Modificarea genetic a plantelor

Intr-o lume n care creterea populaiei este accelerat (se preconizeaz c pn n anul 2050
populaia globului va numra aproximativ 10 miliarde de locuitori), iar producia agricol crete ntr-un
ritm mai lent este necesar gsirea unor soluii moderne prin care agricultura s asigure cantiti suficiente
de hran, cu o calitate corespunztoare.
Specialitii consider c pentru depirea acestor probleme, pe lng mbuntirea continu a
practicii agricole, exist dou soluii: gsirea unor surse alternative de hran (de exemplu, valorificarea
resurselor marine) sau ameliorarea plantelor prin metode biotehnologice
Prima generaie de cercetri n domeniul biotehnologiei vegetale a fost axat pe transferul de
gene n plante de interes economic care s permit obinerea unor beneficii mai mari n urma cultivrii
lor. De exemplu, au fost obinute plante rezistente la atacul unor insecte sau la aciunea unor erbicide ceea
ce a condus la reducerea pierderilor datorate buruienilor sau duntorilor precum i a cantitilor de
compui chimici aplicai culturilor de plante.
Utilizarea plantelor transgenice, limitat iniial doar la loturi experimentale, s-a extins n ultimii
ani la suprafee semnificative mai ales n SUA, Canada, Argentina, China i mai puin n Europa.
Aa cum se cunoate, plantele transgenice sunt obinute n urma experimentelor in vitro de
transfer de material genetic exogen: la nivelul lor s-au integrat n mod stabil secvene de ADN provenite
de la alte organisme, care le confer anumite nsui fenotipice noi sau modificate.
Transferul de gene la plante a devenit posibil datorit descoperirii i a utilizrii sistemului de
transformare genetic prin intermediul bacteriilor din genul Agrobacterium (A.tumefaciens i
A.rhizogenes). Rezultatele cercetrilor din domeniul geneticii vegetale, bazate n primul rnd pe folosirea
plasmidelor Ti de la Agrobacterium tumefaciens, se constituie ntr-un material faptic deosebit de bogat.
Vectorii de clonare derivai de la plasmidele Ti, tehnicile de transformare genetic, structura i
exprimarea genelor n plantele transgenice au determinat obinerea unor noi cunotine importante att
pentru cercetarea fundamental, ct i pentru mbuntirea nsuirilor unor plante de cultur.
Clonarea genelor n celulele vegetale prin utilizarea bacteriilor din genul Agrobacterium
A.tumefaciens i A.rhizogenes sunt bacterii ce triesc n sol, ele fiind capabile de a produce boli
unor specii de plante dicotiledonate i gimnosperme. S-a dovedit c tulpinile de A.tumefaciens determin
apariia unor tumori de tip "crown gall" pe tulpinile rnite ale unor plante (n special la nivelul coletului),
n timp ce tulpinile de A.rhizogenes induc formarea de rdcini adventive (de tip "hairy") la nivelul
esuturilor vegetale rnite (Figura 1).
Vectori virali
Dei se cunoate c Agrobacterium tumefaciens nu infecteaz monocotiledonatele (cu foarte rare
excepii), prin prelucrarea plasmidei Ti a ADN-T, n sensul introducerii ntre marginile acestei regiuni a
genomului virusului variegrii porumbului, sau a CaMV, s-a reuit transferul respectivelor gene la cereale.
Acest tip de infecie a primit denumirea de agroinfecie.
n ultimii ani, pentru obinerea de plante transgenice au fost testai i vectori derivai de la diferite
virusuri specifice plantelor. Dei la animale cei mai utilizai vectori sunt cei derivai de la retrovirusuri, la
plante acest lucru nu s-a realizat pentru c virusurile ce infecteaz plantele sunt mai puin cunoscute la
nivel molecular. Printre cele mai studiate virusuri vegetale se numr: virusul mozaicului conopidei
(CaMV), virusul latent al maniocului (CLV), virusul piticismului la gru (WDV), virusul mozaicului

galben al tomatelor (TGMV) etc. Mai mult, dintre virusurile vegetale, asemntoare ca organizare
retrovirusurilor animale, cel mai cunoscut este CaMV. Cu toate acestea, dei funciile genelor CaMV sunt
asemntoare celor ale retrovirusurilor, spre deosebire de acestea, ele nu se integreaz n genomul celulei
vegetale.
Un alt exemplu este cel al virusului mozaicului tutunului (VMT), virus cu genom ARN, a crui
lungime este 6,5kb, ce codific patru polipeptide: cele dou subuniti ale replicazei, o protein de nveli
i o protein important n procesul de infecie al celulelor vegetale nvecinate. Genomul viral a fost
prelucrat "in vitro", nlocuindu-se genele pentru proteinele capsidale cu gene marker a cror exprimare s-a
urmrit la plantele inoculate. Dezavantajul const n faptul c se pot transfera doar fragmente de ADN cu
dimensiuni mici.
n orice caz, chiar i n absena unor vectori derivai de la virusuri, o serie de elemente virale sunt
deja utilizate pentru construirea vectorilor de exprimare pentru celula vegetal. Este cazul promotorilor
genelor pentru ARN 19S i 35S de la CaMV care sunt foarte eficieni, mai ales pentru cereale.
Modaliti de introducere a genelor de interes n celulele vegetale
Pentru introducerea vectorilor de clonare recombinai n celulele vegetale int au fost elaborate
numeroase metode, a cror eficien variaz n funcie de specia vegetal testat sau de tipul de esut
utilizat n experimente. Dintre acestea menionm:
- metoda co-cultivrii celulelor bacteriene (A.tumefaciens sau A.rhizogenes ce conin vectorii de
clonare specifici) cu fragmente de esut vegetal (discuri foliare sau fragmente de tulpin), cu suspensii
celulare vegetale, cu protoplati vegetali, cu lstari sau chiar cu semine;
- electrotransformarea celulelor vegetale (esut intact, celule ntregi sau protoplati) folosindu-se
ADN plasmidial modificat;
- transformarea direct a protoplatilor vegetali cu ADN plasmidial purificat dintr-o gazd
bacterian; transformarea se realizeaz n prezena CaCl i a polietilenglicolului (PEG);
2
- microinjectarea ADN n celule sau n esutul conductor (macroinjectarea);
- metoda biolistic (bombardarea celulelor vegetale cu microproiectile reprezentate de particule
de tungsten sau aur coloidal acoperite cu ADN de interes);
- utilizarea lipozomilor care s asigure protejarea ADN de interes fa de aciunea nucleazelor
celulelor transformate.
Markeri genetici pentru selecia i caracterizarea celulelor vegetale transformate
Pentru a se putea evalua rapid transferul i, mai ales, integrarea genelor clonate n celulele
vegetale, este absolut necesar ca, odat cu gena de interes, n celulele vegetale s se integreze i anumite
gene marker specifice. In prezent, genele utilizate drept markeri pentru celulele vegetale transformate sunt
de dou tipuri: markeri de selecie care asigur doar diferenierea ntre celulele vegetale normale i cele
modificate genetic i markeri cuantificabili care permit i determinarea nivelului exprimrii genelor
clonate.
Dintre cele mai utilizate gene marker de selecie pentru celulele vegetale transformate
menionm: gena pentru neomicin fosfotransferaz (gena nptII ce determin rezisten la kanamicin,
gena pentru cloramfenicol-acetiltransferaz (gena cat ce confer rezisten la cloramfenicol); gena pentru
sinteza nopalinei (gena nos) sau octopinei (gena ocs); gena pentru luciferaz (gena lux ce determin
sinteza luciferazei care, n prezena substratului specific, luciferina, produce lumin; plantele transgenice
ce conin o asemenea gen au primit denumirea de plante "lampion"); gena pentru -glucuronidaza
bacterian (gena gus); gena pentru proteina cu fluorescen verde (gena gfp = "green fluorescence
protein")(Jefferson, 95 1988, Niedz i colab., 1995), n timp ce drept markeri cuantificabili pot fi utilizai:
activitatea NPT II, producerea de opine; activitaea -glucuronidazic; activitatea cloramfenicol-acetiltransferazei; activitatea luciferazic; nivelul proteinei GFP (McClean, 1998).

Selecia celulelor vegetale transformate se poate realiza, fie prin cultivarea acestora pe medii de
cultur specifice ce conin antibioticele corespunztoare (kanamicin, cloramfenicol, higromicin), prin
teste histochimice aplicate celulelor vegetale (pentru evidenierea, de exemplu, a produsului genei gus sau
a genei lux) (Figura 8) sau prin teste fluorimetrice (pentru produsul genelor gus sau gfp). De remarcat c,
vectorii de clonare cel mai recent construii conin cel puin dou gene marker.
Vectorii de clonare n celulele vegetale sunt derivai de la plasmide naturale (plasmidele Ti sau Ri
de la Agrobacterium tumefaciens, respectiv A.rhizogenes) sau de la virusuri specifice celulelor vegetale,
ce asigur funcionarea unor anumite secvene de ADN dup integrarea lor n genomul celulelor vegetale.
Ca i n cazul vectorilor pentru alte tipuri de organisme, vectorii pentru celulele vegetale sunt, de obicei,
vectori de tip navet, ceea ce nseamn c ei pot funciona n dou gazde diferite: E.coli i Agrobacterium
sp., iar anumite poriuni ale lor se exprim n celulele eucariote.
Un exemplu de asemenea vector, mult utilizat n experimentele de transfer de gene n celulele vegetale,
este pBI121 (Figura 9).
Plasmida pBI121 este un derivat al plasmidei pBin19 construit de Bevan n 1984. Ea are 13 kb i
conine o serie de elemente genetice ce i permit meninerea n E.coli i n diferite tulpini de
Agrobacterium (ori, gena de rezisten la kanamicin). De asemenea, vectorul pBI121 conine i secvene
ce sunt transferate n genomul celulelor vegetale. Acestea sunt: secvenele marginale de 25pb (derivate de
la ADN-T din plasmida Ti de la A.tumefaciens) eseniale pentru transfer, ntre care au fost clonate dou
gene marker: gena de rezisten la kanamicin (nptII) i gena ce codific sinteza -glucuronidazei (gus).
Cele dou gene marker au fost clonate sub controlul unor regiuni promotor sau terminator specifice: gena
nptII este controlat de promotorul NOS (de la gena pentru nopalin-sintetaz)(P ) i de terminatorul
1
NOS, iar gena gus se afl sub controlul promotorului 35S de la virusul CaMV (virusul mozaicului
conopidei)(P ) i a secvenei terminatoare NOS. Acest tip de vector permite sinteza de proteine de
2
fuziune prin clonarea genei de interes la nivelul MCS localizat dup promotorul 35S.
Interesul deosebit al cercettorilor pentru introducerea de gene heterologe n celulele vegetale i
pentru studiul funcionrii lor, a condus la construirea unor vectori din ce n ce mai perfecionai. Unii
dintre asemenea vectori permit exprimarea difereniat a unor gene clonate: la nivelul unor organe
specifice ale plantei sau n diferite momente ale dezvoltrii acesteia
Aplicaii ale transgenezei la plante
Speciile vegetale prezint o mare diversitate genetic, iar cele slbatice constituie un mare
rezervor genetic, din care se pot obine gene importante din punct de vedere practic. Cercetrile de
inginerie genetic la plante prezint o semnificaie teoretic deosebit, facilitnd cunoaterea modului de
aciune a genelor acestor organisme, a efectelor fitohormonilor asupra dezvoltrii plantelor, a
mecanismelor de inactivare a genelor etc. (Meyer, 1995). De asemenea, prin aplicarea tehnicilor de
biologie molecular se pot obine informaii utile asupra particularitilor genomului plantelor folosite n
ameliorare, a localizrii unor gene de interes, a gradului de nrudire dintre diferite specii etc (Gresshoff,
1994; Edwards i Karp, 1997).
n ceea ce privete aplicaiile practice, pn n prezent au fost obinute o serie de rezultate semnificative,
unele aplicate deja n practic aa cum sunt: plante transgenice rezistente la viroze; plante transgenice
rezistente la atacul unor duntori, plante transgenice rezistente la erbicide (figura 10); plante transgenice
de interes horticol (plante ornamentale cu fenotipuri noi, plante care produc fructe rezistente la nmuiere);
plante transgenice capabile s sintetizeze metabolii secundari n cantiti crescute; plante transgenice
productoare de anticorpi comestibili etc.
Protecia plantelor fa de atacul insectelor
Pierderile nregistrate anual de producia agricol global datorit atacului insectelor duntoare

sunt estimate la aproximativ 14%, n timp ce raportat la anumite specii vegetale n parte pierderile sunt
mult mai mari: 52% la gru, 83% la orez, 59% la porumb, 74% la cartof, 58% la soia i 84% la bumbac
(Oerke i colab., 1994). Insectele determin scderea produciei agricole att prin aciune direct ct i
prin aciune indirect, ca vectori ai unor fitopatogeni variai. Limitarea aciunii acestora se realizeaz prin
folosirea pesticidelor, estimate la un cost de aproximativ 10 miliarde de USD anual.
Tehnologia ADN recombinant ofer n prezent posibilitatea obinerii de noi insecticide biologice
care pstreaz avantajele agenilor biologici clasici de control avnd n plus unele caracteristici noi. Cu
toate acestea, din considerente comerciale, tehnologiile respective nu sunt accesibile tuturor utilizatorilor
posibili, mai ales dac acetia sunt sraci i, n plus au generat o serie de dezbateri publice asupra utilitii
lor, a efectelor asupra altor organisme dect cele int sau asupra mediului.
Obinerea de plante rezistente la duntori reprezint poate domeniul cel mai spectaculos al
ingineriei genetice aplicate la plante, deoarece a permis regenerarea de plante transgenice care conin
gene de origine bacterian ce le asigura protecie fa de anumite insecte duntoare. Aceasta asigur, pe
de o parte, obinerea de recolte mai bogate i, pe de alt parte, reducerea cheltuielilor fermierilor pentru
pesticide.
Plante transgenice productoare de vaccinuri comestibile sau de anticorpi
Progresele nregistrate n ultimii 10 ani n biologia molecular i n domeniul imunologiei au
permis o mai bun nelegere a numeroase boli i au condus la dezvoltarea unor strategii noi pentru
vaccinare. Una dintre direciile promitoare n acest sens este obinerea de plante transgenice n care s
se exprime gene pentru diferii antigeni. Proteinele antigenice derivate de la plantele transgenice elimin
sau previn unele boli la animale, iar n testele clinice n cazul oamenilor ele s-au dovedit a fi sigure i
funcionale (Walmsley i Arntzen, 2000). S-a dovedit c rspunsul imun al unui organism fa de un
anumit patogen poate fi indus prin utilizarea unor polipeptide similare celor din structura epitopilor
agenilor etiologici (Vior, 2000). In acest sens au fost elaborate tehnologii de obinere a vaccinurilor
subunitare care au avantajul c elimin utilizarea de virusuri vii sau de microorganisme patogene
active, dar dezavantajul c sunt termosensibile i foarte scumpe. Producerea unor asemenea vaccinuri n
plante elimin unele impedimente curente: preul de cost ar fi mic, se elimin riscul contaminrii de
patogeni animali, se asigur o stabilitate pentru produsul obinut, iar administrarea se poate face pe cale
oral i nu prin injectare. Primele testri clinice ale unui vaccin produs de plante au fost realizate n 1998,
prin demonstrarea caracterului imunogen al unui antigen bacterian recombinat produs de plante
transgenice de cartof: administrarea vaccinului comestibil a condus la inducerea unui rspuns imun la
nivelul mucoaselor (Tacket i colab., 1998).

Orezul.auriu
Deficiena de vitamina A (VAD) provoac orbirea a aproximativ o jumtate de milion de oameni,
mai ales copii, n fiecare an. Jumtate dintre ei mor n primele 12 luni de cnd au orbit i alii mor din
cauza unor boli precum malaria pentru c VAD afecteaz grav sistemul imunitar. Este rspndit n
comunitile srace care se bazeaz pe orez ca surs principal de hran din cauz c dietele lor nu conin
beta-carotenul pe care corpul trebuie s l converteasc n vitamina A.
Tehnologia modificrii genetice a fost folosit pentru crearea unei varieti numite orez auriu care
produce beta-caroten pentru c are gene din porumb i dintr-o bacterie din sol. A fost creat n comun cu
sectorul public i cu finanare comercial, iar produsul final va fi oferit guvernelor naionale pentru a fi
distribuit gratuit agricultorilor lipsii de resurse.
Orezul auriu nu este destinat s asigure ntreaga doz zilnic recomandat de vitamina A, ci s ajute la
trecerea pragului de malnutriie pentru eliminarea VAD. Unele versiuni iniiale de orez auriu au atras
criticile militanilor anti-modificare genetic, care au spus c oamenii ar trebui s consume de 12 ori mai
mult orez dect n mod normal pentru a satisface nevoile minime de vitamina A pentru un adult. Criticile

se refereau la un prototip de orez auriu modificat cu o gen de narcis, care nu era la fel de bun ca
versiunea curent de orez auriu care acum este testat n cmp nainte de lansare. Aceasta conine o gen
de porumb i are de 23 de ori mai mult beta-caroten dect nainte.
Aplicaiile pentru testrile n cmp ale orezului auriu au fost ntrziate de ctre procesul de reglementare,
conceput mai degrab pentru marile companii dect pentru micile proiecte umanitare. ntrzierile i-au
deranjat pe cercettorii din acest proiect, ns acum ei sper c orezul auriu i plantele similare cu
coninut mrit de beta-caroten precum sorgul i cartofii dulci vor contribui n curnd la eliminarea VAD.
Plantele din generaia a treia de culturi modificate genetic sunt analizate din perspectiva folosirii lor ca
fabrici pentru obinerea produselor farmaceutice i compuilor industriali regenerabili. Este cercetat, de
exemplu, producerea de vaccinuri care pot fi consumate sub form de plante ca mod de facilitare a
accesului la vaccinuri n rile unde distribuia sau refrigerarea medicamentelor este deficitar.
Dezavantajele culturilor transgenice
Dezavantajele acestor culturi se impart in doua categorii:
1. Preocuparea privind urmarile pe care le-ar putea avea folosirea aceste culturi modificate asupra
sanatatii umane. De exemplu s-a sugerat ca aceste plante transgenice ar cauza alergii, desi nu s-a
demonstrat daca ele au fost sau nu sursa acelor alergii. Mai mult, genele de rezistenta la
antibiotice pe care acestea le detin se presupune ca ar putea cauza in organism o rezistenta la
antibiotice care ar conduce la niste agenti patogeni ce nu vor putea fi omorati cu un astfel de
tratament..
2. Preocuparea privind urmarile folosirii acestor culturi asupra mediului inconjurator. Un exemplu
in acest sens il constituie polenul porumbului transgenic care are capacitatea de a omora larva
fluturelui Monarch atunci cand este imprastiat de catre vant pe alte plante, de unde poate fi
ingerat accidental de aceste larve.

Da sau nu plantelor transgenice?

In cadrul biotehnologiilor vegetale, obinerea i mai ales utilizarea practic a plantelor transgenice
constituie subiectul unor controverse att ntre diveri membri ai comunitii tiinifice ct i ntre acetia
i o serie de organizaii neguvernamentale din diverse ri. Adversarii plantelor transgenice s-au
concentrat asupra a dou direcii principale: impactul asupra omului a consumului de produse alimentare
rezultate din organisme modificate genetic (deci i din plante transgenice) i consecinele eliberrii
organismelor vegetale modificate genetic asupra mediului.
Testarea n cmp n 1986 a primelor plante transgenice i apoi extinderea i diversificarea
experimentelor cu alte tipuri de asemenea plante modificate genetic, a fost considerat de unii specialiti
i de o parte a publicului larg (mai mult sau mai puin instruit n ceea ce privete principiile tehnologiei
ADN recombinant utilizat pentru obinerea acestor organisme) drept o adevrat deschidere a unei noi
cutii a Pandorei.
Un scenariu mai recent, elaborat de unii cercettori, care ns nu se bazeaz pe dovezi concrete ci
doar pe supoziii, consider c folosirea vectorilor virali pentru transferul de gene ar face posibil
diseminarea transgenelor n natur nu numai la plante variate ci chiar i la alte organisme (de exemplu,
microorganisme patogene), acestea dobndind caractere noi (Ho, 2001). Cu toate acestea, pn n prezent

nu au fost obinute date concludente asupra existenei transferului pe orizontal a genelor exogene de la
plantele cultivate la cele de tip slbatic. Absena dovezilor din prezent nu nseamn c fenomenul trebuie
exclus; din contr, este necesar o permanent monitorizare a posibilitii diseminrii pentru a se putea
lua msurile corespunztoare dac acest lucru s-ar produce.
Cu toate acestea, indiferent de curentele de opinie potrivnice obinerii i utilizrii plantelor
transgenice, avantajele oferite de aceast tehnologie modern sunt certe. Aa cum s-a prezentat pe
parcursul acestui material, transgeneza la plante joac un rol esenial n cunoaterea i analiza genomului
vegetal, n controlul procesului de dezvoltare, n nelegerea metabolismului plantelor. De asemenea,
aplicarea tehnologiei ADN recombinant plantelor de cultur n vederea obinerii de noi soiuri cu
caracteristici utile din punct de vedere economic constituie un demers economic cu implicaii deosebite,
benefice. De altfel, perfecionarea permanent a tehnicilor moleculare aplicate, a diversificrii
cunotinelor asupra structurii i funcionrii materialului genetic constituie argumente convingtoare
pentru continuarea i aprofundarea experimentelor de inginerie genetic la plante, astfel c noile generaii
de plante transgenice obinute vor fi sigure att pentru mediul nconjurtor ct i pentru om.
Concluzie
n viitor, cercettorii sper s fie capabili s pun la dispozi ie vaccinuri i medicamente prin
intermeniul alimentelor modificate genetic care ar putea asigura medicamenta ia necesar oamenilor care
triesc n rile aflate n curs de dezvoltare, mult mai usor. Medicamentele ncorporate n hran sunt mult
mai uor de transportat i de depozitat dect cele conven ionale. Progresele realizate cu ajutorul plantelor
transgenice au i vor continua s aib un mare impact asupra vie ii oamenilor deoarece acestea ofer o
nou abordare n producerea i administrarea anticorpilor umani Genera iile viitoare de plante modificate

genetic sunt destinate a fi potrivite pentru medii dure i pentru mbuntirea coninutului de
nutrieni, producerea de ageni farmaceutici i producerea de bioenergie i biocarburani.