DIAGNOSTICUL DE LABORATOR

ÎN LEUCEMIILE ACUTE LIMFOBLASTICE

DR. CRISTINA MAMBET

 LEUCEMIA ACUTĂ LIMFOBLASTICĂ (LAL)

▪ Afecțiune clonală caracterizată prin proliferarea aberantă de

precursori limfoizi, cu acumularea acestora în măduva osoasă
(MO), sânge și alte organe

▪ Cel mai frecvent tip de cancer în populația pediatrică

(curabil în >90% din cazuri)

▪ Adult: rata de vindecare <40%, dar este îmbunătățită recent prin

identificarea corectă a pacienților cu risc ↑ și aplicarea de terapii
noi

▪ Copii: B-ALL (85%), T-LAL (15%)

Adult: B-ALL (75%), T-LAL (25%)
 CLASIFICAREA OMS 2016
Leucemie/limfom limfoblastic B
Leucemie/limfom limfoblastic B, fără alte specificări (NOS)
Leucemie/limfom limfoblastic B cu anomalii genetice recurente
Leucemie/limfom limfoblastic B cu t(9;22)(q34.1;q11.2); BCR-ABL1
Leucemie/limfom limfoblastic B cu t(v;11q22.3); rearanjări KMT2A (MLL)
Leucemie/limfom limfoblastic B cu t(12;21)(p13.2;q22.1); ETV6-RUNX1
Leucemie/limfom limfoblastic B cu hiperdiploidie
Leucemie/limfom limfoblastic B cu hipodiploidie
Leucemie/limfom limfoblastic B cu t(5;14)(q31.1;q32.3); IL3-IGH
Leucemie/limfom limfoblastic B cu t(1;19)(q23;p13.3); TCF3-PBX1
Entitate provizorie: Leucemie/limfom limfoblastic B, BCR-ABL1-like
Entitate provizorie: Leucemie/limfom limfoblastic B cu amplificarea
intracromozomială a cromozomului 21

Leucemie/limfom limfoblastic T
Entitate provizorie: Leucemia limfoblastică cu precursor T timpuriu
Entitate provizorie: Leucemie/limfom limfoblastic cu celulă NK
 ANOMALIILE GENETICE ÎN LAL

▪ Gene de fuziune care rezultă în urma rearanjărilor

cromozomiale
(translocații) detectate prin FISH și RT-PCR (transcripții de
fuziune)

▪ Alte anomalii: deleții sau mutații punctiforme

▪ Anomalii ale genelor implicate în diferențierea limfocitelor B

(IKZF1, PAX5)

▪ Locusul CDKN2A (gene implicate în controlul ciclului celular)

inactivat prin deleții homozigote la 70% din pacienții pediatrici
cu LAL-T

▪ Anomalii în controlul epigenetic

 CLASIFICAREA LAL (FAB)
- Introdusă în 1976 pe baza examenului morfologic și colorațiilor
citochimice

- Nu prezintă semnificație clinică

- Nu se corelează cu datele imunofenotipării

- FAB-L3 (LAL/limfom Burkitt): nu mai este considerată LAL

(variantă leucemică de limfom cu celulă B matură)

- Blaștii sunt MPO negativi; limfoblaștii B pot fi pozitivi la

colorația periodic acid-Schiff (PAS)
 LAL L1(FAB)
Blaști mici, cu raport nucleo-citoplasmatic crescut, nucleu rotund sau
incizat, nucleoli indistincți (85% din LAL pediatric)
 LAL L2(FAB)
Blaști mari, heterogeni, citoplasmă moderată, adesea intens bazofilă,
vacuole în număr variabil, nucleu incizat sau indentat, nucleoli mari
(predomină în LAL la adult)
 LAL L3(FAB)
Blaști mari, cu raport nucleo-citoplasmtic crescut, citoplasmă intens
bazofilă, intens vacuolizată (vacuole mici care pot acoperi nucleul)
 LAL-B COLORAȚIA PAS

Pozitivitate PAS – inele sau grămezi de material amorf de culoare

roșie (indică prezența de glicogen citoplasmatic)
 IMUNOFENOTIPAREA LAL-B

CLASIFICAREA IMUNOLOGICĂ LAL-B

1. B I/pro-B/early B: CD10− CD20−, cyIgM−, sIg−

2. B II/common/early B: CD10+, CD20+/−, cyt.IgM−, sIg−

3. B III/pre-B: CD10+, CD20+/−, cyt.IgM+, sIg−

4. B IV/ B matur: Tdt+/−, CD10+/−, CD20+, cyt.IgM−, sIg+

(κ or λ)
 IMUNOFENOTIPAREA LAL-T

CLASIFICAREA IMUNOLOGICĂ LAL-T

1. Pro-T (T-I) pozitiv doar pentru CD7

2. Pre-T (T-II) pozitiv pentru CD2 și/sau CD5 și/sau CD8

3. T cortical (T-III) pozitiv pentru CD1a (indiferent de alți

markeri)

4. T matur (T-IV) pozitiv pentru CD3 de suprafață și negativ

pentru CD1a (indiferent de alți markeri)
 LAL-B CU CROMOZOM PHILADELPHIA

- Aproximativ 1/4 din LAL la adult; 3-5% din ALL pediatrică

- Evoluție clinică agresivă, răspuns slab la chimioterapia standard,

risc ↑ de recădere

- Asociază mai frecvent organomegalie sau afectare SNC comparativ

cu alte LAL-B

- Fără caracteristici morfologice distincte

- Frecvent - anomalii citogenetice suplimentare

- Introducerea inhibitorilor de tirozin-kinază a îmbunătățit

prognosticul
 CAZ CLINIC

F, 45 ani

- Debut insidios cu stare subfebrilă și dureri osoase

- Examen clinic: paloare, peteșii, fără adenopatii sau splenomegalie
- Analizorul nu a indicat formula leucocitară

RBC 2.05 x 10^12/L ↓

HGB 6 g/dL ↓
HCT 19.5 % ↓
MCV 89.5 fL
MCH 32.9 pg
MCHC 34.2 g/dL
WBC 7.1 x 10^9/L
PLT 34 x 10^9/L ↓↓
 FROTIU DE SÂNGE PERIFERIC

- Frotiu de sânge periferic:

Blaști 46%
Neutrofile segmentate 12%
Limfocite 42%

- Morfologie blaști:

Blaști heterogeni ca mărime,

raport nucleo-citoplasmatic crescut,
citoplasmă bazofilă cu câteva vacuole,
agranulară, nuclei cu unul sau mai muți
nucleoli mari
 FROTIU ASPIRAT MEDULAR

Infiltrat cu celule blastice 90%

Suspiciune leucemie acută limfoblastică (LAL) L2 (FAB)
 CAZ 4 - IMUNOFENOTIPARE

MARKERI DE IMATURITATE: CD34-/+ (expresie heterogenă), HLA-DR+

MARKERI DE CELULĂ B: CD19+, CD10+/CALLA+, CD20+, cytoCD79a+, cyt.IgM−, sIg−

MARKERI DE CELULĂ T: CD3-, CD4-, CD5-
MARKERI DE SUPRAFAȚĂ – ANTIGENE MIELOIDE: CD13-, CD33-, CD117-

LEUCEMIE ACUTĂ LIMFOBLASTICĂ (LAL) CU CELULĂ B (COMMON ALL)

 CAZ 4 – CITOGENETICĂ

TRANSLOCAȚIE t(9;22)(q34;q11)
TRANSCRIPȚII DE FUZIUNE BCR-ABL1
 DETECTIE BCR-ABL1 PRIN RT-PCR

Detectare transcript de fuziune BCR-ABL1 de tip minor (m-BCR) e1a2

CLASIFICARE OMS 2016
LEUCEMIE ACUTĂ LIMFOBLASTICĂ B CU t(9;22)(q34.1;q11.2);BCR-ABL1
 LIMFOCITOZA REACTIVĂ

LIMFOCITE REACTIVE – celule stimulate imunologic, cu

citoplasma bazofilă (pe margini), cu nucleu cu contur neregulat,
posibil cu aspect clivat
Nume alternative: imunocite, virocite, variante de limfocite

Diferențiere de LIMFOBLAST – raport nucleo-citoplasmatic ↑,

cromatina fină, cu nucleoli

Cauze de limfocitoză reactivă

- infecții virale: EBV, CMV, hepatite virale acute, rubeolă
- infecții bacteriene: infecția cu Bordetella pertussis, Bartonella
henselae, TBC
- parazitoze: toxoplasmoza
- boli autoimune
 MONONUCLEOZA INFECȚIOASĂ

Limfocite “atipice “ – citoplasma abundentă, margine bazofilă, nucleu cu

nucleoli, contact cu eritrocitele din jur
INFECȚIA CU BORDETELLA PERTUSSIS

Limfocite cu nucleu convolut și clivat

LIMFOCITE REACTIVE