Dr.

Ariela-Ligia OLTEANU
 Proliferarea de celule mieloide maligne(clonala) cu
conservarea unei maturatiei (cel putin in faza cronica)
 Clasificare: WHO
policitemia vera PV
leucemia granulocitara(mieloida) cronica Ph+
LGC/LMC
leucemie cronica cu neutrofile
sindromul hipereozinofilic
trombocitemia esentiala(hemoragica) TE/TH
metaplazia mieloida cu mieloscleroza (mielofibroza
primara) MMM/MP
sindroame mieloproliferative neclasabile
 Din 2008 in clasificarea WHO: PV, MP,TE ,(Ph-)se
clasifica cu denumirea de neoplasme
mieloproliferative
 a. Faza cronică:
Leucocitoză cu formulă leucocitară Sânge şi/sau M.O.*)
deviată la stânga
Bazofilie absolută (<20%) Bl < 15%
Monocite < 3% Bl + Pro < 30%
Trombocite  400.000 /mmc
Modificări displazice minime /
absente
Mitoze Ph+: 100%
Mutaţie BCR/ABL+
Index FAL

. Faza accelerată:  Sânge şi/sau

Anemie şi trombocitopenie
Trombocitoză rebelă
Displazii celulare
Mielofibroză gr.I / II
Splenomegalie progresivă rebelă
Febră neinfecţioasă
M.O.*)
 Bl < 15-29%
 Bl + Pro  30%
 Bazofile  20%
 c. Faza blastică:
Sânge şi/sau M.O.* )
 Febră > 380C, peste 7 zile
Bl > 30%
 Deficit ponderal > 10%
 Creşterea splinei cu 25%
 Fibroză reticulinică în M.O.
 Anemie, trombocitopenie
 Anomalii citogenetice
adiţionale
 Tumori blastice extramedulare

După:
1. Butoianu E, Niculescu-Mizil E, în Tratat de Medicină Internă
(Hematologie,
vol.II), sub redacţia R. Păun (Edit. Medicală – Bucureşti), 1999, p.
133.
2. Kantarjian H & colab, N.E.J.M., 2002, 346, 645*)
 Cromozomul Philadelphia(Ph1) este prezent in 95% din
cazurile de LGC (prima anomalie cromozomiala
identificata in cancer)
 Este o anomalie citogenetica clonala, castigata,
rezultatul unei translocatii reciproce, echilibrata, intre Cr
9 si Cr22
t(9:22);schimb de material genetic intre bratele lungi
ale cromozomilor 9 si 22
 Anomalia moleculara : juxtapunerea situsului oncogenic
Abelson(abl) situat pe Cr 9 si a regiunii”major
breakpoint cluster region”(bcr) de pe Cr 22
 Gena de fuziune, hibrida, rezultata bcr/abl duce la
sinteza de unui ARN mesager chimeric si la o activitate
kinazica crescuta
 Proliferarea clonei bcr/abl antreneaza o expansiune a
compartimentului mieloid si supresia hematopoiezei
normale
 Tehnica:
celulele medulare, recoltate prin aspirat
medular,sunt cultivate 48-72 ore pentru a
obtine un numar important de celule in
mitoza;
sunt blocate apoi in metafaza, cu colchicina,
dupa microfotografiere cromozomii fiecarei
perechi(1-23) sunt etalati pentru a fi analizati
in raport cu un cariotip normal
 Celule Leucemice la diagnosticarea LMC 1: ≥1012
RASPUNS HEMATOLOGIC COMPLET (CHR):
- Normalizare completa a indicilor hematologici
cu nr. leucocite < 10 x 109/L
- nr. trombocite < 450 x 109 /L
- Fara celule imature : mielocite,
promielocite sau blasti in sangele periferic
- Fara semne si simptome ale bolii, fara splenomegalie

RASPUNS CITOGENETIC COMPLET (CCYR)2:

Fara metafaze Ph+
RASPUNS MOLECULAR MAJOR (MMR)3:
Reducere ≥ 3-Log
RASPUNS MOLECULAR COMPLET (CMR)4:
Transcripti BCR-ABL
nedetectabili
 Southern-blot ; utilizarea unei sonde specifica
pt bcr
 Hibridizarea in situ cu fluorescenta FISH
 PT-PCR : dupa extractia ARNm, ARN-ul este
retro-transcris cu ajutorul revers transcriptazei
in ADNc simplu catenar specific pt bcr/abl;apoi
se efect PCR
 Punerea in evidenta a unui transcript de
fuziune prin PCR este un element capital pentru
diagnostic si pentru supravegherea pacientului
 D
ian
got
sc
i s
Speed Flexibility Safety Reliability Success Components
 IZOLARE ARN
2x107 celule

IZOLARE CU TRIzol
METODOLOGIA LIGHTCYCLER PCR CALITATIV MULTIPLEX
RQ-PCR PCR
Nr copii Bcr/Abl Tipuri de transcript