INVESTIGAREA

TULBURARILOR
ECHILIBRULUI
LEUCOCITAR
 Plasma

LIMFOCITE
Sange
HEMATII MONOCITE
Elemente
celulare/figurate LEUCOCIT NEUTROFIL
E E
TROMBOCIT EOZINOFIL
E E
BAZOFILE
Leucocitele - Provin din celulele stem hematopoetice

Neutrofilele:
Dpdv morfo- Sunt primele celule care ajung in focarul inflamator si
tinctorial realizeaza fagocitoza

Eozinofilele:
Sunt celule fagocitante echipate enzimatic si energetic in acest
PMN (granulocite) sens;

Bazofilele:
Se degranuleaza si elibereaza heparina (intervine in
Mononucleare hemostaza), histamina si serotonina (ambele actioneaza asupra
(agranulocite) vaselor si au efect chemotactic asupra eozinofilelor)
 Limfocite

• Au rolul de a recunoaste Antigenul (Ag) datorita receptorilor

specifici, de a interactiona cu acesta si in final determinand
distrugerea acestuia;

• Exista 2 populatii limfocitare (T si B) ce au implicatii diferite in

Mononucleare reactia imuna;
(agranulocite)

Monocite

• O data ajunse in tesut din sange devin active dpdv functional

• Rol:
• Aparare impotriva unor clase de microorganisme;
• Indepartarea unor celule lezate;
• Reglarea functiilor limfocitelor. 
 Teste de screening

Teste analitice

Metode citochimice si
citoenzimatice

Leucemii
 Teste de screening
Numararea
leucocitelor

Leucograma

Formula
leucocitara
 Numararea leucocitelor
• Se realizeaza cu ajutorul analizorului automat prin metoda
citometriei in flux cu fluorescenta:

• Liza hematiilor
• Colorarea leucocitelor cu o substanta fluorescenta cu afinitate
pentru acizii nucleici

• Numararea manuala (doar in caz de nr prea mic sau prea mare de

leucocite)

VN: Leucopenie
Leucocitoza 4 000 – 9 000
/ mmc
 Numararea manuala
Instrumente
 Pipeta Potain cu bila alba (pentru leucocite) Tehnica
 Lichid de dilutie Tȕrck  Se aspira sange cu ajutorul pipetei Potain pana la
 Camera de numarat Burker - Tȕrck diviziunea 0,5

 Sange  Apoi se aspira lichid de dilutie Tȕrck pana la diviziunea 11

(se realizeaza o dilutie de 1/20 – o parte sange si 20 de parti
lichid de dilutie)
Nr. de leucocite: M x 10 x 20 = M x 200  Se agita pipeta 3 minute
 Se arunca primele 2-3 picaturi
 Se umple camera de numarat Burker-Tȕrck
VN : adult : 4 000 – 9 000 / mm3
 Se numara 4 patratele de 1 mm2 din cele 4 colturi ale
camerei (patrate delimitate de linii triple cu latura de 1 mm2)
Variatii : = 4 mm2
- Peste = leucocitoza  Se face media aritmetica (M) a numerelor obtinute; ptr
- Sub = leucopenie calcularea nr de leucocite/mm3 se va face corectia de inaltime
(1/10) si de dilutie (1/20) 
 Variatii :
VN : adult : 4 000 – 9 000 / mm3 - Peste = leucocitoza
- Sub = leucopenie

LEUCOCITOZA
> 10 000/mm3 (adult)

Sarcina
Stres (eliberarea de epinefrina)
Fiziologic
Efort fizic intens
Hemoconcetratie
 
Inflamatii
Patologic
Etiologie infectioasa
 REACTIA LEUCEMOIDA
Def: crestere masiva a nr de leucocite, tabloul hematologic sugerand leucemie, dar neexistand
aceasta afectiune

Caracteristici: reactie benigna

Etiologie: stimularea maduvei osoase de catre toxine bacteriene, virusuri, toxine chimice

Diagnostic diferential: leucemia mieloida cronica (LMC)

Reactie leucemoida
Reactie de aparare, reversibila
Nr leucocite : 30 000 – 60 000 / mm3
Absenta bazofilelor in formula leucocitara
Nr redus de neutrofile imature in periferie
LMC
Afectiune maligna, ireversibila
50 000 – 500 000 / mm3
Prezenta bazofilelor in formula leucocitara
Nr crescut de neutrofile imature, cu predomonanta
formelor intermediare

Fosfataza alcalina leucocitara crescuta Fosfataza alcalina leucocitara scazuta sau absenta

Vitamina B12 (nivel seric) normal / usor crescut Vitamina B12 (nivel seric) – mult crescut

Absenta cromozomului Philadephia Prezenta cromozomului Philadelphia

Celule fara atipii Celule cu atipii
 LEUCOPENIE
< 4 000 / mm3 de leucocite din sangele periferic (adult)

Cauze

Surmenaj fizic
Fiziologice
Batrani
 
Radiatii
Cistostatice
Inhibitie medulara
Antibiotice
Patologice virusuri
 
Distrugere Boli autoimune
exagerata Hipersplenism
 FORMULA LEUCOCITARA (FL)

- Este efectuata automat de catre analizor

Caracteristici
- In caz de nr prea mare sau prea mic de leucocite sau
prezenta de celule anormale semnalizate de analizor (prin
anumite mesaje de avertizare) sau esecul analizorului de a
indica formula leucocitara se va efectua manual FL

FL
manual 
Numararea va fi microscopica:
• frotiu de sange venos (recoltat pe EDTA deoarece heparina poate
produce deformari ale leucocitelor)
sau
• frotiu de sange capilar

 𝒏𝒖𝒎𝒂𝒓𝒖𝒍 𝒅𝒆 𝒍𝒆𝒖𝒄𝒐𝒄𝒊𝒕𝒆 𝒅𝒊𝒏 𝒔𝒂𝒏𝒈𝒆𝒍𝒆 𝒑𝒆𝒓𝒊𝒇𝒆𝒓𝒊𝒄 𝒅𝒖𝒑𝒂 𝒏𝒖𝒎𝒂𝒓𝒂𝒓𝒆𝒂 𝒂 𝒄𝒆𝒍 𝒑𝒖𝒕𝒊𝒏 𝟏𝟎𝟎 𝒅𝒆 𝒆𝒍𝒆𝒎𝒆𝒏𝒕𝒆
𝟏𝟎𝟎
 Particularitatile leucocitelor observate la examinarea cu
FORMULA microscopul optic si a obiectivului cu imersie a frotiului de sange
LEUCOCITARA (FL) periferic colorat panoptic (tehnica May Grunwald-Giemsa):

Granulatii diferite ale PMN

(granulocite):

Neutrofile: BRUNA

Eozinofile: PORTOCALIU

Bazofile:
ALBASTRU INCHIS

Citoplasma:

PMN: ROZ

Limfocite si Monocite:
ALBASTRA

Nucleii de culoare violacee: polinucleare si mononucleare: monocite si limfocite

 FORMULA LEUCOCITARA (FL)

  Valori normale Adult (4000 – 9000 / mm3)

Neutrofile nesegmentate 1 – 4%
Neutrofile segmentate 50 – 70%
Eozinofile 1 – 4%
Bazofile 0 – 1%
Limfocite 20 – 40%
Monocite 4 – 8%

 Valoarea absoluta a tipului de leucocite :

Exemplu :
- Nr total de leucocite = 6000 / mm3  Val absoluta =
- Limfocite = 25%
VARIATIILE PATOLOGICE
ALE
FORMULEI LEUCOCITARE
 Leucocitoza + neutrofilie
Bacteriene (in special)
Infectii localizate /
Fungice
generalizate
Parazitare

LMC (leucemie mieloida cronica) 

Pulmonare
Gastrice
Afectiuni mieloproliferative Neoplasme
Neutrofilia Uterin
Pancreatice
Corticoterapie

valoare absoluta Infarct miocardic  

> 6500 / mmc Arsuri
Poliartrita reumatoida
LES
Inflamatorii
Bolile de colagen Sclerodermia
Dermatomiozita
Periartrita nodoasa
Stari de hipersensibilitate

Hipertiroidism
Afectiuni endocrine sau
Cetoacidoza diabetica
metabolice
Intoxicatie acuta
 
Hemoragie sau hemoliza Ac  
 Cauze
Neutropenia Citostatice – ag alkilanti
AINS – fenilbutazona
valoare absoluta Medicamentoasa Anticonvulsivante
< 1500 / mmc Antitiroidiene
Fenotiazine
 
Cele mai frecvente cauze (mecanism: actioneaza prin
< 500 / mmc Mononucleoza infectioasa
inhibitia sintezei medulare a neutrofilelor)
Gripa
Rujeola
Infectii virale Rubeola
Varicela
Neutropenie Hepatita
severa SIDA
 Deficit nutritional de acid folic si vitamina B12 (mai ales la alcoolici)
Aplazii medulare
Afectiuni Leucemii
Agranulocitoza
hematologice Limfoame
Postradioterapie
 
Afectiuni asociate cu Sarcoidoza
Granulocitopenie splenomegalia Sdr. Felty (artrita reumatoida asociata cu splenomegalia)
Eozinofilia Cauze
Trichinoza

valoare absoluta Afectiuni parazitare Giradoza

> 500/mmc Echinocoza

Astm bronsic

Cresteri usoare – moderate  Urticarie

Rinita alergica
boli alergice, iradiere Afectiuni alergice
Boala serului

Reactiile alergice medicamentoase (iod,

aspirina, penicilina)
Cresteri marcate

boli dermatologice si parazitare LMC

Afectiuni maligne Leucemia cu eozinofilie
postsplenectomie

Infiltrat pulmonar cu eozinofile (sdr Loeffler)

Sdr de hipereozinofilie
  Boli vasculare de colagen (dermatomiozita,
periartrita nodoasa)
Eozinopenia < 500 / mmc

Explicatia

scaderea mobilizarii rezervelor medulare

insotita de neutrofilia

Cauza

Stres Acut/Cronic, emotional/somatic

Scadere usoara / moderata

Cauze endocrine (exces ACTH, cortizon,
epinefrina)
Bazofilia Cauza
LMC (cel mai frecvent)  
 
> 80 / mmc Urticarie
Afectiuni alergice Ast bronsic
Soc anafilactic
 
LMC
Afectiuni proliferative Policitemia vera
Mielofibroza
 
Postsplenesctomie
Mixedem
Alte afectiuni Boala Hodgkin
Colita ulceroasa
Varicela

Bazopenia • Stari de stress

Cauze • Administrarea de corticoizi
scaderea numarului de bazofile
Limfocitoza
 Nr total de limfocite
circulante e neschimbat
> 2500 / mmc

Relativa
• Nr de globule albe e
2 scazut datorita
tipuri  neutropeniei

Absoluta • Nr de limfocite
circulante creste

Cauzele de LIMFOCITOZA
neutropenie insotite
RELATIVA 
Limfocitoza
asociaza cu o
LIMFOCITOZA crestere a
SEVERA globulelor albe
LMC
Cauza
(Leucemia
(frecventa)
Mieloida Cronica)
Limfocitoza

LIMFOCITOZA
LEUCEMIE LIMFOCITARA
CRONICA
(LLC)
LEUCOCITOZA MARCATA

LIMFOCITOZA MARCATA
BOLI INFECTIOASE
ACUTE
LEUCOCITOZA
mononucleoza infectioasa,
pertussis, limfocitoza
Limfocitoza LIMFOCITOZA USOARA 

• Rubeola
• Rujeola
Infectii virale cu exantem
• Varicela
(eritem generalizat)  • Tuse convulsiva
• Parotidita epidemica

• TBC
Infectii bacteriene cronice  • Bruceloza
• Sifilis

• Tireotoxicoza
Afectiuni endocrine  • Insuficienta corticosuprarenaliana
Limfopenia
< 1200 / mmc

scaderea nr de
Falsa granulocite

Clasificare

Reala
Imunodeficienta secundara : SIDA

Postradioterapie / indusa medicamentos:

citostatice; corticoizi
Boli maligne: aplazii medulare, limfoame

Alte afectiuni: mixedem, LES

Monocitoza
>750 / mmc

Cauza 
Endocardita bacteriana subacuta
Bruceloza
Boli infectioase Mononucleoza infectioasa (asociata cu limfocitoza)
Malarie
TBC pulmonar
 
Leucemii monocitare si mielomonocitare
Neo de ovar
Boli maligne Neo de san
Neo de rinichi
Neo de tract gastro-intestinal
 
Sarcoidoza
Boli granulomatoase Enterita regionala (b. Crohn)
Monocitopenia

valoare absoluta
< 240 / mmc

Cauze

Aplazie medulara primara sau dupa toxice medulare

• Imunosupresoare
Indusa medicamentos  • Corticoterapie
 TESTE ANALITICE

Frotiu de maduva osoasa 

Se obtine prin punctie osoase, cel mai adesea la nivelul sternului, asa numita punctie sternala

Tehnica Pe linia mediana a sternului in dreptul spatiilor intercostale

III – IV
Doar daca
• Creasta iliaca nu se poate
Alte locatii pentru punctia osoasa • Platoul tibial realiza la
• Calcaneu nivelul
sternului
Frotiu
sau
Studiul produsului Celula ptr numararea elementelor
recoltat 
sau
Se fixeaza, se include in parafina si se examineaza la microscop pe sectiuni
 Seria Aproximativ
granulocitara 2/3

VN 
a populatiei 50 000 – 80 000 / mmc Seria Aproximativ
celulare a maduvei repartizata pe serii eritrocitara 1/3
hematogene

• limfocite
• celule
Alte celule
reticulare
• megacariocite
 Aspecte patologice

Hiperplazie medulara Cresterea numarului de celule la nivel medular, predominant pe o serie

 
Hipoplazie medulara Scaderea nr de celule la nivel medualr
 

Aplazie medulara Scaderea marcata / basenta celulelor la nivel medular

Maduva bogata in limfoblasti In leucemia acuta limfoblastica

 

In leucemia acuta mieloblastica (populatia celulara normala este

Maduva bogata in mieloblasti inlocuita de celule tinere, mieloblasti)

 
Maduva plasmocitara In mielomul multiplu (plasmocitom)

 Epuizarea activitatii leucopoietice in caz de agranulocitoza (toxica, de iradiatie)

Maduva cu neutrofile nesegmentate in stari infectioase acute

 METODE CITOCHIMICE SI
CITOENZIMATICE
Cercetarea fosfatazei alcaline leucocitare
(FAL)

enzima prezenta in 10-15 % din granulatiile neutrofilelor adulte si normale

Limfocitele, monocitele, eozinofilele si celulele blastice NU contin in mod

normal FAL

FAL FAL intens pozitiv

Reactii leucemoide (infectii bacteriene grave,
stari septice)

FAL negativa sau Leucemiile granulocitare cronice

• numarul granulocitelor este mult crescut,
absenta
ele fiind adulte, dar anormale (provin din
proliferari maligne)
Cercetarea peroxidazelor
(POX)

enzime prezente in celulele seriei mieloide (granulocitare)

normale

diferentierea diferitelor tipuri de leucemii acute, pentru

stabilirea tipului de celula blastica proliferativa :

Leucemia Acuta
POX POX + Mieloblastica
(LAM)

Leucemia Acuta
POX - Limfoblastica
(LAL)
 Cercetarea prezentei
polizaharidelor: coloratia PAS

Atat glicogenul cat si alti compusi organici care contin hidrati de carbon, in
prezenta acidului periodic Schiff (PAS) vor fi prezenta o coloratie rosie aprinsa

Normal continutul in glicogen este redus in limfocitele adulte si normale

Leucemia
Reactia PAS + Acuta
Limfoblastica
(LAL)

Crescut:
Leucemiile Limfocitare Leucemia
Acute si Cronice Reactia PAS - Acuta
Mieloblastica
(LAM)
Coloratia cu negru Sudan
Principiu

colorantul are afinitate pentru fosfolipide si steroli

Leucemie Acuta vs Leucemie Acuta

Mieloblastica Limfoblastica

Coloratia cu negru Sudan

LAM: LAL:
3% din blasti se coloreaza in limfoblastii nu se coloreaza
negru Sudan
Testul esterazelor
Principiu
naftol – acetatul si derivatii sai sunt hidrolizati de esteraza celulara

TEST + Seria granulocitara

TEST - Seria monocitara

esterazo-pozitive De la M1 M3
Leucemie
Acuta M5
Mieloblastica
esterazo-negative
Leucemia Acuta Limfoblastica