Imunitatea celulară nespecifică

Sistemul imun
 Sistemul imun – sumă de celule şi molecule ce
protejează organismul de infecţii, transformări
maligne şi celule proprii transformate (non-self)
 Imunitatea:
 Înnăscută
 Celulară
 Umorală
 Dobândită
 Celulară
 Umorală
Celulele sistemului imun celular nespecific
 Fagocite:
 Neutrofilele – fagocitează
bacterii
 Macrofage - "big eaters"

 Leucocite non – fagocitare:

 Eozinofile - secretă enzime
ce omoară paraziţi
 Bazofile - conţin granule
toxice ce pot distruge
microorganisme străine.
Sunt implicate în răspunsul
alergic;
 Mastocite – asemănător
bazofilelor, conţin o varietate
de substanţe proinflamatoare
inclusiv histamină şi
serotonină;
 Limfocite NK – apărare Macrofag distrugând bacterii
antivirală, antitumorală;
Provenienţa leucocitelor din MO
Explorarea apărării imune celulare
nespecifice
 Hemoleucograma automată

 Frotiul periferic

 Testul de fagocitoză
Hemoleucograma automată
 Definiţie
 Hemograma automată reprezintă o serie de
teste folosite pentru a evalua compoziţia şi
concentraţia componentelor celulare în sânge.
Costă în efectuarea următoarelor teste: numărul
de leucocite, numărul de hematii, numărul de
plachete, măsurarea concentraţiei de
hemoglobină, clasificarea leucocitelor (formula
leucocitară), calcularea hematocritului şi a
indicilor eritrocitari MCV, MCH, MCHC.
Hemoleucograma automată
 Indicaţiile determinării:
 Investigarea cantitativă a numărului de leucocite –
imunitatea celulară nespecifică şi specifică
 Test de rutină pentru verificarea capacităţii de
transport a oxigenului
 Diagnosticul anemiei
 Identificarea persoanelor cu potenţiale infecţii
 Identificarea bolilor cronice sau acute (ex. Leucemii
acute sau cronice)
 Investigarea hemostazei – numărul de plachete
 Monitorizarea tratamentului anemiei şi a altor
afecţiuni hematologice
 Determinarea efectului chimioterapiei şi radioterapiei
asupra producţiei de celule sanguine
Hemoleucograma automată
 Parametrii hemogramei:
 WBC - White Blood Cell sau număr de leucocite
 NEU - neutrofile (număr absolut şi procent)
 LYM - limfocite (număr absolut şi procent)
 MONO - monocite (număr absolut şi procent)
 EOS - eozinofile (număr absolut şi procent)
 BASO - bazofile (număr absolut şi procent)
 RBC - Red Blood Cell sau număr de eritrocite
 HGB - hemoglobină
 HCT - hematocrit
 MCV - Mean Corpuscular Volume ( volumul corpuscular mediu)
 MCH - Mean Corpuscular Hemoglobin (hemoglobina corpusculară medie);
 MCHC - Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (concentratia medie de
hemoglobina corpusculară)
 RDW - Red Cell Distribution Width (lăţimea distribuţiei eritrocitelor);
 CV - Coeficientul de variaţie
 PLT - Platelet sau număr de trombocite
 MPV - Mean Platelet Volume (volumul trombocitar mediu)
 PDW - Platelet Distribution Width (lăţimea distribuţiei trombocitelor)
Hemoleucograma automată
 Recoltare:
 Se recoltează sânge integral venos sau capilar, pe
anticoagulantul K3EDTA (eprubete cu dop
violet).
 Probele recoltate pe heparină sau citrat de sodiu pot
fi prelucrate, însă anumite rezultate pot fi afectate
datorită utilizarii acestor anticoagulanti.
 ICSH (International Committee for Standardization in
Haematology) prevede ca probele din sânge integral
proaspăt să se prelucreaze pe parcursul a patru ore
de la recoltare.
Hemoleucograma automată
 Principii de măsurare:
 Pentru determinarea WBC şi formulei leucocitare se
foloseşte citometria în flux cu laser cu
semiconductori

 RBC şi PLT sunt numărate şi măsurate folosind

impedanţa şi focusarea hidrodinamică

 Determinarea concentraţiei de hemoglobină se face

colorimetric folosind metoda cu sodiu lauril sulfat
(SLS)
Citometria în flux

• Tehnică ce permite analiza simultană a mai multor

caracteristici celulare
• Celulele analizate se află în suspensie

• Parametrii sunt determinaţi pentru fiecare celulă în

parte

• Viteza de analiză: 200 – 30.000 celule/sec.

Citometria în flux

Parametrii determinaţi:

•Dimensiunea relativă a celulelor (FSC – Forward Scatter)

•Complexitatea structurală internă (SSC – Side Scatter)

•Emisia fluorescentă relativă

Citometria în flux
 Celulele trec în flux prin
dreptul razei laser; celula
este menţinută în axul
fluxului
 Forward scatter (“FSC”)
 Lumină transmisă prin
împrăstiere la 180°
 Proporţională cu suprafaţa
(dimensiunea) celulei
 Side scatter (“SSC”)
 Lumină refractată si
împrăstiată la 90°
 Proporţională cu
complexitatea structurală
internă a celulei
Impedanţa / Focusarea hidrodinamică
 La trecerea unei celule prin
orificiul detectorului se
produce o modificare a
impedanţei între cei doi
electrozi ceea ce generează
un impuls electric
proporţional cu volumul
celulei.
 Permite separarea corectă a
hematiilor mici de plachete
 Previne dubla numărare a
acestora
 Permite obţinerea unei
curbe de distribuţie
gaussiană pentru mărimea
hematiilor şi plachetelor.
Impedanţa / Focalizarea hidrodinamică
Determinarea concentraţiei de hemoglobină - colorimetric
folosind metoda cu sodiu lauril sulfat(SLS)
Valori normale adulţi – femei / barbati
ANALIZE VALORI U/M
ANALIZE VALORI U/M
Leucocite 3.6-10 x103/μL Leucocite 3.6-10 x103/μL
LY 20.5-51.1 % LY 20.5-51.1 %
MO 1.7-9.3 % MO 1.7-9.3 %
GR 42.2-75.2 % GR 42.2-75.2 %
BA 0-1 % BA 0-1 %
EO 0-4 % EO 0-4 %
Eritrocite 3.50-6 x106/μL Eritrocite 3.50-6 x106/μL
HGB 11-15 g/dl HGB 12-17 g/dl
HTC 36-48 % HTC 36-54 %
MCV 80-95 fl MCV 80-95 fl
MCH 27-36 pg MCH 27-36 pg
MCHC 31-36 g/dl MCHC 31-36 g/dl
Trombocite 150-450 x103/μL Trombocite 150-450 x103/μL
Aspectul hemogramei normale
Modificări ale formulei leucocitare
 Număr ↓ de leucocite  Număr ↑ de leucocite
(leucopenie): (leucocitoză):

 insuficienta / fibroza /  infecţie

aplazie medulară  leucemie
 infecţii supraadăugate  sarcină
 boli autoimune  menstruaţie
 boli cronice  efort fizic excesiv
 neoplasme  traumatisme
 malnutriţie  inflamatie
 boală Cushing
 policitemia vera
 Modificari ale formulei leucocitare
 Neutropenie- aplazie medulară,  Neutrofilie-infectii bacteriene
trat.mielotoxice, infecții severe

 Eozinopenie - administrarea de  Eozinofilie-parazitoze, alergii

corticosteroizi,arsuri, infectii
bacteriene

 Bazofilie-leucemie granulocitară
 Bazopenie - administrarea de
cronică, infectii virale
corticosteroizi
 Monocitoza-infectii virale

 Scăderea monocitelor-
administrarea de prednison  Limfocitoza - infectii virale,
leucemii limfocitare, mielom
 Limfopenie -
multiplu
imunodeficiente,radioterapie
Modificări ale formulei leucocitare - granulocitoză
Modificări ale formulei leucocitare - LGC
Frotiul periferic
 Frotiul de sânge
reprezintă modalitatea
de studiere a morfologiei
elementelor sanguine.
 Formula leucocitară
reprezintă exprimarea
procentuală a diferitelor
tipuri de leucocite.
 Examenul citologic al
frotiului sanguin
presupune colorarea
prealabilă a acestuia prin
metoda May-Grünwald-
Giemsa.
Frotiul periferic
 Examinarea microscopică a granulocitelor urmăreşte:
 Formula leucocitară (numaratoare diferenţiată)
 Anomalii morfologice
 de talie
 gigantocite
 granulocite poliploide
 nucleare
 hipersegmentare; hiposegmentare
 anomalie Pelger-Hüet
 nuclei picnotici
 nuclei inelari
 citoplasmatice
 hipo-, hiper- sau agranularitatea neutrofilelor
 granule gigante, vacuole
 granulaţii toxice
 corpi Dőhle
 Formula leucocitara

 Formula leucocitară reprezintă exprimarea

procentuală a diferitelor tipuri de leucocite.
 Valori normale:
 Granulocite 50 - 75 %
 Eozinofile 0–4%
 Bazofile 0–1%
 Limfocite 20 - 45 %
 Monocite 3 – 10 %
Frotiul periferic

Neutrofile hipersegmentate Neutrofile cu granulaţii toxice

Frotiul periferic

Neutrofile cu corpi Dőhle Anomalia Pelger - Hüet

 Eozinofil  Bazofil
Fagocitoza
 Este un proces activ, determinat de legarea receptor
mediată a agentului patogen cu emitere de
pseudopode membranare şi internalizarea acestuia.

Etapele fagocitozei
 Fagocitoza
 Procesul este nespecific la primul contact cu antigenul, prin
intermediul receptorilor CD36, indiferent de tipul agentului
patogen.

 Membranele micro şi macrofagelor conţin şi structuri receptoare

specifice pentru porţiunile Fc ale Ig (CD16, CD64), pentru factorul
C3b de complement (CD11b). În cazul unei întâlniri anterioare cu
agentul patogen are loc combinarea prealabilă a acestuia cu
anticorpi specifici şi/sau factorul C3b de complement.

Structura PMN
Testul de fagocitoză
 Testul de fagocitoză:

Nr. bacterii Intensitate Cotare leucocite Index fagocitar = nr.

bacterii x nr. cruci
0 0 3x0 0
1-24 + 4x1 4
25-49 ++ 6x2 12
> 50 +++ 12 x 3 36
Suma = 52

Interpretare:
0-10 – Test pozitiv-organism cu fagocite deficiente în procesul de
endocitoză ()
10-24 –Organism sănătos- fagocite receptive
25-49 Fagocite activate in vivo
50-75
Testul de fagocitoză:

 Fagocitoză – infecţia in
vitro cu Staphylococcus
aureus – bacterii
fagocitate, vacuole
digestive
Testul de fagocitoză:
 Celula lupică (CE) – se produce in vitro, este
exprimarea morfologică a unui fenomen imunologic.
Protocol de lucru - celule lupice
Testul de fagocitoză:

 Celula lupică (LED) –

leucocit neutrofil care a
fagocitat corp amiloid –

Elementul morfologic cel

mai valoros pentru
diagnosticul LED.