. LP 11.

Diagnosticul de laborator în amibiază, lambliază,

trichomoniază si criptosporidioză

OBIECTIVE: la sfarsitul lucrarii practice studentii trebuie sa cunoasca:

1. Diagnosticul de laborator in amibiaza, lambliaza, trichomoniaza si criptosporidioza.

1. Diagnosticul de laborator in amibiaza

Agentul etiologic: Entamoeba histolytica (Entamoeba dysenteriae)

Morfologie : trofozoit, prechist, chist

Entamoeba histolytica chist – Entamoeba histolytica trofozoit-

preparat nativ cu ser fiziologic preparat nativ cu Lugol
(Sursa: https://www.cdc.gov/dpdx/amebiasis/index.html)

1.Forma vegetativă-trofozoit, patogenă:

-măsoara 20–40μm;
-este foarte mobilă (prin emiterea a numeroase pseudopode);
-histolitică (enzimele proteolitice, se înfundă în grosimea peretelui
colic, provocând microabcese ce pot conflua).
-citoplasma este diferenţiată în două zone:
-ectoplasma hialină (formeaza pseudopode) şi
-endoplasma granulară, care contine:
-hematii, produse ingerate (bacterii);
-nucleul - sferic, situat excentric, are un cariozom central cu granule
de cromatina dispuse uniform de-a lungul peretelui nucleului;

2. Chist :
-măsoara 10-15 μm diametru;
-este sferic, înconjurat de un perete gros şi rezistent;
-chistul matur (infectant) are 4 nuclei;
1
 -se elimină prin materiile fecale;
-este forma de rezistenţă şi de diseminare în mediul extern.

Produs patologic : materii fecale, fragmente de biopsie

Colectarea si transportul probelor
Diagnostic direct : identificarea parazitului
Examen microscopic :
- Preparat nativ cu ser fiziologic/ Lugol
- Frotiu colorat Giemsa ; Forma vegetativa (trofozoit): se intalneste numai in dizenteria
acuta;
o Citoplasma este diferentiata in doua zone : ectoplasma hialina colorata in
albastru si endoplasma granulata, care contine vacuole si hematii in diferite
stadii de digestie, colorate portocaliu;
o Nucleul este rotund, situat excentric, cromatina nucleara este dispusa regulat,
sub forma de granule fine, pe marginea interna a membranei nucleare.
- Preparate obtinute prin metode de concentrare
Examen histopatologic-evidentierea abcesului in ‘’buton de camasa’’ (ulcer cu margini
neregulate), bine dezvoltat in profunzime si ingust spre suprafata, plin cu exudat galben-
negricios.
- detectarea antigenelor in materiile fecale.

Diagnostic indirect : in amibiaza extraintestinala/viscerala

- detectarea anticorpilor specifici (ELISA, RHAI).

2. Diagnosticul de laborator in lambliaza

Agentul etiologic: Giardia intestinalis (Giardia lamblia, Lamblia intestinalis)

Morfologie: trofozoit si chist

2
 Giardia intestinalis chist- Giardia intestinalis trofozoiti-
preparat cu solutie Lugol frotiu colorat Giemsa
(Sursa: https://www.cdc.gov/dpdx/giardiasis/index.html)

Trofozoitul:
- măsoară 15 µm lungime şi 10µm lăţime;
- corpul: piriform
o faţă dorsală bombată, rugoasă, cu numeroase depresiuni;
o faţă ventrală, plată.
- faţa ventrală prezintă:
o 2 nuclei anteriori;
o 4 perechi de flageli cu originea în 8 blefaroplaşti:
 flagelii anteriori, posteriori şi caudali părăsesc parazitul prin regiunea
anterioară, posterioară, caudală
 flagelii ventrali sunt situaţi pe faţa ventrală a parazitului
o corpi parabazali semilunari;
o dublu axostil median.
Chistul:
- oval, 9-15 μ;
- perete dublu;
- 2 sau 4 nuclei la extremităţi;
- resturi de flageli în formă de litera S, dispuşi înaxul chistului.

Produs patologic : materii fecale, lichid duodenal, fragmente de biopsie

Colectarea si transportul probelor
Diagnostic direct: identificarea parazitului
 In materii fecale: chisti in scaunul format, trofozoiti in scaune diareice; se repeta
examinarea de 4-5 ori la intervale de 7-10 zile
o preparat nativ cu ser fiziologic/ Lugol

3
  In lichidul duodenal (enterotest) sau biopsie intestinala: trofozoiti
o frotiu colorat Giemsa
Detectare de coproantigene specifice (ELISA)

Diagnostic indirect:
Detectarea de Ac specifici- in sange, saliva, secretii intestinale

3. Diagnosticul de laborator in trichomoniaza

Agentul etiologic: Trichomonas vaginalis

Morfologie: trofozoit

Trichomonas vaginalis trofozoit- coloratie Giemsa

(Sursa: https://www.cdc.gov/dpdx/trichomoniasis/index.html)

Trofozoitul:
- ovalar, masoara 15μ lungime, 7μ lăţime;
- extremitatea anterioară lăţită, cea posterioară efilată;
- în regiunea anterioară prezintă:
o un nucleu cu 5 cromozomi;
o un complex chinetostomal din care pleacă:
o 3 – 5 flageli
 4 părăsesc anterior celula
 1 recurent – parţial fixat pe membrana ondulantă
o 1 axostil cu rol în susţinere
 străbate longitudinal celula, exteriorizându-se prin extremitatea
posterioară
o paralel cu membrana ondulantă există o formaţiune intracitoplasmatică numită
costa

4
Produs patologic: secreţie vaginală sau uretrală
 la femeie: se recolteaza secretia vaginala din fundul de sac posterior sau lateral (se
recomanda ca recoltarea sa se efectueze in primele 4-5 zile postmenstrual, cand
parazitii se gasesc in faza de maxima multiplicare);
- secretia vaginala se poate recolta cu ajutorul unei spatule sau a unui tampon de vata,
fixat la capatul unei baghete, care apoi se introduce intr-un tub, continand solutie de
glucoza 5% in ser fiziologic.
 la barbat: se recolteaza secretia uretrala, obtinuta prin masajul prostatei sau urina.

Diagnostic direct:
- preparat nativ cu ser fiziologic
- frotiu colorat Giemsa: trofozoitul poate fi sferic, oval sau neregulat;
- citoplasma albastra, are un aspect vacuolar cu fine granulatii de culoare rosie;
- nucleul este mare, rosu-violet, situat anterior;
- axostilul (elementul care permite diferentierea de celulele epiteliale) si
flagelii se coloreaza in rosu carmin.
- cultivarea pe medii nutritive – la persoane asimptomatice
- identificarea antigenelor specifice in secretii vaginale, uretrale, urina (reacţie de
aglutinare, RIF, IDR, ELISA)

4. Diagnosticul de laborator in criptosporidioza

Agentul etiologic: Cryptosporidium sp.

Morfologie: trofozoit si oochist

Criptosporidium sp. oochist- coloratie Ziehl Neelsen modificata

(Sursa: https://www.cdc.gov/dpdx/cryptosporidiosis/index.html)

5
Trofozoitul:
- masoara intre 2-5µ in diametru;
- este forma vegetativa;
- se localizeaza in marginea in perie a celulei epiteliale intestinale, intracellular.

Oochistul:
- 4-5µ in diametru;
- este sferic-ovoid;
- este inconjurat de un perete gros;
- contine 4 sporozoiti in forma de corn si o masa de reziduri granulare.

Produse patologice: materii fecale

Diagnostic direct:
Examen microscopic: evidentierea oochistului
- Preparat nativ cu ser fiziologic
- Frotiu- coloratie Ziehl Neelsen modificata
- Examen histopatologic al biopsiei duodeno-jejunale
- detectarea coproantigenului specific pentru oochist (EIA)

La lucrarea practica studentii vor observa:

1. Entamoeba histolytica chist – preparat nativ cu ser fiziologic (planse)
2. Entamoeba histolytica trofozoit- preparat nativ cu Lugol (planse)
3. Giardia intestinalis chist- preparat cu solutie Lugol
4. Giardia intestinalis trofozoiti- frotiu colorat Giemsa (planse)
5. Trichomonas vaginalis trofozoit- coloratie Giemsa
6. Criptosporidium sp. oochist- coloratie Ziehl Neelsen modificata (planse)

Bibliografie:
Luca Mariana. Parazitologie si Micologie medicala. Editura UMF. Iaşi, 2005, pag 39-45,
64-67, 57-61, 127-130.