
anamnestic sau fr uitare (gr. ana-mnesis = amintirea celor din trecut sau an-amnesis=ne-ne-uitare)
(fig.
3),
pe
aceast
proprietate
bazndu-se
procedeul
CEL.
STEM
Proliferare
Maturare
LT
LB
Repertoriul de celule imunocompetente,
nainte de contactul cu Ag
OOOOOOOOOOOOOOO
Ag
= Clone de LT i LB
SELECIA CLONAL
stimulare
antigenic
Proliferare selectiv
Difereniere functional
Clona de limfociteAg-specifice
2) IgG
Reducerea S-S-
3) IgG
niciunul dintre lanuri nu poate lega singur Ag, fiind necesar legarea lor 2 cte 2 (L+H);
cele 4 lanuri sunt unite ntre ele prin puni disulfidice S-S-, formate la nivelul resturilor de
cistein; intra- i intercatenare;
lanurile L sunt comune pentru toate clasele de Ig; din punct de vedere antigenic sunt ns de
tip k sau ;
n moleculele de Ig ambele lanuri L sunt de acelai tip; 65% dintre moleculele de Ig umane
conin lanuri Lk; la oarece- 95% - Lk.
Lanurile H conin 450 600 AA; regiunea CH are 3 - 4 domenii alctuite din 100 110
AA: CH1, CH2, CH3, (CH4). Ig din clasele G, A, D au 3 domenii C, iar clasele M i E au 4
domenii C.Domeniile se pot nota i astfel C1, C2, C3 pentru IgG .a.m.d. Lanurile H se
deosebesc prin proprietile antigenice, conferind caracterul de clas al Ig-lor :
- clasa IgG lan
- clasa IgM lan
- clasa IgA lan
- clasa IgD lan
- clasa IgE - lan
Lanurile L conin 214 AA, au o g.m. de 25 kDa, se compun dintr-un domeniu variabil
VL i unul constant CL, fiecare de 107 resturi de AA. ntotdeauna se ataeaz Vk+Ck i V+C.
Analiza structural i chimic a lanurilor moleculelor de Ig s-a realizat folosind populaii
moleculare omogene, de la bolnavi cu mielom multiplu (plasmocitom)- stare patologic caracterizat
printr-o sintez crescut de molecule de Ig normale uor de purificat i analizat (~ 95%). In alte stri
patologice se sintetizeaz n exces molecule patologice de Ig; de ex. n mielomul micromolecular sinteza
de lanuri L n exces, conduce la dimerizarea i eliminarea lor prin urin (proteine Bence - Jones); n
boala lanurilor grele lipsesc AA care formeaz domeniul CH1.
variabil, numrul specificitilor rezultate fiind destul de mare pentru a corespunde tuturor
epitopilor existeni n natur.
Fragmentul Fc este alctuit din domeniile constante CH2 i CH3 ale lanurilor H, unite
prin puni disulfidice (un domeniu suplimentar CH4 este prezent la Ig M i IgE). La un pH acid
(2,5) regiunea dintre domeniile CH2 i CH3 devine sensibil la clivajul enzimatic, iar la pH
neutru redevine rezistent. Dac prin hidroliza enzimatic cu papain a moleculei de IgG se obin
2 fragmente Fab i un fragment Fc, prin aciunea prelungit a acestei enzime, pe lng
fragmentele Fab se obine i un Fragment Fc sau pFc (pepsic). Aa s-a demonstrat c domeniul
CH2 leag complementul i este responsabil de rata catabolismului ntregii molecule.
Moleculele de Ig reprezint sediul unei dualiti funcionale: fragmentele Fab leag
specific antigenul, datorit variabilitii lor, pe cnd fragmentele Fc, caracterizate prin constan,
confer moleculelor de Ig posibilitatea de a prezenta antigenele fixate de Fab, sistemelor celulare
i umorale de distrugere i eliminare.
Glucidele din structura Ig-lor (glicoproteine)
Toate clasele de Ig au o component glucidic (oligozaharidic) localizat n regiunea
constant CH2, sub forma unor catene laterale simple sau complexe care reprezint 3 13% din
greutatea moleculelor. Sunt secvene foarte heterogene, reprezentate de glucozamin (GlcN),
glucoz, galactozamin (GalN), acid sialic, fucoz, manoz, care se adaug secvenial pe
parcursul sintezei Ig-lor. Legarea ncepe nainte ca sinteza s fie complet i se ncheie la secreia
Ig-lor (la trecerea din RER n aparatul Golgi, sub aciunea transglucozidazelor membranare
nespecifice). Prezena lor este corelat, se pare, cu procesul de transport transmembranar i de
secreie a Ig-lor. Glucidele din structura glicoproteinelor, n general, confer acestora
urmtoarele proprieti:
- cresc solubilitatea proteinelor;
- induc i menin lanurile peptidice ntr-o conformaie tridimensional funcional;
- protejeaz proteinele fa de atacul enzimatic;
- scad imunogenitatea;
- controleaz timpul de njumtire al glicoproteinelor solubile i celulare.
Aa cum s-a artat, analiza cristalografic n raze X a Ig-lor a demonstrat c lanurile
polipeptidice nu sunt lineare ci pliate, ca regiuni globulare, compacte, numite domenii, spaial
distincte, cu structur 3-dimensional asemntoare i rezistente la proteoliz. Domeniul se
nscrie ntr-un cilindru cu diametrul de 3,5 nm i este format din 60-70 aminoacizi, fiind
10
stabilizat de o punte S-S- situat n regiunea central a unei uniti de omologie format din 110
aminoacizi. Toate domeniile analizate au prezentat un model unic de pliere antiparalel a
lanurilor polipeptidice, numit -pliere, pliereIg (engl. Ig-folding).
Domeniile fiecrui lan nu sunt independente de cele din lanul opus, ci formeaz perechi
de uniti de omologie care se constituie n uniti structurale numite module (de ex., VL i VH
izolate au slab capacitate de a lega Ag, dar VL + VH formeaz situsul combinativ = paratop,
cu mare afinitate pentru Ag. Au fost descrise 2 tipuri de interaciuni ntre domenii adiacente:
Heterogenitatea Ig-lor
Ig sunt foarte heterogene, n privina ncrcturii electrice i a migrarii electroforetice,
specificitii de Ac, caracterului antigenic etc. Heterogenitatea antigenic se relev dup
inocularea la alte organisme n care se comport ca Ag, determinnd sinteza de Ac anti-Ig.
Aceast enorm diversitate a Ig-lor este generat de secvena aminoacizilor de la nivelul
diferitelor domenii, care determin diferene antigenice i existena urmtoarelor specificiti:
1) Specificitatea sau heterogenitatea izotipic;
2)
,,
,,
alotipic;
3)
,,
,,
idiotipic.
Fig. 8. Structura celor cinci clase de Ig (sferele indic localizarea determinanilor antigenici
izotipici ai lanurilor H) .
11
De ex., clasa IgG are 4 subclase, lanurile H ale acestora fiind notate cu 1 4. IgA i IgM au
cte dou subclase. La variantele antigenice izotipice contribuie i frecvena rspndirii lanurilor
uoare k i . Diferenele antigenice ale lanurilor H sunt semnificative, gradul de omologie fiind
de 40%. Acesti determinani antigenici localizai n domeniile constante sunt comuni
indivizilor unei specii i se manifest ca antigene dup inocularea ntr-un organism aparinnd
altei specii. De ex., dac se inoculeaz IgG umane la iepure, se obine un antiser cu Ac anti-IgG
umane, care va precipita toate subclasele de IgG umane sau, un antiser preparat pe iepure fa de
lanurile umane, va reaciona i va precipita Ig-le umane din orice clas care conin lanuri L.
Clasele i subclasele de Ig au proprieti structurale, antigenice, dar i funcionale diferite:
Clasa IgG Ig-le din aceast clas constituie tipul reprezentativ de Ig, fiind cel mai
bine cunoscute Ig; reprezint 70-75% din totalul Ig-lor serice, astfel c sunt uor de obinut n
stare pur, de studiat biochimic i funcional. Formula molecular: 2k2 sau 22. Constanta de
sedimentare este de 7S, g.m. 150 kDa, concentraia seric variind ntre 800 2000 mg%.
Moleculele de IgG sunt termorezistente, nefiind denaturate la 75C, timp de 30min; au un mic
procent de glucide (2 3%), un timp de njumtire (T
1/2)
Fig. 9. Concentraia de IgG n dinamic n organismul uman (dup Miller i col., 1991).
13
Clasa IgM. Moleculele de IgM au cea mai mare greutate molecular - 950 kDa, 19S.
Reprezint 3 10% din cantitatea total de Ig (concentraie seric cuprins ntre 60 280 mg%).
Lanul are 576 de aminoacizi i 5 domenii, dintre care 4 constante. IgM constituie anticorpii
rspunsului imun primar, care apar dup primul contact cu Ag. Anticorpii IgM au T = 10 zile,
sunt termorezisteni i au un coninut de 12% glucide.
Structural sunt molecule pentamerice, libere n circulaie sau molecule monomere fixate pe
membrana limfocitelor B. Pentamerul este alctuit din 5 uniti identice, legate ntre ele prin
legturi disulfidice i prezint 10 situsuri identice de combinare cu Ag, dintre care sunt active 5,
maximum 6, datorit unui efect de mascare steric. IgM pentamer are n structura sa i un alt
component, esenial pentru polimerizare, un lan care reunete monomerii la nivelul domeniului
CH4, motiv pentru care a fost numit lanul J (engl. joining chain = lan de unire), deci formula
molecular este (2L2)5-J. Ansamblul are o mare flexibilitate, molecula avnd form de stea
sau pianjen, cu diametrul de 30 nm, form ce se modific n funcie de relaia cu Ag. Datorit
volumului mare al moleculei, este numit i 2 macroglobulina (fig. 12) i prezent mai ales n
sistemul circulator i n mic msur n esuturi (n lichidul interstiial).
Moleculele de IgM au o mare capacitate de aglutinare, fiind Ac tipic aglutinani (capacitate
de 1000x mai mare dect IgG), de precipitare i mai ales de activare a sistemului complement pe
calea clasic (de 100x mai mare dect IgG). Pentru legarea componentului C1q i activarea C pe
calea clasic, ce conduce la citoliz, condiia obligatorie este ca 2 molecule de Ig foarte apropiate
s lege acest component, concomitent, la nivelul fragmentelor Fc. IgM fiind o molecul
pentamer, este suficient o singur molecul pentru activarea C, deoarece condiia obligatorie se
realizeaz de la sine, respectiv legarea C1q de 2 fragmente Fc. La IgM situsul de activare a C
14
este situat la nivelul domeniilor CH3 CH4 i devine accesibil (ca i n cazul IgG) n urma
modificrii conformaiei sterice, dup reacia cu Ag, lanul J nefiind implicat n acest proces.
Clasa IgA. Unitatea de baz este monomerul cu formula 2k2 sau 22. Se prezint i n
form dimerizat. Monomerul are 7S, g.m. 160 kDa i o structur asemntoare cu cea a IgG.
Dimerul se formeaz cu ajutorul unui lan de unire J. IgA sunt prezente att n ser, ct i n
secreii. Clasa IgA este mai bogat n hidrai de carbon comparativ cu IgG, legai n special de
regiunea balama (7-11%). Anticorpii IgA au T = 6 zile i sunt termorezisteni.
Exist dou subclase de IgA: IgA1 i IgA2 (fig. 13a). Subclasa IgA1 este prezent n
proporie de 90% n ser (80% fiind monomer). Subclasa IgA2 are o structur original, lanurile
L fiind legate ntre ele prin legturi covalente, iar de lanurile H prin interaciuni necovalente.
Este predominant n secreii, in forma dimerizata (fig. 13b).
IgA seric are o concentraie relativ mare (90 450 mg%), reprezentnd cca 15 -20% din
totalul Ig-lor aflate n circulaie. Dei n cantitate mare n ser, IgA serice au o activitate slab de
Ac. Nivelul seric normal este atins la vrsta de 14 ani.
a)
b)
Fig. 13. a) Structura monomerilor de IgA, aparinnd celor 2 subclase ; b) structura dimerului de sIgA (Kerr, 1990).
16
IgA secretorie (sIgA), cu o denumire considerat improprie stricto sensu, este forma
prezent n secreii unde predomina ca dimer, cu constant de sedimentare 11S i g.m. 400 kDa.
Sunt prezeni i polimeri (n = 3, 4, 5) ca i monomeri n cantitate foarte redus. Este secretat de
plasmocitele din foliculii limfoizi prezeni n chorionul mucoaselor (stratul profund al acestora
fiind vascularizat). n afar de lanul J, dimerul mai conine o glicoprotein suplimentar
denumit ,,piesa secretoare,, sau piesa S sau CS, care nu are nici o relaie structural sau genetic
cu moleculele de IgA, fiind sintetizat de ctre celulele epiteliale i nu de ctre plasmocite.
Formula molecular a dimerilor este urmtoarea: (2L2)2 .J. CS. (fig. 14). CS servete ca ligand
al dimerilor IgA pe suprafaa celulelor epiteliale, n momentul traversrii acestora (fig. 15). CS
confer moleculelor i rezisten sporit la aciunea enzimelor proteolitice prezente n secreii (n
plus i regiunea balama este mai rezistent la proteoliz, fiind mai scurt).
Fig. 15. Transportul moleculelor de IgA prin celulele epiteliale ale mucoaselor (dupa Abbas, 2000) .
17
Funciile IgA.
Moleculele de IgA serice nu activeaz complementul pe calea clasic, nu favorizeaz
fagocitoza opsonic, nu aglutineaz, nu precipit Ag-le. Rolul lor este de a ndeprta Ag-le
provenite din alimente sau Ag solubile ale bacteriilor din microbiota normal ptrunse n
circulaie, care astfel vor fi eliminate rapid, mpiedicnd accesul acestora la celulele sistemului
imunitar i devierea rspunsului imun de la funcia sa normal de ndeprtare a non-self-ului. n
alte lichide biologice ale corpului, cum ar fi LCR, lichidul pleural, amniotic, sinovial, ca i n ser
- predomin IgG, raportul IgG : IgAseric, fiind n jur de 5:1.
Moleculele de IgA secretorii sunt prezente n toate tipurile de secreii (secreia nazal,
bronic, suc gastric, intestinal, secreie biliar pancreatic, secreia vaginal, lichidul prostatic,
n lichidul lacrimal, n saliv, n lapte i colostru), dar n concentraii diferite. Copilul la natere
are un nivel seric redus de IgA, dar primete sIgA de la mam, sinteza proprie ncepnd dup 30
de zile de la natere. De aceea, copiii alimentai natural sunt mai puin receptivi la infecii
intestinale i respiratorii, comparativ cu cei alimentai artificial.
Moleculele de sIgA au un rol important n aprarea local antiviral i antibacterian,
determinnd imobilizarea i agregarea agenilor infecioi. Mecanismul de aciune const n
inhibarea aderenei agenilor infecioi la nivelul receptorilor specifici prezeni pe suprafaa
celulelor epiteliale i a colonizrii consecutive a mucoaselor, fenomenul fiind denumit excludere
imun. S-a demonstrat c nivelurile crescute de sIgA cu specificitate fa de microorganismele
cariogene au un rol important in generarea rezistenei la carii. Se pare c sIgA regleaz cantitativ
i calitativ (componena n specii) microbiota normal a mucoaselor. Dezvoltarea n filogenie a
unui sistem imunitar specializat al mucoaselor, apare foarte avantajoas, lund n considerare
suprafeele extensive ale corpului i particularitile epiteliilor acoperite de membrane mucoase
vulnerabile. IgA secretoare, component umoral specific al acestui sistem acioneaz prin cteva
mecanisme cum ar fi: excluderea imuna (sIgA previne aderarea microorganismelor i a
proteinelor strine la suprafee mucoase), urmat de clearance-ul complexelor imune, prin
eliminarea lor de ctre curentul de mucus.
Microorganismele patogene (bacterii, levuri) care colonizeaz mucoasele prezint, n
general, proprietatea de a elabora enzime extracelulare cu ajutorul crora contracareaz efectul
protector al sIgA. n general, sinteza IgA - proteazelor este asociata la bacteriile respective cu
prezenta capsulei (efect anti-opsonizant), fapt care le confera avantaje deosebite n colonizarea
18
Clasa IgE a fost descoperit n anul 1966. Notaia E, deriv de la tipul de lan greu -, dar
i de la eritem (roea), pentru c reprezint aa-numitele molecule de Ac reaginici sau Ac
sensibilizani ai pielii (citotropi). Formula molecular este 2k2 sau 22, g.m. 190 kDa, 8S, T
= 2 zile i sunt molecule termosensibile (sunt denaturate la 56C, timp de 30 min). Prin nclzire
IgE i pierde capacitatea reaginic, nu ns i funcia de Ac, de recunoatere specific a Ag-lor.
Lanurile au 5 domenii (g.m. 75 kDa) i conin un procent mare de hidrai de carbon (12%).
Concentraia seric este redus, de aprox. 250 ng/ml (0,004% din totalul Ig-lor), dar crescut n
colostru (sute de ng), scznd apoi n laptele matern, rmnnd la valori crescute numai la
mamele cu alergii. Nu se transmit transplacentar, dar copilul o primete prin colostru, dei
sinteza proprie ncepe nc din perioada intrauterin. Nivelul seric normal este atins la 14 ani.
IgE nu activeaz C, dar se leag citofil de receptorii Fc de pe membrana mastocitelor
(bazofile tisulare, prezente i la nivelul mucoaselor i a esutului conjunctiv), inducnd
degranularea acestora i eliberarea de amine vasoactive. IgE are un rol important i n cursul
inflamaiei. n momentul n care n organism ptrunde un alergen care este recunoscut i
reacioneaz specific cu Ac IgE fixai citofil, se transmit semnale n celul, care determin
degranularea mastocitelor i eliberarea imediat a unor cantiti mari de amine vasoactive, care
sunt mediatori farmacologic activi preformai de tipul histaminei, serotoninei, care vor determina
vasodilataie, contracia muchilor netezi, creterea permeabilitii vaselor sanguine. Sunt
eliberai i factori chemotactici pentru eozinofile, neutrofile, proteaze ce afecteaz membrana
endoteliilor i TNF cu efect inflamator. Se sintetizeaz i sunt eliberai i mediatori nou
formai, de tipul prostaglandinelor care determin vasodilataie i agregarea trombocitelor, de
tipul leucotrienelor, cu rol n creterea permeabilitii vaselor sanguine i secreia de mucus,
genernd simptomatologia tipic a reaciilor de hipersensibilitate de tip I sau de tip imediat
(reacii alergice). Simptomatologia depinde i de situsul anatomic interesat. Un organism
sensibilizat fa de un anumit antigen (alergen), rspunde exagerat, de unde denumirea de reacie
de hipersensibilitate, de tip imediat pentru c se produce n cteva minute dup contactul cu
alergenul, deoarece IgE sunt deja sintetizate i legate citofil (fig. 16).
Ca i celelalte molecule de Ig, moleculele de IgE sunt secretate de ctre plasmocite, aflate
sub controlul limfocitelor Th i Ts, aciunea acestui ultim tip celular tinznd s limiteze durata i
intensitatea rspunsului imun n general, inclusiv prin IgE. De regul rspunsul cu Ac IgE este
precoce, fiind sintetizai imediat dup IgM i nainte de IgG, producia putndu-se prelungi ns
luni i chiar ani de zile, ceea ce explic durata mare a manifestrilor alergice.
20
Fig. 16. Fixarea citofil a IgE la receptorii Fc de pe suprafaa bazofilelor i mecanismul unei reacii
alergice, declanat de ptrunderea unui alergen n organism i degranularea consecutiv a bazofilelor.
considerat de ex., serul de cobai are cea mai mare concentraie de complement). Sunt proteine
termolabile (inactivate la 56 o C, timp de 10 min.) sintetizate mai ales de ctre hepatocite, dar i
de ctre macrofage, monocite; C1q este sintetizat exclusiv de ctre epiteliul gastrointestinal i
urogenital. Unele componente au rol efector, altele au rol de reglare. Indiferent de calea de
activare, primul component odat activat, declaneaz o reacie n lan sau n cascad,
inducnd activarea urmtorului component .a.m.d.
Nomenclatur. Proteinele SC circulante, inactive sunt desemnate prin litera C, urmat de
un indice numeric de la 1 9, care corespunde ordinii n care proteina respectiv intr n reacie:
C1 - C4 C2 C3 C5 C6 C7 C8 C9 (numerotarea componentelor izolate i identificate
s-a fcut nainte de stabilirea ordinii intrrii lor n reacie); alte componente sunt desemnate prin
simboluri (I, B, D, H) sau denumiri obinuite properdina.
Fragmentele rezultate din clivarea enzimatic a anumitor componente sunt notate cu
litere mici, adugate la denumirea componentului normal. De ex., componentul C1 poate fi clivat
n trei subuniti: C1q, C1r, C1s, care n mod normal sunt meninute mpreun prin legturi
necovalente i n prezena ionilor de Ca++. Componentele cu activitate enzimatic sau cele active
biologic, sunt desemnate print-o bar adugat deasupra denumirii componentului inactiv; de
ex.: C1s, C3b, C5b67.
Activarea componentelor SC inactive poate fi realizat pe dou ci:
1) Calea clasic activat de formarea complexelor imune Ag-Ac (fig. 17);
2) Calea alternativ activat de substane polimerice: LPS din structura peretelui
celular al bacteriilor Gram negative, polizaharide capsulare bacteriene i fungice, Ig
polimerizate.
Fig. 17. Activarea componentului C1 pe calea clasic, consecutiv reaciei Ag-Ac (dupa legarea Ac-lor de
Ag expuse pe membrana celulelor straine).
22
23
24
9
.
.
Fig. 18, B. Elementele figurate ale sngelui, ntre care i celulele sistemului imunitar, observabile
pe frotiul de snge; 1) monocit; 2) trombocite; 3) PMN neutrofil segmentat; 4) PMN bazofil;
5) limfocit; 6) PMN eozinofil; 7) hematie; 8) monocit; 9) PMN neutrofil nesegmentat.
* Valorile normale ale formulei leucocitare la adult: neutrofile nesegmentate- 1- 4%, neutrofile
segmentate - 60-70%, eozinofile 1 -4 %, bazofile 0 -1%, limfocite 25 -30%, monocite 4 -8%, plasmocite
- 0- 0,5%; de menionat c la copilul mic proporiile de PMNN i limfocite sunt inversate (ieica i col., 1984).
,,
,,
- organele limfoide secundare- ganglionii limfatici, splina, plcile Peyer, amigdalele, apendicele
vermiform, vegetaiile adenoide, celulele limfoide izolate din piele i mucoase, limfocitele libere din
snge i limf.
Organele limfoide primare i secundare au caracteristici care le deosebesc fundamental. n
cele primare limfocitele sufer transformri care conduc la maturarea lor functional, iar cele
secundare sunt populate cu limfocite instruite n cele primare, la acest nivel avnd loc majoritatea
reaciilor imunitare. Celulele care pot realiza potenial un rspuns imun fa de un Ag, se numesc
imunocompetente, iar cele care au fost stimulate i reacioneaz fa de un anumit Ag, se numesc
celule angajate, Ag-reactive.
Funcia limfopoietic a organelor limfoide primare este condiionat de popularea lor cu celule tinere,
imature, progenitoare, derivate din celulele su, matc sau stem, de la nivelul mduvei osoase. Organele
limfoide secundare sunt populate cu celule limfoide educate n cele primare.
27
29
Fig. 20: a) Etapele diferentierii (ontogenia) LB (dupa Zarnea, 1990). b) Reprezentarea schematic a unui plasmocit.
30