Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Rezumat tez
Doctorand:
Conductor tiinific:
Casoni Dorina
Cluj-Napoca
- 2010
CUPRINS
Introducere
PARTEA I
CONSIDERAII TEORETICE
1.1 Introducere..................................................................................................................................................................... 4
parametrilor de lipofilicitate
.....
11
parametrilor de lipofilicitate.....
2.3 Parametrii cromatografici de lipofilicitate n corelaia cu bioactivitatea ...
19
21
3.1 Introducere................................................................................................................... 23
CONTRIBUII ORIGINALE
Capitolul 4. Determinarea prin metode cromatografice a lipofilicitii unor compui din
clasa conservanilor alimentari ...................... 31
4.1 Introducere.......
31
36
37
38
53
68
80
83
84
86
95
5.1
Introducere ...........................................................................................................................................
95
5.2
96
5.3
5.4
Concluzii . 105
106
106
6.1
Introducere ...
6.2
107
109
114
6.3.
115
116
116
120
7.1
Introducere ...
7.2
121
7.3
145
145
146
7.4.
156
CUVINTECHEIE:
Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC)
Cromatografia pe strat subire cu faz invers (RP-TLC)
Indici de lipofilicitate
Conservani alimentari
Colorani alimentari sintetici
Analiza Componentelor Principale (PCA)
Relaiile cantitative structur-retenie/proprieti/activitate (QSRR/QSPR/QSAR)
Introducere
n general activitatea biologic i biochimic a unui compus este controlat de mai muli
factori, cel mai important dintre ei fiind lipofilicitatea care, n sens larg, este exprimat prin
logaritmul coeficientului de partiie n-octanol-ap (log P). Lipofilicitatea este definit de IUPAC
ca reprezentnd afinitatea unei molecule sau a unei grupri pentru un mediu lipofil i este n
mod normal msurat prin distribuia acesteia intr-un sistem bifazic fie lichid-lichid (coeficientul
de partiie octanol-ap) fie solid-lichid (cum este retenia n TLC sau n RP-HPLC).Aceast
proprietate particular joac un rol important att n procesele de absorbie, distribuie,
metabolism sau eliminare ct i n ceea ce privete profilul farmacodinamic i toxicologic al
compuilor [1].
Cu toate c succesul utilizrii coeficientului de partiie n relaiile structur-activitate,
structur-proprieti i structur-retenie (QSAR/QSPR/QSRR) este bine stabilit [2-4] , problema
compatibilitii rezultatelor experimentale cu cele teoretice, n ceeea ce privete lipofilicitatea
compuilor organici, rmne de un real interes [5, 6]. Datorit dezavantajelor pe care le prezint
determinarea coeficientului de partiie prin metoda clasic n plnia de separare, la ora actual,
metoda a fost nlocuit cu succes de tehnicile cromatografice: cromatografia de lichide de nalt
performan cu faz invers (RP-HPLC) i cromatografia pe strat subire cu faz invers (RPTLC). Noile tehnici cromatografice prezint o serie de avantaje cum ar fi posibilitatea estimrii
lipofilicitii compuilor cu tensiune superficial ridicat care n plnia de separare formeaz
emulsii precum i utilizarea unor cantiti foarte mici de compus sau insensibilitatea la impuriti
i la produii de degradare [7, 8]. Dei n practica cromatografic se constat frecvent abateri de
la liniaritate care pot afecta determinarea parametrilor de lipofilicitate, cromatografia de lichide
cu faz invers (RPLC) a fost propus n diferite domenii ca o metod alternativ pentru
determinarea coeficientului de partiie n-octanol-ap (log P ow ) [9-16]. Studiul privind literatura
de specialitate arat c cele mai utilizate umpluturi pentru coloanele cromatografice sunt cele
bazate pe silicagel modificat C18 (ODS RP-18, octadecil), indicii de lipofilicitate (log k w sau log
k) obinui pe astfel de coloane corelndu-se foarte bine cu valorile coeficienilor de partiie
octanol-ap [17,18].
Predicia proprietilor fizico-chimice sau biologice presupune identificarea relaiilor
dintre structura chimic i proprietatea dorit. n general, aceste relaii sunt descrise din punct de
vedere cantitativ iar pentru ca acestea s fie semnificative din punct de vedere statistic i pentru a
evita corelaiile ntmpltoare, este nevoie n general de un numr mare de parametri care s
caracterizeze proprietatea respectiv. n prezent, studiile QSRR sunt utilizate n: identificarea
celor mai importani descriptori structurali (privind proprietile); predicia reteniei compuilor
noi sau identificarea compuilor necunoscui; elucidarea mecanismelor de separare ntr-un sistem
cromatografic dat; evaluarea proprietilor (altele dect cele fizico-chimice) compuilor, cum sunt
lipofilicitatea i constantele de disociere; estimarea bioactivitii relative n cazul compuilor cu
potenial activitate biologic [19].
Modelele bazate pe relaiile dintre structur i activitatea biologic (QSAR) sau structur
i proprieti (QSPR), precum i cele bazate pe relaiile dintre structur i retenia cromatografic
(QSRR) au fost folosite pe larg, mai ales n ultimii 20 de ani, n cercetrile privind sinteza
compuilor cu proprieti dirijate, modelarea i optimizarea diferitelor proprieti pentru compuii
noi sintetizai, studiul toxicitii i, nu n ultimul rnd, n aciunile de decizie privind sntatea
oamenilor i protecia mediului nconjurtor.
Dei exist date experimentale privind lipofilicitatea unui numr de peste 18 000 de
compui organici [20], acest numr este mic n comparaie cu numrul total de compui existeni.
Lucrarea de fa are drept scop determinarea parametrilor de lipofilicitate pentru unii
aditivi alimentari sintetici (conservani i colorani) utiliznd cromatografia de lichide cu faze
inverse (pe coloan i pe strat subire) i diferite metode computaionale. Lucrarea este structurat
n dou pri, o parte teoretic i o parte experimental.
Partea teoretic, structurat n trei capitole, trateaz aspecte privind metodele
experimentale i teoretice de determinare a lipofilicitii precum i aspecte privind legtura dintre
lipofilicitatea compuilor organici i parametrii de retenie obinui n cromatografia de lichide cu
faze inverse. nformaiile prezentate n aceast parte sunt susinute de sute de referine
bibliografice din perioada ultimilor zece ani.
Partea experimental cuprinde patru capitole dedicate determinrilor, prin metode
cromatografice i computaionale, a parametrilor de lipofilicitate pentru compui din clasa
conservanilor i a coloranilor alimentari sintetici. Rezultatele cercetrilor cuprinse n aceast
parte au fost publicate n reviste de mare prestigiu din strintate i din ar.
Capitolul2
Utilizarea metodelor cromatografice n determinarea lipofilicitii compuilor organici
2.1 Utilizarea cromatografiei de lichide de nalt performan n determinarea
parametrilor de lipofilicitate
Cromatografia de lichide furnizeaz o varietate de descriptori care pot fi utilizai ca i
indici estimatori ai lipofilicitii. Dintre acetia, cei mai cunoscui se calculeaz din timpul de
retenie t r , dup urmtoarea formul:
log k = log k w - S
(2.1)
tr to
)
to
(2.2)
unde:
log k = log(
iar t 0 este timpul mort sau timpul de retenie al unui compus complet nereinut de coloan, de
obicei timpul dat de solvent sau de ctre o sare anorganic; k w este factorul de retenie isocratic k
obinut pentru o concentraie de 0% solven organic n faza mobil i se determin de obicei prin
extrapolare; S este un parametru care depinde de tria solventului organic folosit ca i
modificator i este specific fiecrui solvent n funcie de faza staionar folosit; este fracia de
volum a modificatorului organic n faza mobil [21].
Estimarea lipofilicitii pe baza factorilor de retenie izocratici (k) este preferat de unii
autori, dar de cele mai multe ori se utilizeaz extrapolarea liniar pentru a obine valorile log k w ,
acestea fiind mai reprezentative i de acelai ordin cu valorile log P ow octanol-ap. Practic oricare
dintre liniarizri poate fi aplicat, fie log k versus , fie log k versus 1/, fie 1/k versus .
Datorit dependenei valorilor log k de compoziia fazei mobile, o serie de cercettori au
ncercat gsirea unui alt parametru cromatografic care s fie mai puin dependent de condiiile de
lucru i care s poat fi universal folosit. Astfel, recent a fost introdus un nou parametru de
estimare a lipofilicitaii - indicele de hidrofobicitate ( ) ( = log k w /S) [22, 23].
Cercetri recente au artat c este posibil obinerea unor noi scri de lipofilicitate prin
aplicarea analizei componentelor principale (PCA) direct pe matricea datelor de retenie (k sau
log k) obinute pentru toate combinaiile fraciilor de metanol luate n studiu. n unele cazuri,
scorurile obinute dup prima component principal (PC1) (combinaii liniare ale indicilor de
retenie) par s fie una dintre cele mai bune soluii, ducnd la obinerea unor rezultate care sunt
puternic corelate cu valorile experimentale clasice, sau cu unele valori log P calculate. n plus, o
investigare atent a profilelor vectorilor proprii poate oferi informaii utile asupra
comportamentului cromatografic i a mecanismului de retenie al compuilor [24-26].
2.2 Utilizarea cromatografiei pe strat subire cu faze inverse n determinarea
parametrilor de lipofilicitate
1
RM log
RF
(2.6)
(2.7)
unde C este concentraia solventului organic din faza mobil iar b este panta dreptei. n multe
cazuri, panta (b) este asociat cu specificul hidrofobic al suprafeei i este considerat ca o
msur alternativ a lipofilicitii [27, 28].
PARTEA a II-a
CONTRIBUII ORIGINALE
Capitolul4
Determinarea prin metode cromatografice a lipofilicitii unor compui din clasa
conservanilor alimentari
4.1 Introducere
10
11
butilparabenul (log k w(C18 ) =3.02, log k w(C8) =3.49, log k w(CN) =1.62 i log k ow =3.57) urmat de
ceilali parabeni i de tert-butilhidrochinon (log k w(C18 ) =2.41, log k w(C8) =2.57, log k w(CN) =1.10
i log k ow (estimat) = 2.83), iar acidul 4-aminobenzoic este cel mai puin lipofil (log k w(C18 ) =
0.10, log k w(C8) = 0.73 log k w(CN) = 0.40 i log k ow = 0.83). Corelaiile ridicate dintre datele
cromatografice de lipofilicitate (log k w ) determinate pe cele patru tipuri de coloane i valorile
experimentale determinate prin metodele clasice, respectiv cu cele disponibile n literatura de
specialitate sau cele calculate cu diferite programe computaionale, sunt foarte bine illustrate n
Figura 4.2.
Paraetrii de lipofilicitate
3.50
2.50
1.50
TBHQ
PG
BP
PP
EP
MP
4ABA
4HBA
3HBA
2HBA
BA
-0.50
SA
0.50
log k w (C18)
log k w (C8)
log k w (CN)
log k w (NH2 )
ClogP
log k ow
Compui
12
Reprezentarea
cromatografic mai mult sau mai puin similar i n concordan cu polaritatea compuilor pe
toate cele patru coloane cromatografice utilizate.
Coloana cromatografic C8
0.80
1.20
1.00
0.40
log k
0.60
0.40
0.00
-0.40
0.20
0.00
PG
TBHQ
PP
BP
EP
MP
4ABA
4HBA
3HBA
BA
-1.20
2HBA
PG
TBHQ
BP
PP
EP
MP
4ABA
4HBA
3HBA
BA
2HBA
SA
-0.40
0.40
0.45
0.50
0.55
0.60
Media log k
SA
-0.80
-0.20
0.40
0.45
0.50
0.55
0.60
Media log k
Compui
Compui
(a)
(b)
Coloana cromatografic NH 2
Coloana cromatografic CN
0.40
0.40
0.20
0.00
0.00
log k
-0.20
-0.40
-0.60
-0.40
Compui
Compui
(c)
(d)
PG
4ABA
4HBA
3HBA
2HBA
-1.20
BA
TBHQ
PG
BP
PP
EP
MP
4ABA
4HBA
3HBA
BA
-1.00
0.40
0.45
0.50
0.55
0.60
Media log k
SA
-0.80
-0.80
SA
log k
log k
0.80
Figura 4.5 Parametrii cromatografici de lipofilicitate (log k) funcie de fracia de metanol pentru
13
0.40
0.45
0.50
0.55
0.60
Media log k
14
(a)
(b)
Figura 4.6 Profilul parabolic al vectorilor proprii dup k (a) i profilul liniar al vectorilor proprii
15
(a)
(b)
(c)
(d)
Figura 4.7 Harta de lipofilicitate a compuilor obinut prin reprezentarea grafic a primelor
dou componente principale ale valorilor log k pentru coloanele studiate: (a)-C18; (b)-C8; (c)CN i (d)-NH 2.
16
m k (C18)
m log k (C18)
log k w (C18)
S (C18)
o (C18)
PC1/k (C18)
PC1/log k (C18)
m k (C8)
m log k (C8)
log k W(C8)
S (C8)
o(C8)
PC1/k (C8)
PC1/log k (C8)
CLogP
log PC
log PV
log PB
MLOGP1
ALOGP1
ALOGPs
AClogP
AB/LogP
miLogP
ALogP
MLogP
XLogP2
XLogP3
Average log P
log K ow
mk
(C18)
m log k
(C18)
0.93
0.92
0.83
-0.67
-0.65
-0.92
-0.93
0.80
0.78
0.94
-0.84
-0.86
-0.88
-0.78
0.99
0.93
0.87
0.87
0.91
0.91
0.97
0.93
0.94
0.98
0.92
0.91
0.77
1.00
0.98
1.00
0.93
0.79
-0.63
-0.55
-1.00
-0.93
0.87
0.77
0.94
-0.88
-0.80
-0.95
-0.77
0.95
0.93
0.93
0.90
0.83
0.93
0.94
0.90
0.93
0.91
0.92
0.83
0.74
0.93
0.94
0.93
1.00
0.84
-0.68
-0.76
-0.92
-1.00
0.89
0.93
0.97
-0.79
-0.96
-0.94
-0.93
0.94
0.86
0.92
0.86
0.93
0.88
0.93
0.84
0.97
0.88
0.88
0.94
0.81
0.92
0.95
log k w
(C18)
0.79
0.84
1.00
-0.96
-0.43
-0.83
-0.87
0.62
0.74
0.91
-0.82
-0.86
-0.74
-0.74
0.85
0.86
0.86
0.91
0.79
0.91
0.90
0.92
0.81
0.78
0.92
0.79
0.57
0.83
0.88
S
(C18)
o
C(18)
PC1/k
(C18)
-0.63
-0.68
-0.96
1.00
0.25
0.67
0.72
-0.43
-0.60
-0.78
0.72
0.74
0.56
0.60
-0.69
-0.74
-0.73
-0.82
-0.63
-0.80
-0.76
-0.83
-0.64
-0.63
-0.83
-0.64
-0.39
-0.67
-0.73
-0.55
-0.76
-0.43
0.25
1.00
0.50
0.73
-0.71
-0.83
-0.67
0.41
0.81
0.66
0.83
-0.66
-0.48
-0.56
-0.46
-0.81
-0.49
-0.60
-0.41
-0.76
-0.60
-0.46
-0.81
-0.83
-0.65
-0.67
-1.00
-0.92
-0.83
0.67
0.50
1.00
0.92
-0.84
-0.75
-0.93
0.89
0.79
0.93
0.75
-0.94
-0.94
-0.93
-0.92
-0.81
-0.94
-0.95
-0.91
-0.91
-0.91
-0.94
-0.81
-0.72
-0.92
-0.93
17
PC1/
log k
(C18)
-0.93
-1.00
-0.87
0.72
0.73
0.92
1.00
-0.88
-0.93
-0.98
0.81
0.96
0.94
0.92
-0.94
-0.88
-0.93
-0.88
-0.93
-0.90
-0.94
-0.86
-0.97
-0.88
-0.90
-0.93
-0.80
-0.93
-0.95
mk
(C8)
0.87
0.89
0.62
-0.43
-0.71
-0.84
-0.88
1.00
0.91
0.86
-0.73
-0.81
-0.98
-0.91
0.81
0.73
0.82
0.72
0.77
0.76
0.75
0.69
0.88
0.79
0.77
0.77
0.75
0.80
0.81
m log k
C(8)
log k w
C(8)
0.77
0.93
0.74
-0.60
-0.83
-0.75
-0.93
0.91
1.00
0.89
-0.68
-0.95
-0.90
-1.00
0.80
0.70
0.81
0.73
0.87
0.75
0.76
0.68
0.90
0.74
0.75
0.87
0.78
0.78
0.83
0.94
0.97
0.91
-0.78
-0.67
-0.93
-0.98
0.86
0.89
1.00
-0.90
-0.93
-0.93
-0.89
0.96
0.92
0.96
0.92
0.90
0.96
0.95
0.93
0.97
0.91
0.96
0.90
0.82
0.94
0.98
S
C(8)
o
(C8)
-0.88
-0.79
-0.82
0.72
0.41
0.89
0.81
-0.73
-0.68
-0.90
1.00
0.70
0.82
0.68
-0.88
-0.91
-0.91
-0.88
-0.69
-0.97
-0.86
-0.94
-0.86
-0.87
-0.95
-0.69
-0.77
-0.84
-0.90
-0.80
-0.96
-0.86
0.74
0.81
0.79
0.96
-0.81
-0.95
-0.93
0.70
1.00
0.85
0.95
-0.87
-0.77
-0.85
-0.80
-0.93
-0.81
-0.87
-0.78
-0.91
-0.80
-0.81
-0.94
-0.76
-0.86
-0.89
PC1/ k
C(8)
-0.95
-0.94
-0.74
0.56
0.66
0.93
0.94
-0.98
-0.90
-0.93
0.82
0.85
1.00
0.89
-0.89
-0.84
-0.90
-0.82
-0.82
-0.86
-0.86
-0.80
-0.93
-0.87
-0.86
-0.83
-0.77
-0.88
-0.89
PC1/
log k
C(8)
-0.77
-0.93
-0.74
0.60
0.83
0.75
0.92
-0.91
-1.00
-0.89
0.68
0.95
0.89
1.00
-0.80
-0.70
-0.81
-0.73
-0.87
-0.75
-0.76
-0.68
-0.90
-0.74
-0.75
-0.87
-0.78
-0.78
-0.83
Temperatura poate avea un efect important asupra proceselor termodinamice care intervin
n mecanismul de retenie. Efectul temparaturii asupra reteniei este de importan fundamental
n cromatografia de gaze dar astfel de studii au fost realizate de asemenea att n cromatografia
de lichide ct i n cea pe strat subire. Majoritatea cercettorilor susin c n general, retenia i
selectivitatea compuilor sunt dependente de temperatur [38,39] n sensul c odat cu cresterea
temperaturii, retenia compuilor scade iar eficiena cromatografic crete. Creterea eficienei
este cel mai des atribuit scderii vscozitii fazei mobile. Pornind de la aceste considerente,
investigarea corelaiei ntre retenia compuilor n sisteme cromatografice identice dar
temperaturi diferite, este de un real interes.
n afar de temperatur, pH-ul fazei mobile joac un rol primordial asupra reteniei
cromatografice a compuilor cu proprieti acido/bazice n sensul c acesta poate afecta gradul de
ionizare n cazul compuilor ionizabili. De fapt, cand valoarea pH-ului fazei mobile este
apropiat de valoarea pK a a compusului, mici variaii de pH n faza mobil pot cauza schimbri
notabile ale timpilor de retenie [40]. Cunoaterea valorilor pK a are un rol foarte important n
interpretarea distribuiei i transportului moleculelor n interiorul organismului. Din acest motiv
trebuie luat n considerare faptul c, att valorile pK a ct i pH-ul fazei mobile, se pot modifica
odat cu adugarea unui solvent organic.
Studiul de fa are drept scop investigarea efectului temperaturii i a pH-ului fazei mobile
asupra comportamentului de retenie a compuilor din clasa conservanilor alimentari, att in
cromatografia cu faz normal ct i n cea cu faze inverse.
4.3.1 Partea experimental
Pentru investigarea influenei temperaturii asupra comportamentului de retenie al unor
conservani alimentari sintetici, s-au utilizat plci cromatografice de silicagel 60 F 254 (20cm x
20cm Merck, Darmstdat, Germania), respectiv plci RP-18W/UV 254 (20cm x 10cm, MachereyNagel, Germania). Fazele mobile au fost constituite din amestecuri de cloroform-acid acetic
(99.5%) 8:1 (v/v), respectiv metanol-ap 2:1 (v/v). Developarea plcilor s-a realizat ntr-o camer
cromatografic normal presaturat la temperatura de developare, timp de 40 de minute cu
18
vaporii fazei mobile. Temperaturile de developare de 22, 82, 172, 252, 352, 452 i
respectiv 552 0C au fost meninute constante pe durata developrii prin plasarea camerei
cromatografice nt-o etuv. Distana de developare a fost de 8 cm n fiecare caz. Dup developare
plcile au fost uscate la temperatura camerei i inspectate n lumin UV la 254 nm pentru
vizualizarea compuilor.
Pentru investigarea comportamentului cromatografic al compuilor luai n studiu, n
diferite condiii de pH ale fazei mobile, s-au utilizat trei tipuri de faze staionare chimic legate:
RP-2, RP-8 si RP-18W (toate 10cm x 10cm Merck). Developarea plcilor s-a realizat la o
temperatur de 2020C ntr-o camer cromatografic normal presaturat timp de 30 de minute
cu vaporii fazei mobile: metanol-soluie tampon 2:1 (v/v). Soluiile tampon utilizate ca i
constitueni ai fazei mobile au acoperit un domeniu foarte larg de pH ( de la pH=1 la pH=12).
4.3.2 Rezultate i discuii
Rezultatele experimentale au ilustrat un comportament regular de retenie pentru toi
compuii luai n studiu, valorile R F crescnd odat cu creterea temperaturii. n domeniul de
temperatur sczut, 2-90C nu s-au observat diferene n ceea ce priveste retenia compuilor. O
cretere liniar a valorilor R F cu temperatura a fost pus n eviden pentru toi compuii studiai
prin utilizarea cromatografiei cu faz normal la temperaturi ridicate (peste 350C). O posibil
explicaie pentru aceste liniariti n cazul anumitor compui i a neregularitii n
comportamentul altora, ar fi dependena de temperatur a presiunii de vapori a componenilor
fazei mobile.
Utiliznd cromatografia cu faze inverse, pentru compuii ionici, cum sunt acizii i srurile
acestora (acid sorbic, sorbat de potasiu, acid benzoic, benzoat de sodiu, acid salicilic, salicilat de
sodiu), s-au observat de asemenea creteri liniare ale valorilor R F cu temperatura, n intervalul 2250C. Dup aceast temperatur, n cazul compuilor ionici (acizii i srurile acestora), au fost
observate deviaii considerabile de la liniaritate, att n cazul utilizrii cromatografiei cu faz
normal, ct i a celei cu faz invers (Figurile 4.9 i 4.10). O cretere liniar (de tip Vant Hoff)
a valorilor R M cu temperatura (Figura 4.11), s-a putut stabili pentru o serie restrns de compui,
utiliznd cromatografia cu faze inverse (plci RP-18). Ecuaiile de regresie obinute (r > 0.98 n
majoritatea cazurilor) pentru astfel de compui constituie modele potrivite care ar putea fi
19
0.20
0.00
1.20
-0.20
0.80
RM
-0.60
0.40
-0.80
1/T
0.00305
0.00314
0.00324
0.00335
-0.80
0.00345
0.00305
0.00314
0.00324
0.00335
0.00345
-1.60
0.00354
-1.40
-0.40
0.00363
-1.20
0.00354
0.00
SA
KSA
BA
NaB A
2HB A
Na2HB A
3HB A
4HB A
4AB A
-1.00
0.00363
RM
-0.40
MP
EP
PP
BP
GA
PG
TB HQ
1/T
(a)
(b)
20
Plci cromatografice RP-18W
-0.60
0.20
-0.70
0.00
-0.80
-0.20
-0.90
-0.40
-0.60
RM
-1.10
-1.20
-0.80
-1.00
1/T
1/T
(a)
(b)
0.00305
0.00314
0.00324
-1.80
0.00335
-1.60
0.00345
0.00305
0.00314
0.00324
0.00335
0.00345
0.00354
-1.50
-1.40
0.00354
-1.40
-1.60
-1.20
SA
KSA
BA
NaBA
2HBA
Na2HBA
3HBA
4HBA
4ABA
0.00363
-1.30
0.00363
-1.10
-1.20
-1.30
0.00365
0.00360
0.00355
0.00350
0.00345
0.00340
-1.50
0.00335
-1.40
0.00330
RM
-1.00
SA
KS A
BA
NaBA
2HBA
Na2HBA
3HBA
4HBA
4ABA
1/T
Figura 4.11 Dependena liniar a valorilor R M n funcie de 1/T n cromatografia cu faz invers.
21
MP
EP
PP
BP
AscA
IAscA
GA
PG
TBHQ
Plci cromatograf ice RP-2
0.00
0.20
0.00
-0.20
-0.20
-0.40
-0.40
-0.60
-0.80
RM
RM
-0.60
-0.80
SA
KSA
BA
NaB A
2HB A
Na2HB A
3HB A
4HB A
4AB A
-1.00
-1.20
-1.40
6.86
11
12
MP
EP
PP
BP
AscA
IAscA
GA
PG
TB HQ
-1.00
-1.20
-1.40
-1.60
-1.80
1
6.86
11
12
0.20
0.60
0.00
0.20
-0.20
RM
RM
-0.40
-0.60
-0.80
-1.00
-1.20
1
6.86
11
12
SA
KSA
BA
NaB A
2HB A
Na2HB A
3HB A
4HB A
4AB A
-0.20
-1.00
-1.40
-0.10
0.20
-0.20
0.00
-0.30
-0.20
-0.40
-0.40
RM
RM
0.40
-0.50
-0.60
-0.70
-0.80
-0.90
4
6.86
6.86
11
12
MP
EP
PP
BP
AscA
IAscA
GA
PG
TB HQ
-0.60
11
12
SA
KSA
BA
NaB A
2HB A
Na2HB A
3HB A
4HB A
4AB A
-0.60
-0.80
-1.00
-1.20
-1.40
1
6.86
11
12
MP
EP
PP
BP
AscA
IAscA
GA
PG
TB HQ
Figura 4.12 Dependena valorilor R M funcie de pH-ul soluiei tampon utilizate n compoziia fazei mobile.
22
23
Plci cromatografice RP-18
0.80
1.40
0.40
RM
0.00
0.60
0.20
-0.40
-0.20
-0.80
-1.00
SA
KSA
BA
NaBA
2HBA
Na2HBA
3HBA
4HBA
4ABA
MP
EP
PP
BP
AscA
IAscA
GA
PG
TBHQ
-0.60
60% MeOH
65% MeOH
70% MeOH
75% MeOH
80% MeOH
Media R M
Compui
30% MeOH
40% MeOH
50% MeOH
60% MeOH
70% MeOH
Media R M
Compui
(a)
(b)
Plci cromatografice CN
1.40
1.00
0.60
RM
0.20
-0.20
-0.60
-1.00
SA
KSA
BA
NaBA
2HBA
Na2HBA
3HBA
4HBA
4ABA
MP
EP
PP
BP
AscA
IAscA
GA
PG
TBHQ
-1.20
SA
KSA
BA
NaBA
2HBA
Na2HBA
3HBA
4HBA
4ABA
MP
EP
PP
BP
AscA
IAscA
GA
PG
TBHQ
RM
1.00
30%Me O H
40%Me O H
50%Me O H
60%Me O H
70%Me O H
Me dia RM
Compui
(c)
Figura 4.14
24
-0.10
-0.20
-0.30
-0.40
-0.50
-0.60
-0.70
0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75
Fracia de metanol
RP-18
RP-18W
CN
(a)
-0.10
-0.20
-0.30
-0.40
-0.50
-0.60
-0.70
0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75
Fracia de metanol
RP-18
RP-18W
CN
(b)
Figura 4.15 Profilul vectorilor proprii (loadings) dup valorile R f (a) i respectiv R M (b).
25
3.28
2.61
1.96
1.36
0.78
0.00
-1.00
-3.00
SA
KSA
BA
NaBA
2HBA
Na2HBA
3HBA
4HBA
4ABA
MP
EP
PP
BP
AscA
IAscA
GA
PG
TBHQ
-2.00
RM0 (RP-18)
PC1/RM (RP-18)
RM0 (RP-18W)
PC1/RM (RP-18W)
RM0 (CN)
PC1/RM (CN)
ALOGPs
ACLogP
Compui
26
Tabelul 4.18 Corelaiile privind parametrii de lipofilicitate estimai pe diferite tipuri de faze staionare i valorile log P
R M0 RP-18
b-RP18
PC1/R f RP-18
PC1/R M RP-18
R M0 RP-18W
b RP-8W
PC1/R f RP-18W
PC1/R M RP-18W
R M0 -CN
b-CN
PC1/R f CN
PC1/R M CN
CLogP
log PC
log PV
log PB
log P
MLOGP1
ALOGP1
ALOGPs
ACLogP
AB/LogP
miLogP
ALOGP
MLOGP
KOWWIN
XLOGP2
XLOGP3
R M0
RP-18
1.000
-0.966
0.919
-0.919
0.968
-0.964
0.958
-0.958
0.962
-0.965
0.947
-0.954
0.925
0.831
0.804
0.922
0.855
0.871
0.900
0.913
0.889
0.895
0.908
0.916
0.871
0.911
0.944
0.920
b
RP-18
-0.966
1.000
-0.786
0.785
-0.911
0.925
-0.889
0.885
-0.918
0.932
-0.890
0.897
-0.887
-0.830
-0.817
-0.880
-0.845
-0.824
-0.895
-0.875
-0.889
-0.870
-0.880
-0.912
-0.824
-0.879
-0.943
-0.879
PC1/R f
RP-18
0.919
-0.786
1.000
-0.998
0.928
-0.901
0.929
-0.937
0.895
-0.880
0.901
-0.908
0.851
0.711
0.667
0.854
0.745
0.816
0.779
0.848
0.763
0.803
0.821
0.794
0.816
0.835
0.819
0.854
PC1/R M
RP-18
-0.919
0.785
-0.998
1.000
-0.927
0.894
-0.936
0.941
-0.901
0.887
-0.907
0.913
-0.860
-0.721
-0.676
-0.864
-0.756
-0.825
-0.787
-0.847
-0.771
-0.813
-0.828
-0.799
-0.826
-0.839
-0.820
-0.859
R M0
RP-18W
0.968
-0.911
0.928
-0.927
1.000
-0.990
0.973
-0.993
0.976
-0.970
0.959
-0.977
0.940
0.841
0.807
0.935
0.859
0.867
0.912
0.947
0.909
0.888
0.926
0.922
0.868
0.924
0.914
0.941
b
RP-18W
-0.964
0.925
-0.901
0.894
-0.990
1.000
-0.938
0.967
-0.962
0.959
-0.939
0.960
-0.923
-0.825
-0.798
-0.905
-0.837
-0.847
-0.899
-0.939
-0.896
-0.873
-0.917
-0.911
-0.848
-0.916
-0.930
-0.933
27
PC1/R f
RP-18W
0.958
-0.889
0.929
-0.936
0.973
-0.938
1.000
-0.988
0.974
-0.969
0.974
-0.976
0.950
0.861
0.822
0.960
0.886
0.899
0.918
0.938
0.917
0.905
0.923
0.926
0.900
0.925
0.891
0.937
PC1/R M
RP-18W
-0.958
0.885
-0.937
0.941
-0.993
0.967
-0.988
1.000
-0.973
0.966
-0.961
0.976
-0.940
-0.843
-0.803
-0.948
-0.865
-0.872
-0.910
-0.940
-0.907
-0.888
-0.920
-0.918
-0.873
-0.917
-0.886
-0.934
R M0
CN
0.962
-0.918
0.895
-0.901
0.976
-0.962
0.974
-0.973
1.000
-0.998
0.992
-0.997
0.975
0.891
0.860
0.945
0.898
0.916
0.935
0.952
0.941
0.931
0.966
0.943
0.917
0.958
0.946
0.972
b-CN
-0.965
0.932
-0.880
0.887
-0.970
0.959
-0.969
0.966
-0.998
1.000
-0.985
0.990
-0.982
-0.909
-0.882
-0.952
-0.914
-0.929
-0.950
-0.956
-0.954
-0.947
-0.976
-0.956
-0.930
-0.966
-0.960
-0.978
PC1/R f
CN
0.947
-0.890
0.901
-0.907
0.959
-0.939
0.974
-0.961
0.992
-0.985
1.000
-0.996
0.956
0.858
0.821
0.920
0.867
0.898
0.900
0.926
0.911
0.902
0.941
0.910
0.899
0.935
0.920
0.951
PC1/R M
CN
-0.954
0.897
-0.908
0.913
-0.977
0.960
-0.976
0.976
-0.997
0.990
-0.996
1.000
-0.962
-0.867
-0.831
-0.931
-0.876
-0.898
-0.913
-0.942
-0.922
-0.908
-0.951
-0.923
-0.898
-0.944
-0.925
-0.960
log K ow
0.914
-0.877
0.843
-0.847
0.934
-0.926
0.931
-0.926
0.967
-0.974
0.945
-0.954
0.996
0.960
0.944
0.961
0.956
0.977
0.974
0.981
0.975
0.983
0.994
0.973
0.977
0.997
0.963
1.000
28
(determinate experimental prin metoda clasic n plnia de separare, luate din literatur [45]),
coeficienii de corelaie fiind mai mari de 0.992 pentru R M0 i mai mari de 0.996 pentru PC1/R M .
4.00
3.50
Indici de lipofilicitate
3.00
2.50
2.00
1.50
1.00
0.50
0.00
-0.50
MP
EP
PP
BP
RM0-RP18W
RM0-RP18
RM0-CN
RM0-Diol
RM0- Parafin
RM0-Msline
RM0-Floarea Soarelui
RM0-Porumb
ALOGPs
log P (exp)c
Compui
staionare.
29
Analiza statistic a datelor (Tabelul 4.24) a evideniat corelaii excelente att ntre valorile
R M0 estimate pe diferite faze staionare ct i ntre acestea i diferite valori log P calculate, att
pentru fazele staionare inverse, ct i pentru fazele staionare impregnate.
Corelaia ridicat ntre indicii de lipofilicitate cromatografic determinai utiliznd faze
staionare impregnate, sugereaz c oricare dintre uleiuri poate fi utilizat pentru impregnarea
plcilor cromatografice de silicagel n scopul estimrii lipofilicitii altor compui din clasa
parabenilor. Mai mult, metodologia descris n acest studiu, poate fi utilizat pentru aprecierea
caracterului lipofilic al diferitelor uleiuri vegetale i al altor substane de impregnare. Astfel,
potrivit rezultatelor obinute, cel mai lipofil pare a fi uleiul de parafin urmat de uleiul de porumb
i cele de floarea soarelui i msline, ultimele dou prezentnd practic aceeai lipofilicitate.
Fazele staionare impregnate par a fi mai puin lipofile dect fazele staionare inverse studiate
(RP-18 i respectiv RP-18W).
30
R M0 -C18W
b-C18W
R M0 -C18
b-C18
R M0 -CN
b-CN
R M0 -Diol
b-Diol
R M0 -Parafin
b-Parafin
R M0 -Msline
b-Msline
R M0 -F- S
b- F-S
R M0 -Porumb
b-Porumb
CLogP
log PC
log PV
log PB
log P
MLOGP1
ALOGP1
LOGP(QSAR)
ALOGPs
AClogP
AB/LogP
miLogP
ALogP
MLogP
XLOGP2
XLOGP3
Average log P
log P (exp)a
log P (exp)b
log P (exp)c
R M0
C18W
1.000
-1.000
0.998
-0.994
0.999
-0.996
0.973
-0.883
0.996
-0.993
0.988
-0.978
0.989
-0.971
0.999
-0.999
0.996
0.996
0.996
0.998
0.998
0.994
0.997
0.986
0.994
0.997
0.996
0.999
0.997
0.994
0.999
0.996
0.996
0.982
0.996
0.998
R M0
C18
0.998
-0.999
1.000
-0.998
1.000
-0.997
0.961
-0.860
0.989
-0.986
0.989
-0.978
0.985
-0.964
1.000
-0.999
0.989
0.992
0.991
0.996
0.996
0.986
0.993
0.994
0.985
0.991
0.989
0.997
0.993
0.987
0.996
0.990
0.990
0.974
0.990
0.994
R M0
CN
0.999
-0.999
1.000
-0.998
1.000
-0.998
0.963
-0.863
0.992
-0.989
0.987
-0.976
0.985
-0.963
1.000
-1.000
0.991
0.992
0.992
0.996
0.996
0.989
0.993
0.991
0.988
0.992
0.991
0.998
0.993
0.989
0.998
0.991
0.992
0.975
0.991
0.994
R M0
Diol
0.973
-0.971
0.961
-0.945
0.963
-0.948
1.000
-0.968
0.979
-0.971
0.976
-0.975
0.991
-0.992
0.964
-0.959
0.987
0.989
0.990
0.982
0.980
0.988
0.988
0.932
0.986
0.987
0.988
0.979
0.987
0.989
0.967
0.989
0.989
0.998
0.989
0.986
R M0
Parafin
0.996
-0.995
0.989
-0.981
0.992
-0.989
0.979
-0.903
1.000
-0.999
0.975
-0.963
0.984
-0.965
0.991
-0.992
0.999
0.994
0.995
0.992
0.991
0.999
0.993
0.966
0.999
0.998
0.999
0.995
0.994
0.998
0.997
0.998
0.997
0.984
0.998
0.995
31
R M0
Msline
0.988
-0.988
0.989
-0.983
0.987
-0.976
0.976
-0.899
0.975
-0.966
1.000
-0.998
0.997
-0.990
0.988
-0.983
0.983
0.993
0.992
0.996
0.996
0.980
0.994
0.983
0.977
0.986
0.983
0.992
0.994
0.981
0.979
0.986
0.987
0.987
0.986
0.993
R M0
F-S
0.989
-0.988
0.985
-0.975
0.985
-0.973
0.991
-0.929
0.984
-0.976
0.997
-0.995
1.000
-0.995
0.985
-0.981
0.991
0.997
0.997
0.996
0.996
0.990
0.998
0.970
0.987
0.993
0.992
0.994
0.997
0.991
0.982
0.994
0.994
0.997
0.994
0.996
R M0
Porumb
0.999
-0.999
1.000
-0.998
1.000
-0.998
0.964
-0.865
0.991
-0.989
0.988
-0.977
0.985
-0.965
1.000
-1.000
0.991
0.993
0.992
0.996
0.997
0.989
0.993
0.991
0.988
0.993
0.991
0.998
0.994
0.989
0.998
0.992
0.992
0.975
0.992
0.995
log P
(exp)a
0.982
-0.980
0.974
-0.960
0.975
-0.961
0.998
-0.953
0.984
-0.976
0.987
-0.985
0.997
-0.995
0.975
-0.971
0.991
0.995
0.995
0.990
0.989
0.991
0.994
0.950
0.990
0.992
0.992
0.987
0.994
0.992
0.976
0.993
0.994
1.000
0.993
0.993
log P
(exp)b
0.996
-0.995
0.990
-0.980
0.991
-0.985
0.989
-0.921
0.998
-0.994
0.986
-0.978
0.994
-0.981
0.992
-0.990
1.000
0.999
0.999
0.997
0.996
0.999
0.998
0.968
0.999
1.000
1.000
0.997
0.998
1.000
0.994
1.000
1.000
0.993
1.000
0.999
log P
(exp)c
0.998
-0.997
0.994
-0.986
0.994
-0.987
0.986
-0.912
0.995
-0.990
0.993
-0.986
0.996
-0.984
0.995
-0.993
0.998
1.000
1.000
0.999
0.999
0.997
1.000
0.978
0.996
0.999
0.998
0.999
1.000
0.997
0.994
0.999
0.999
0.993
0.999
1.000
Capitolul5
Modelarea lipofilicitii unor compui din clasa conservanilor alimentari sintetici
La ora actual literatura conine relevante studii privind relaiile cantitative structurretenie (QSRR) care pun n eviden aspecte specifice privind determinarea lipofilicitii i
corelarea acesteia cu activitatea biologic a compuilor. Astfel ecuaiile QSPR, obinute fie pe
cale empiric (dintr-un set arbitrar de descriptori moleculari), fie prin selectarea descriptorilor pe
baze teoretice, descriu maniera prin care structura chimic controleaz proprietile fizice i
biologice ale compuilor.
Studiul de fa urmrete elaborarea unor modele de predicie a lipofilicitii compuilor
din clasa conservanilor alimentari, pornind de la informaiile complexe oferite de structura
molecular i utiliznd parametrii de lipofilicitate determinai prin metode cromatografice.
5.3 Rezultate i discuii
32
examinat prin reprezentarea grafic (Figura 5.1(a) i Figura 5.1(b)) a lipofilicitii estimate de
acestea i valorile experimentale obinute prin utilizarea celor dou tehnici cromatografice.
2.50
BP
2.00
1.50
PP
TBHQ
EP
PG
MP
2HBA
BA
4ABA
SA
3HBA
4HBA
1.00
0.50
GA
0.00
-0.50
IAscA
AscA
-1.00
-1.50
-2.00
-1.50
-1.00
-0.50
0.00
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
(a)
1.80
BP
1.60
PP
1.40
1.20
TEP
BHQ
1.00
MP
BA
PG
SA
0.80
3HBA
4HBA
0.60
4ABA
0.40
0.20
0.20
0.40
0.60
0.80
1.00
1.20
1.40
1.60
1.80
(b)
Figura 5.1 Lipofilicitatea msurat vs. estimat cu cel mai performant dintre modelele
obinute utiliznd descriptorii: calculai cu ajutorul programului ChemDraw Ultra 8.0 (a); calculai cu ajutorul programului Dragon 5.4 -(b).
33
Capitolul6
Determinarea capacitii antioxidante a unor compui din clasa conservanilor alimentari
sintetici. Modelarea eficacitii antioxidante utiliznd diferii descriptori moleculari
Antioxidanii sunt utilizai ntr-un numr mare de produse alimentare, activitatea lor
variind n funcie de temperatur, compoziia i structura alimentelor. Printre cele mai cunoscute
metode de determinare a activitii antioxidante se numr metodele consumului de radical liber
(radical-scavenging methods) acesta fiind de fapt i principalul mecanism prin care antioxidanii
acioneaz n alimente. n testul cu DPPH, consumul de radical este urmrit prin scderea
absorbanei acestuia la o lungime de und de =515 nm, scdere care se datoreaz reducerii
radicalului de ctre antioxidant, sau reaciei acestuia cu o specie radicalic. n general reacia
DPPH-ului cu compuii fenolici este una rapid, dar datorit faptului c pot avea loc i reacii
secundare lente care duc la o scdere progresiv n absorban, stadiul final al reaciei poate s nu
fie atins nici dup cteva ore. Se pune atunci problema timpului dup care s fie msurat
consumul de radical. Multe articole n care s-a utilizat metoda consumului de DPPH, raporteaz
consumul de radical dup un timp de reacie de 15-30 de minute.
Scopul prezentului studiu a fost dezvoltarea unor modele de predicie a activitii
antioxidante a conservanilor alimentari sintetici i identificarea celor mai importani descriptori
structurali care definesc aceast proprietate. n acest scop, pentru o serie larg de compui
utilizai ca i conservani n industria alimentar, farmaceutic i cosmetic s-a realizat
determinarea caracterului antioxidant utiliznd metoda consumului de radical liber stabil DPPH.
Exprimarea rezultatelor s-a fcut pe baza procentului de reducere al DPPH-ului, notat cu Q i a
concentraiei eficiente IC 50 .
6.3 Modelarea eficacitii antioxidante pentru unii conservani alimentari sintetici
utiliznd diferii descriptori moleculari
Descriptorii calculai cu ajutorul programelor ChemDraw Ultra 8.0 i Dragon 5.4, pentru
o serie de compui din clasa conservanilor alimentari sintetici, au fost utilizai n modelarea
capacitii antioxidante a acestora. Modelele de regresie multipl au fost obinute prin selectarea
celor mai semnificativi descriptori folosind metodologia algoritmilor genetici. Modelele de
34
regresie multipl obinute prin selectarea celor mai semnificativi descriptori folosind metodologia
algoritmilor genetici s-au dovedit a fi potrivite n predicia eficacitii antioxidante a unor
compui din clasa conservanilor alimentari sintetici.
Coeficieni de regresie semnificativi din punct de vedere statistic au fost obinui pentru
modelele cu dou, trei i respectiv patru variabile, att n cazul utilizrii descriptorilor calculai cu
ajutorul programului ChemDraw Ultra 8.0, ct i a celor din Dragon 5.4.
Cele mai performante modele obinute arat c, activitatea antioxidant a compuilor din
clasa conservanilor alimentari sintetici poate fi estimat, cu precizie ridicat, pe baza
descriptorilor topologici calculai folosind programul Dragon 5.4.
Aplicabilitatea celui mai performant model obinut pentru estimarea eficacitii
antioxidante a conservanilor alimentari sintetici (r = 0.9947), a fost examinat prin reprezentarea
grafic (Figura 6.4) a activitii antioxidante experimentale determinate folosind metoda
consumului de radical liber (DPPH) n funcie de valorile estimate.
4.20
PG
4.00
GA
3.80
AscA
IAscA
TBHQ
3.60
3.40
3.20
3.00
4HBA
4ABA
3HBA
SA
BP
2HBA
2.80
2.60
PPBA M P
2.40
EP
2.20
2.00
2.40
2.80
3.20
3.60
4.00
35
Capitolul7
Determinarea lipofilicitii unor compui din clasa coloranilor alimentari sintetici utiliznd
metodele cromatografice i diferite metode computaionale
36
mL/minut n cazul coloanelor C16 i respectiv CN. Soluiile standard folosite (10 g/mL) au fost
preparate n ap. Volumul de injecie a fost de 10L n toate cazurile. Detecia compuilor s-a
realizat prin setarea lungimii de und optime pentru fiecare compus n parte. Timpii mori
corespunztori pentru fiecare dintre coloanele utilizate, dai de timpii de retenie ai fazei mobile, au
fost: t 0 (C18)=0.951 minute; t 0 (C8)=1.360 minute t 0 (C16)=1.35 minute i respectiv t 0 (CN)=4.305
minute. Pentru determinarea valorilor extrapolate (log k w ), s-au folosit cinci concentraii diferite
ale metanolului n faza mobil, n toate cazurile. Compoziia n metanol a fazei mobile a fost
optimizat pentru fiecare tip de coloan n funcie de timpul de retenie al compuilor.
Calcularea descriptorilor moleculari
37
Coloana Cromatografic C8
0.80
log k
0.00
-0.50
-1.00
Compui
E131
E133
E123
E127
E124
-2.00
E122
-1.50
E110
15% MeOH
20% MeOH
25% MeOH
30% MeOH
35% MeOH
Media log k
E102
E131
E133
E123
E127
E124
E122
E110
E102
E104 (2)
E104 (1)
-0.80
E104 (2)
-0.40
-1.20
0.00
E104 (1)
log k
0.40
15% MeOH
20% MeOH
25% MeOH
30% MeOH
35% MeOH
Media log k
Compui
Coloana Cromatograf ic CN
2.00
0.60
1.50
0.20
-0.20
0.50
log k
log k
1.00
0.00
-0.60
-0.50
Compui
E131
E133
E127
E122
E110
E102
-1.40
E104 (2)
E131
E133
E123
E127
E124
E122
E110
E102
E104 (2)
E104 (1)
-1.50
15% MeOH
20% MeOH
25% MeOH
30% MeOH
35% MeOH
Media log k
E104 (1)
-1.00
-1.00
50% MeOH
55% MeOH
60% MeOH
65% MeOH
70% MeOH
Media log k
Compui
Figura 7.2 Profilele valorilor log k n funcie de fraciile de metanol pentru fazele
staionare studiate.
Rezultatele experimentale au evideniat existena unor interaciuni specifice ale tartrazinei
cu faza staionar CN, interaciuni care pot fi puse pe seama polaritii intermediare a acestei
coloane i pe capacitatea acesteia de a participa la diferite tipuri de interaciuni.
Regularitatea n comportamentul de retenie cromatografic, pentru compuii luai n
studiu, pe toate fazele staionare utilizate, este foarte bine susinut de profilele vectorilor proprii
obinute prin aplicarea PCA direct asupra valorilor k i respectiv log k (Figura 7.4).
38
0.00
-0.20
-0.40
-0.60
-0.80
-1.00
0.42
0.46
0.50
0.54
0.58
0.62
RP-18
C8
C16
CN
0.66
Fracia de metanol
-0.30
-0.34
-0.38
-0.42
-0.46
-0.50
-0.54
-0.58
0.42
0.46
0.50
0.54
0.58
0.62
0.66
RP-18
C8
C16
CN
Fracia de metanol
Figura 7.4 Profilul vectorilor proprii dup valorile k i respectiv dup valorile log k.
Evaluarea rezultatelor experimentale s-a realizat prin elaborarea unui studiu de corelaie
(Tabelul 7.6) privind parametrii de lipofilicitate determinai cromatografic i cei teoretici
calculai cu ajutorul unor algoritmi deja consacrai (inclui n diferite programe computaionale).
Deii comportamentul cromatografic al compuilor luai n studiu
ilustreaz bune
39
valorilor teoretice calculate. Acest lucru se datoreaz limitrilor impuse calculului teoretic al
valorilor log P, care poate s nu in seama de particularitile structurale ale moleculelor
complexe sau ale celor care prezint grupri uor ionizabile.
Studiul extins privind relaiile structur-retenie respectiv structur-lipofilicitate, utiliznd
descriptorii calculai n Dragon, regresia liniar multipl n elaborarea modelelor de predicie i
metodologia algoritmilor genetici n selectarea variabilelor, a dus la obinerea unor modele
performante de predicie a lipofilicitii coloranilor alimentari sintetici. Cei mai importani
descriptori, selectai n ecuaiile modelelor de lipofilicitate obinute, vizeaz att aspecte bi (2D)
i tri-dimensionale (3D) ale structurii moleculare, ct i aspecte privind topologia, conformaia,
indicii de conectivitate i respectiv unele proprieti moleculare ale compuilor. Cei mai
reprezentativi descriptori arat c, lipofilicitatea coloranilor alimentari sintetici depinde n mare
msur de volumul van der Waals, electronegativitatea Sanderson i respectiv polarizabilitatea
atomic a moleculelor.
Aplicabilitatea celor mai performante modele obinute, a fost examinat prin
reprezentarea grafic (Figura 7.6) a lipofilicitii estimate de acestea i valorile experimentale
determinate prin metode cromatografice. Coeficienii de determinare, semnificativi din punct de
vedere statistic (r2 = 0.9617 pentru coloana C18 i r2 = 0.9980 pentru coloana CN) arat c,
modelele obinute pot fi utilizate cu succes n estimarea lipofilicitii unor compui noi, din clasa
celor studiai.
40
Table 7.6 Corelaiile privind parametrii de lipofilicitate determinai cromatografic i valorile teoretice log P.
log k w (C18)
log k w (C8)
log k w (C16)
log k w (CN)
S (RP-18)
S (C8)
S (C16)
S (CN)
0 (C18)
0 (C8)
0 (C16)
0 (CN)
PC1/k (C18)
PC1/k (C8)
PC1/k (C16)
PC1/k (CN)
PC1/log k (C18)
PC1/log k (C8)
PC1/log k (C16)
PC1/log k (CN)
ClogP
Clog PN
HY
MLOGP
ALOGP
ALOGPs
AC logP
milogP
KOWWIN
XLOGP2
XLOGP3
ALOGpS
AClogS
(C18)
1.00
0.98
0.82
0.54
0.28
-0.28
0.42
-0.39
-0.98
-0.97
-0.90
-0.77
-0.54
-0.53
0.05
0.04
-0.46
-0.56
0.01
-0.01
0.71
0.58
-0.94
0.97
0.80
0.70
0.59
0.74
0.70
0.82
0.77
-0.79
-0.82
log k w
(C8) (C16)
0.82
0.98
1.00
0.74
1.00
0.74
0.53
0.88
0.26
0.17
-0.40
-0.21
0.43
-0.01
-0.46
-0.65
-0.95
-0.80
-0.97
-0.78
-0.84
-0.96
-0.66
-0.90
-0.50
-0.73
-0.53
-0.59
0.11
-0.37
0.20
0.07
-0.47
-0.69
-0.59
-0.64
0.06
-0.48
0.14
0.02
0.65
0.78
0.59
0.31
-0.90
-0.84
0.96
0.70
0.44
0.81
0.60
0.74
0.69
0.12
0.68
0.80
0.57
0.79
0.47
0.82
0.37
0.80
-0.38
-0.84
-0.80
-0.80
S
(CN)
0.72
0.68
0.90
1.00
-0.23
-0.67
-0.14
-0.90
-0.66
-0.66
-0.91
-0.68
-0.55
-0.39
-0.54
0.39
-0.62
-0.59
-0.54
0.35
0.46
0.12
-0.80
0.58
0.13
0.37
0.22
0.52
0.60
0.34
0.35
-0.41
-0.64
(C18)
0.28
0.26
0.17
-0.40
1.00
0.56
0.48
0.50
-0.47
-0.45
-0.31
-0.15
0.10
-0.03
0.48
-0.27
0.09
-0.09
0.42
-0.45
0.43
0.32
-0.25
0.23
0.59
0.49
0.14
0.34
0.30
0.23
0.18
-0.03
-0.30
(C8)
-0.28
-0.40
-0.21
-0.70
0.56
1.00
0.20
0.87
0.15
0.23
0.17
0.21
0.25
0.24
0.18
-0.73
0.34
0.28
0.24
-0.77
-0.01
-0.17
0.23
-0.32
0.06
0.19
-0.54
-0.10
-0.60
-0.32
-0.42
0.51
0.29
(C16)
0.42
0.43
-0.01
-0.40
0.48
0.20
1.00
0.28
-0.47
-0.46
-0.27
0.17
0.40
0.34
0.31
0.09
0.42
0.22
0.61
0.04
-0.13
0.10
-0.44
0.48
0.54
0.01
0.50
-0.14
0.15
0.41
0.50
-0.60
0.02
(CN)
-0.54
-0.59
-0.62
-0.90
0.36
0.89
-0.03
1.00
0.46
0.52
0.66
0.34
0.37
0.26
0.59
-0.74
0.53
0.52
0.52
-0.72
-0.10
0.12
0.70
-0.45
0.05
0.07
-0.30
-0.15
-0.62
-0.19
-0.29
0.48
0.33
(C18)
-0.98
-0.95
-0.80
-0.43
-0.47
0.15
-0.47
0.27
1.00
0.99
0.91
0.77
0.46
0.48
-0.14
0.02
0.41
0.53
-0.09
0.11
-0.75
-0.60
0.91
-0.93
-0.85
-0.75
-0.57
-0.76
-0.72
-0.79
-0.74
0.72
0.83
(C8)
-0.97
-0.97
-0.78
-0.48
-0.45
0.23
-0.46
0.36
0.99
1.00
0.88
0.73
0.47
0.51
-0.13
-0.10
0.45
0.58
-0.07
-0.01
-0.72
-0.58
0.90
-0.92
-0.84
-0.69
-0.61
-0.73
-0.78
-0.78
-0.74
0.74
0.82
(C16)
-0.90
-0.84
-0.96
-0.82
-0.31
0.17
-0.27
0.62
0.91
0.88
1.00
0.92
0.57
0.47
0.26
-0.12
0.54
0.55
0.28
-0.04
-0.72
-0.34
0.93
-0.80
-0.57
-0.71
-0.28
-0.74
-0.63
-0.57
-0.51
0.54
0.78
(CN)
-0.78
-0.67
-0.92
-0.68
-0.19
0.20
0.15
0.34
0.80
0.75
0.92
1.00
0.54
0.44
0.10
0.26
0.49
0.50
0.21
0.34
-0.82
-0.53
0.72
-0.65
-0.49
-0.83
-0.23
-0.85
-0.54
-0.54
-0.45
0.32
0.89
(C18)
-0.46
-0.47
-0.69
-0.70
0.09
0.34
0.42
0.63
0.41
0.45
0.54
0.48
0.95
0.92
0.44
-0.24
1.00
0.96
0.73
-0.25
-0.59
-0.09
0.48
-0.31
-0.18
-0.42
0.12
-0.59
-0.45
-0.07
0.04
0.02
0.52
PC1/log k
(C8)
(C16)
-0.56
0.01
-0.59
0.06
-0.64
-0.48
-0.68
-0.70
-0.09
0.42
0.28
0.24
0.22
0.61
0.63
0.69
0.53
-0.09
0.58
-0.07
0.55
0.28
0.48
0.22
0.65
0.90
0.46
0.93
0.27
0.89
-0.28
-0.34
0.96
0.73
1.00
0.53
0.53
1.00
-0.26
-0.38
-0.61
-0.12
-0.17
0.47
0.54
0.16
-0.41
0.17
-0.38
0.47
-0.45
0.01
-0.02
0.58
-0.60
-0.13
-0.53
0.00
-0.18
0.43
-0.07
0.49
0.14
-0.36
0.55
0.04
(CN)
0.01
0.15
-0.06
0.35
-0.39
-0.75
0.21
-0.72
0.07
-0.04
-0.00
0.34
0.04
0.05
-0.42
0.97
-0.16
-0.17
-0.29
1.00
-0.46
-0.44
-0.20
0.01
-0.32
-0.65
0.21
-0.44
0.30
-0.15
0.02
-0.29
0.28
5.00
E127
4.50
E131
4.00
E133
3.50
E122
3.00
E104
E110
E124
2.50
2.00
E123
E102
1.50
1.00
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
(r = 0.9617)
(a)
E104
2.039
E127
1.556
E131
1.228
E122
E133
0.838
E110
0.438
-0.237
-0.40
E102
0.00
0.40
0.80
1.20
1.60
2.00
(b)
Figura 7.6 Lipofilicitatea msurat vs lipofilicitatea estimat pe baza celor mai performante
modele de predicie: (a) pentru coloana C18 i (b) pentru coloana CN.
42
7.3
Determinarea
lipofilicitii
unor
colorani
alimentari
sintetici
utiliznd
43
1.50
2.00
1.00
1.50
0.50
1.00
0.00
RM
RM
0.50
-0.50
0.00
-1.00
-0.50
20% MeOH
30% MeOH
40% MeOH
50% MeOH
60% MeOH
Media RM
Compui
(a)
-1.00
Compui
(b)
E131
E133
E123
E127
E124
E122
E110
E102
-1.50
E104
E131
E133
E123
E127
E124
E122
E110
E102
20% MeOH
30% MeOH
40% MeOH
50% MeOH
60% MeOH
Media R M
Plci cromatografice CN
2.50
2.00
1.50
1.00
RM
0.50
0.00
-0.50
Compui
(c)
E131
E133
E123
E127
E124
E122
E110
-1.50
E102
-1.00
E104
-2.00
E104
-1.50
20% MeOH
30% MeOH
40% MeOH
50% MeOH
60% MeOH
Media RM
Figura 7.7 Profilul parametrilor R M n funcie de concentraia metanolului din faza mobil
pentru coloranii alimentari luai n studiu, pentru diferite faze staionare: (a) RP-18; (b) RP-18W;
(c) CN.
44
3.00
2.50
2.00
R M0
1.50
1.00
0.50
0.00
E131
E133
E123
E127
E124
E122
E110
E104
-1.00
E102
-0.50
RM0(RP-18)
RM0 (RP-18W)
RM0 (CN)
Compui
(a)
3.00
2.00
PC1/RM
1.00
0.00
-1.00
E131
E133
E123
E127
E124
E122
E110
E104
-3.00
E102
-2.00
PC1/RM (RP-18)
PC1/RM (RP-18W)
PC1/RM (CN)
Compui
(b)
Figura 7.8 Profilele parametrilor de lipofilicitate R M0 (a) i respectiv PC1/R M (b) pe diferite faze
staionare.
45
Tabelul 7.9 Corelaiile privind parametrii cromatografici de lipofilicitate ai unor colorani alimentari sintetici i valorile teoretice log P
Media R M (RP-18)
Media R M (RP-18W)
Media R M (CN)
R M0 (RP-18)
R M0 (RP-18W)
R M0 (CN)
b (RP-18)
b (RP-18W)
b (CN)
0 (RP-18)
0 (RP-18W)
0 (CN)
PC1/R M (RP-18)
PC1/R M (RP-18W)
PC1/R M (CN)
log P
CLog PCD
HY
MLOGP
ALOGP
ALOGPs
AC logP
milogP
KOWWIN
XLOGP2
XLOGP3
ALOGpS
AClogS
RP-18
1.00
0.99
0.81
0.83
0.93
0.68
-0.49
-0.86
-0.67
-0.65
-0.84
-0.64
0.88
0.87
0.68
-0.41
0.10
-0.86
0.72
0.27
0.12
0.29
0.20
0.37
0.51
0.49
-0.64
-0.29
media R M
RP-18W
0.99
1.00
0.85
0.83
0.92
0.70
-0.52
-0.84
-0.70
-0.65
-0.80
-0.62
0.86
0.86
0.70
-0.35
0.17
-0.88
0.74
0.29
0.19
0.28
0.27
0.37
0.55
0.51
-0.63
-0.33
CN
0.81
0.85
1.00
0.53
0.68
0.83
-0.09
-0.52
-0.80
-0.51
-0.72
-0.61
0.67
0.70
0.84
0.14
0.59
-0.87
0.76
0.52
0.65
0.15
0.70
0.44
0.56
0.44
-0.43
-0.69
RP-18
0.83
0.83
0.53
1.00
0.95
0.69
-0.80
-0.76
-0.71
-0.88
-0.79
-0.77
0.95
0.96
0.67
-0.53
-0.13
-0.60
0.57
0.03
-0.19
0.35
-0.03
0.22
0.47
0.47
-0.65
-0.07
R M0
RP-18W
0.93
0.92
0.68
0.95
1.00
0.72
-0.66
-0.89
-0.73
-0.79
-0.88
-0.78
0.95
0.96
0.71
-0.51
-0.02
-0.74
0.62
0.15
-0.06
0.25
0.06
0.25
0.44
0.40
-0.60
-0.11
CN
0.68
0.70
0.83
0.69
0.72
1.00
-0.23
-0.38
-0.99
-0.80
-0.83
-0.91
0.82
0.85
1.00
0.12
0.47
-0.68
0.68
0.43
0.50
0.18
0.60
0.30
0.54
0.41
-0.44
-0.59
RP-18
-0.49
-0.52
-0.09
-0.80
-0.66
-0.23
1.00
0.59
0.30
0.63
0.31
0.34
-0.59
-0.63
-0.20
0.60
0.36
0.25
-0.28
0.23
0.49
-0.39
0.36
-0.05
-0.36
-0.41
0.55
-0.25
46
b
RP-18W
-0.86
-0.84
-0.52
-0.76
-0.89
-0.38
0.59
1.00
0.39
0.45
0.70
0.46
-0.73
-0.72
-0.37
0.64
0.15
0.68
-0.48
-0.10
0.20
-0.18
0.14
-0.20
-0.29
-0.28
0.50
-0.09
CN
-0.67
-0.70
-0.80
-0.71
-0.73
-0.99
0.30
0.39
1.00
0.81
0.81
0.90
-0.81
-0.85
-0.97
-0.10
-0.46
0.69
-0.73
-0.47
-0.48
-0.26
-0.57
-0.27
-0.62
-0.49
0.52
0.56
RP-18
-0.65
-0.65
-0.51
-0.88
-0.79
-0.80
0.63
0.45
0.81
1.00
0.78
0.90
-0.88
-0.91
-0.79
0.30
0.02
0.54
-0.53
-0.01
0.05
-0.28
-0.14
-0.23
-0.41
-0.39
0.55
0.21
0
RP-18W
-0.84
-0.80
-0.72
-0.79
-0.88
-0.83
0.31
0.70
0.81
0.78
1.00
0.90
-0.92
-0.90
-0.82
0.30
-0.13
0.79
-0.68
-0.35
-0.14
-0.25
-0.25
-0.35
-0.42
-0.38
0.57
0.30
CN
-0.64
-0.62
-0.61
-0.77
-0.78
-0.91
0.34
0.46
0.90
0.90
0.90
1.00
-0.88
-0.89
-0.90
0.19
-0.12
0.57
-0.52
-0.20
-0.14
-0.12
-0.27
-0.16
-0.34
-0.26
0.42
0.27
RP-18
0.88
0.86
0.67
0.95
0.95
0.82
-0.59
-0.73
-0.81
-0.88
-0.92
-0.88
1.00
0.99
0.81
-0.42
0.01
-0.69
0.63
0.16
-0.01
0.28
0.13
0.26
0.45
0.43
-0.61
-0.21
PC1/R M
RP-18W
0.87
0.86
0.70
0.96
0.96
0.85
-0.63
-0.72
-0.85
-0.91
-0.90
-0.89
0.99
1.00
0.84
-0.38
0.06
-0.70
0.64
0.17
0.03
0.27
0.18
0.25
0.48
0.44
-0.60
-0.23
CN
0.68
0.70
0.84
0.67
0.71
1.00
-0.20
-0.37
-0.97
-0.79
-0.82
-0.90
0.81
0.84
1.00
0.13
0.48
-0.67
0.66
0.40
0.51
0.14
0.62
0.32
0.50
0.37
-0.40
-0.60
ConcluziiGenerale
Utiliznd cromatografia de lichide cu faze inverse i diferite tipuri de faze staionare, au fost
determinai o serie de parametri de lipofilicitate pentru dou dintre cele mai importante clase de
aditivi alimentari (conservani i colorani).
Utilizarea diferitelor faze staionare inverse (C18, C8, C16, CN sau RP-18W) a ilustrat un
respectiv porumb), s-au dovedit a fi potrivite n modelarea proprietilor sistemului octanolap, oferind posibilitatea utilizrii unor astfel de faze staionare n estimarea lipofilicitii,
respectiv n predicia activitii biologice a compuilor din clasa parabenilor.
Parametrii experimentali de lipofilicitate, determinai prin cele dou tehnici cromatografice, au
47
compuilor din clasa coloranilor alimentari sintetici, vizeaz att aspecte bi- i tri-dimensionale
ale structurii moleculare, ct i aspecte privind topologia, conformaia, indicii de conectivitate
i respectiv unele proprieti moleculare ale compuilor.
Cele mai performante modele de predicie arat c volumul van der Waals, electronegativitatea
48
Bibliografie selectiv
1. B. Testa, P. Crivori, M. Reist, P.A. Carrupt, Perspect. Drug Discovery Des. 1 (2000) 179
2. C. Hansch, A. Leo, Exploring QSAR. Fundamentals and Applications in Chemistry and
Biology, ACS, Washington, DC (1995)
3. M. Karelson, Molecular Descriptors inQSAR/QSPR, John Wiley&Sons, NewYork (2000)
4. R. Kaliszan, Structure and Retention in Chromatography: A Chemometric Approach,
Harwood Academic Publishers, Amsterdam (1997)
5. J. Sangster, Octanolwater Partition Coefficients: Fundamentals and Physical Chemistry,
John Wiley & Sons, New York (1997)
6. R.F. Rekker, R. Mannhold, Calculation of Drug Lipophilicity: The Hydrophobic Fragmental
Constant Approach, VCH, Weinheim (1992)
7. J.F.K. Huber, C.A.H. Meijers, J.A.R.J. Hulsman, Anal. Chem. 44 (1972) 111
8. A. Kaune, M. Knorrenschild, A. Kettrup, Fresenius J. Anal. Chem. 352 (1995) 3030
9. X. Liu, H. Tanaka, A. Yamauchi, B. Testa, H. Chuman, J. Chromatogr. A 1091 (2005) 51
10. J.G. Dorsey, M.G. Khaledi, J. Chromatogr. A 656 (1993) 485
11. R. Kaliszan, Quant. Struct.-Act. Relat. 9 (1990) 83
12. A. Bechalany, A. Tsantili-Kakoulidou, N. El Tayar, B. Testa, J. Chromatogr. 541 (1991) 221
13. B. Slater, A. McCormack, A. Avdeef, J.E.A. Comer, J. Pharm. Sci. 83 (1994) 1280
14. D. Vrakas, C. Giaginis, A. Tsantili-Kakoulidou, J. Chromatogr. A 1116 (2006) 158
15. K. Val, J. Chromatogr. A 1037 (2004) 299
16. S.E. Lucangioli, C.N. Carducci, V.P. Tripodi, E. Kenndler, J. Chromatogr. B 765 (2001) 113
17. T. Brauman, G.Weber, L.H. Grimmen, J. Chromatogr. 236 (1983) 329
18. W. J. Lambert, J. Chromatogr. A 656 (1993) 469
19. R. Kaliszan, Chem. Rev. 107 (2007) 3212
20. J. Sangster, LOGKOW-a databank of evaluated octanol-water partition coefficients, Sangster,
Research Laboratories, Montreal (1993)
21. C. Giaginis, A. Tsantili-Kakoulidou, J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 31 (2008) 79
22. K. Valk, P. Segel, J. Chromatogr. 631 (1993) 49
23. C. My Du, K. Valk, C. Bevan, D. Reynolds, Anal. Chem. 70 (1997) 4228
49
Structure
Drawing
Standard,
ChemDraw
Ultra
8.0.3,
(2003)
http://www.cambridgesoft.com
35. Software DRAGON Plus version 5.4, (2006). http://www.talete.mi.it
36. Virtual Computational Chemistry Laboratory. http://vcclab.or./alogps/start.html
37. The Human Metabolome Project. http://www.metabolomics.ca
38. T.C. Schunkl, M. F. Burke, J. Chromatogr. A 656 (1993) 289
39. P.K. Zarzycki, M. Wierzbowska, H. Lamparczyk, J. Chromatogr. A 857 (1999) 255
40. S. Espinosa, E. Bosch, M. Roses, J. Chromatogr. A 947 (2002) 47
41. S. Oishi, Toxicol. Ind. Health 17 (2001) 31
42. C. Lemini, A. Hernandez, R. Jaimez, Y. Franco, M. Avila, A. Castell, Toxicol. Ind. Health 20
(2004) 123
43. C. Lemini., R. Jaimez, M. Avila, Y. Franco, F. Larrea, A. E. Lemus, Toxicol. Ind. Health 19
(2003) 69
44. A. Scott, M. Masten, Final Review of Toxicological Literature, NTP/NIEHS Research
Triangle Park, North Carolina (2004) 1
45. T. Angelov, A.Vlasenko, W.Tashkov, J. Liq. Chromatogr. Relat.Technol. 31 (2008,) 188
46. T. M. Parkinson, J. P. Brown, Ann. Rev. Nutr. 1 (1981) 175
50
51