Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
1
Keq reflect compoziia amestecului de reacie ajuns la echilibru, care este aceeai indiferent
de concentraiile iniiale ale reactanilor i produilor (deci Keq are o valoare fix pentru o reacie
dat).
Exist dou forme ale variaiei energiei libere: G i G.
G este diferena de energie liber real, caracteristic pentru condiiile reale din celula
vie (presiune, temperatur, pH i, mai ales, concentraii reale ale participanilor la reacie). G a
reaciei directe (A B) este egal ca mrime i opus ca semn cu cea a reac iei inverse (A B).
Cunoaterea valorii lui G este util din dou puncte de vedere:
- semnul lui G este predictiv pentru sensul de desfurare al unei reacii A B n
condiiile reale din celula vie;
- mrimea lui G arat ct de departe de echilibru este sistemul reactant n momentul iniial
i, deci, cuantific tendina de atingere a echilibrului (aceasta din urm reprezint o for motrice
care pune n micare reacia biochimic).
Sunt posibile trei situaii:
dac G este negativ (reacie exergonic), reacia are loc spontan de la A ctre B cu pierdere
de energie liber; dac G are valoare mare, reacia are, practic, caracter ireversibil (o cantitate
mare de energie liber este degajat sub form de cldur, iar cldura nu poate fi utilizat pentru a
permite desfurarea reaciei n sens invers);
dac G = 0, reacia este la echilibru;
dac G este pozitiv, reacia poate avea loc de la A ctre B (n sensul endergonic) numai n
condiiile n care exist un aport de energie liber dintr-o alt surs; altfel, sensul spontan al unei
asemenea reacii este de la B ctre A (sensul exergonic).
Cu alte cuvinte, o reacie decurge spontan ntotdeauna n sensul exergonic.
G este diferena de energie liber standard, caracteristic pentru condiii standard
(temperatura de 25C, pH = 7, reactanii i produii prezeni ntr-o concentraie iniial de 1M).
Pentru o cale metabolic ce cuprinde mai multe reacii succesive, fiecare avnd o anumit
valoare a lui G:
diferena de energie liber pentru ntreaga cale este Gtotal = G1 + G2 + G3 + G4 + ..... (datorit
caracterului aditiv al variaiei energiei libere pentru reaciile succesive). Dac Gtotal < 0, calea
metabolic este exergonic n ansamblu i are loc n sensul figurat mai sus, chiar dac unele reacii
individuale au G > 0.
3
TRANSFERUL ENERGIEI LIBERE N CURSUL PROCESELOR METABOLICE
Molecula care joac un rol central n transferul energiei libere de la procesele exergonice la
cele endergonice este ATP (adenozin trifosfat).
n reacia (2), pirofosfatul anorganic (PPi) este hidrolizat la 2Pi sub aciunea pirofosfatazei
anorganice (enzim prezent n toate celulele), ntr-o reacie exergonic. ndeprtarea PPi din
mediu face ca echilibrul reaciei de sintez s fie i mai mult deplasat spre dreapta.
i ali compui au potenial energetic ridicat (valori negative mari pentru G la hidroliz).
Compuii fosforilai din organism pot fi mprii n dou grupe, n funcie de G pentru reacia de
hidroliz:
- compui nalt energetici (conin legturi de tip macroergic, simbolizate prin ~) - au
G la fel de negativ sau mai negativ dect ATP-ul (la scindarea n ADP i Pi: 7,3 kcal/mol);
- compui cu energie joas (conin legturi de tip microergic) - au G mai puin
negativ dect aceast valoare.
ATP i ali nucleozid trifosfai - GTP, UTP, CTP (2 legturi tip anhidrid acid fosforic)
- ATP este un donor universal de energie, pentru diverse procese biochimice i fiziologice;
- UTP este utilizat n procesul de sintez a glucidelor;
- CTP este folosit n sinteza lipidelor complexe;
- GTP furnizeaz energie n procesul de sintez a proteinelor;
5
- fosfoenolpiruvat i 1,3-difosfoglicerat sunt intermediari ai glicolizei (cale de degradare a
glucozei cu scopul de a genera energie);
- acil-CoA reprezint forma activ a acizilor grai, sub care acetia particip att la procesul
de degradare ct i la sinteza diverselor clase de lipide.
n general, compuii fosforilai macroergici nu reprezint forme de stocare pe termen lung a
energiei; ei sunt forme tranzitorii de depozitare a energiei, avnd rolul de a transporta energia dintr-
un punct n altul, de la un sistem enzimatic la altul, n cursul defurrii proceselor biologice i
chimice din celul. ATP-ul are un turnover rapid (viteza de degradare i resintez este mare).
Excepie face creatin-fosfatul, care reprezint o form de stocare a energiei n muchiul
scheletic (i miocard), utilizabil n condiiile creterii substaniale a necesarului energetic n cursul
efortului fizic susinut.
ATP are o poziie intermediar n ceea ce privete valoarea G la hidroliz (tabelul 1); n
consecin:
ATP poate fi sintetizat prin transferul, pe ADP, a unei grupri fosfat de la compuii nalt
energetici care au G mai negativ dect 7,3 kcal/mol, conform ecuaiei generale:
Deci ATP-ul poate transporta energia liber ntre cele dou categorii de compui biochimici
(nalt energetici i cu energie joas) servete ca moneda energetic universal n celulele vii.
6
Fructoz-6-fosfat 3,8
Glucoz-6-fosfat 3,3
Glicerol-3-fosfat 2,2
REACII DE OXIDO-REDUCERE
7
n cursul proceselor catabolice, oxidrile sunt, n majoritatea cazurilor, dehidrogenri
catalizate de dehidrogenaze (DH, enzime din clasa oxido-reductazelor):
AH2 + B A + BH2
n reaciile de dehidrogenare se transfer, de la o molecul donoare la o molecul
acceptoare, 2 echivaleni reductori (termenul de echivalent reductor se refer la un electron, un
atom de hidrogen sau un ion hidrid H:, care particip la o reacie de oxido-reducere).
n cadrul cilor metabolice de degradare a combustibililor biologici, n reaciile de
dehidrogenare catalizate enzimatic, electronii de la multiple substrate diferite sunt canalizai spre
cteva tipuri de transportori de e universali: coenzimele piridinice i cele flavinice.
NAD+ NADH
Majoritatea dehidrogenazelor care acioneaz n catabolism sunt specifice pentru NAD+ ca
acceptor de e; unele sunt localizate n citosol, altele n citoplasm, iar altele au izoenzime
mitocondriale i citosolice.
Sediul PO este mitocondria. Acest organit celular are dou membrane care nconjoar
matricea mitocondrial:
Membrana extern este permeabil pentru molecule mici i ioni, care trec liber prin canale
proteice transmembranare.
Membrana intern este impermeabil pentru majoritatea moleculelor mici hidrosolubile i
a ionilor; moleculele care o pot strbate o fac cu ajutorul unor transportori specifici. Aceast
membran conine componentele LR i ATP sintaza.
Matricea mitocondrial conine enzimele care intervin n toate cile de degradare oxidativ
a substratelor energogene, cu excepia glicolizei.
9
care constituie lanul respirator (acesta fiind calea final comun prin care electronii provenii de
la diveri combustibili biologici sunt transferai pe oxigen).
Componentele LR cuprind:
Componentele lanului respirator sunt aezate n ordinea creterii potenialului redox (E).
10
Transportorii de e din LR sunt organizai n 4 complexe supramoleculare integrate n
membrana mitocondrial intern. Complexele I i II catalizeaz transferul de e ctre coenzima Q,
de la doi donori de e diferii: NADH, respectiv succinat.
CoQH2 (coenzima Q care a fost redus sub aciunea complexului I sau a complexului II)
difuzeaz n membrana mitocondrial intern pn la complexul III, unde va fi oxidat. Fiind
capabil s accepte i s cedeze 1 sau 2 electroni, coenzima Q are o poziie intermediar ntre un
donor de 2 e (NADH, prin intermediul complexului I i succinat, prin intermediul complexului II)
i un acceptor de 1 e (citocromul b din componena complexului III).
11
Conine citocromii b i c1 i proteine cu Fe-S.
Transfer e de la coenzima Q redus la citocromul c, conform ecuaiei:
CoQH2 + 2 cit c (Fe3+) CoQ + 2 cit c (Fe2+) + 2 H+
Rezultatul net al activitii complexului III: CoQH 2 este reoxidat i 2 molecule de cit c sunt
reduse.
Citocromul c
Este o protein solubil din spaiul intermembranar, asociat cu faa extern a membranei
mitocondriale interne. Accept 1 e de la complexul III, dup care se deplaseaz spre complexul IV
pentru a-i ceda electronul.
12
- gradient chimic: pe faa extern a membranei mitocondriale interne, pH-ul este mai acid n
comparaie cu faa sa matriceal.
n acest gradient este stocat o energie electro-chimic, ce reprezint o conservare temporar
a unei mari pri a energiei eliberate prin transferul e pn la oxigen (aprox. 90%). Energia stocat
astfel se numete for proton-motoare: atunci cnd H+ curg spontan n sensul gradientului lor
electrochimic, energia stocat n acest gradient devine disponibil pentru a efectua travaliu:
susinerea sintezei ATP din ADP i Pi.
Sinteza ATP
Are loc la nivelul complexului V: ATP sintaza sau complexul Fo-F1. Acest complex are
dou componente (domenii funcionale):
Fo este integrat n membrana mitocondrial intern; este alctuit din 3 tipuri de
subuniti (a, b i c) n proporiile ab2c10. Are un canal (por) central pentru H+ prin care protonii curg
n sensul gradientului de concentraie, din spaiul intermembranar spre matrice.
F1 este localizat pe faa intern a membranei mitocondriale interne (proemin spre
matrice) i este asociat cu F o. Este alctuit din 9 subuniti: Subunitile
ialterneaz, fiind dispuse ca feliile de portocal. Fiecare din cele trei subuniti conine un
centru catalitic pentru sinteza ATP. Subunitatea formeaz un ax central care trece prin F1 i este
asociat cu Fo.
a) F1 izolat de Fo catalizeaz hidroliza ATP (ATP + H2O ADP + Pi, G = 7,3
kcal/mol), motiv pentru care a fost denumit iniial F1 ATP-aza.
b) F1 integrat n membrana mitocondrial intern, asociat cu F o, catalizeaz sinteza ATP:
ADP + Pi ATP + H 2O. Reacia fiind puternic endergonic (G = 7,3 kcal/mol), poate avea loc
doar n condiiile n care att ATP ct i H 2O sunt ndeprtate eficient din mediul de reacie, astfel
nct concentraia lor s fie meninut la valori mult mai mici dect concentraia ADP i Pi (n felul
acesta G real poate fi negativ). Aceste condiii sunt create n centrii catalitici ai ATP sintazei:
- mediul hidrofob menine concentraia moleculelor de H2O la o valoare redus;
- ATP este ndeprtat printr-un mecanism rotativ mobilizat de curentul de protoni care trec
din spaiul intermembranar spre matricea mitocondrial (n sensul gradientului de concentraie),
prin porul existent n componenta Fo.
13
Mecanism de cataliz rotaional la nivelul ATP sintazei, propus de ctre Paul Boyer:
Cei 3 centri catalitici ai subunitilor se pot gsi n 3 conformaii diferite: -ATP (cu
afinitate mare pentru ATP),-ADP (cu afinitate mare pentru ADP) i-empty (cu afinitate foarte
mic pentru ATP i ADP). Fiecare centru catalitic trece succesiv prin fiecare din cele trei stri: mai
nti-ADP (leag ADP i Pi) are loc sinteza ATP, n acelai timp centrul catalitic trecnd la
conformaia -ATP n final, subunitatea trece la conformaia -empty, cu afinitate foarte mic
pentru ATP, care va fi eliberat de pe suprafaa enzimei. Apoi ncepe o nou rund de cataliz.
Aceste modificri conformaionale ciclice sunt determinate de pasajul H+ prin porul Fo: acest
curent de H+ determin rotaia cilindului format din subunitile c i a subunitii ataate. Aceasta
din urm trece prin centrul sferoidului . Cu fiecare rotaie de 120, vine n contact cu o
subunitate diferit, iar contactul foreaz acea subunitate s treac n conformaia -empty,
determinnd eliberarea ATP.
n concluzie:
- prin transferul e de la NADH sau succinat la O2, prin lanul respirator, se degaj o anumit
cantitate de energie liber aceasta este utilizat la pomparea de H + n afara matricei
mitocondriale de ctre complexele I, III i IV se creeaz un gradient de H+;
- energia electro-chimic ce este coninut n gradientul de H+ reprezint o for proton-
motoare: aceasta permite sinteza ATP la nivelul componentei F1 a ATP sintazei, pe msur ce H+
curg pasiv (n sensul gradientului lor electrochimic) napoi n matrice prin porul de la nivelul Fo.
Pentru ca fora proton-motoare s poat fi folosit la sinteza ATP, este absolut necesar ca
membrana mitocondrial intern s fie impermeabil pentru H+, astfel nct gradientul de H+ s se
menin i protonii acumulai n spaiul intermembranar s se poat ntoarce n matrice numai prin
porul Fo.
Acest model pentru sinteza ATP se numete modelul chemiosmotic i a fost propus de
ctre Peter Mitchell: termenul chemiosmotic descrie o reacie enzimatic ce implic, simultan, o
reacie chimic i un proces de transport.
ADP + Pi + nH+ext ATP + H2O + nH+int
(H ext sunt protonii de pe faa extern a membranei mitocondriale interne; H+int sunt protonii ajuni
+
14
Raportul P/O = numrul de molecule de ATP sintetizate pentru O 2 redus la H2O, sau
pentru fiecare 2 e transferai n LR:
- experimental s-a constatat c numrul de H + necesari pentru sinteza unei molecule de ATP
este 4;
- atunci cnd NADH este oxidat n LR, sunt pompai 10 H+ la nivelul complexelor I, III i IV
(4 + 4 + 2) raportul P/O este 10:4 = 2,5 (prin rotunjire se va considera ca fiind 3);
reacia de oxidare a NADH cuplat cu sinteza ATP este:
NADH + H+ + O2 + 3ADP + 3Pi NAD+ + 3ATP + 4H2O
- atunci cnd succinatul este oxidat n LR, sunt pompai 6 H+ la nivelul complexelor III i
IV (4 + 2) raportul P/O este 6:4 = 1,5 (prin rotunjire se va considera ca fiind 2);
reacia de oxidare a succinatului cuplat cu sinteza ATP este:
succinat + O2 + 2ADP + 2Pi fumarat + 2ATP + 3H2O
- amital (un barbituric) i rotenona (produs din plante utilizat ca insecticid) inhib fluxul e
de la complexul I la coenzima Q;
- malonatul (similitudine structural cu succinatul) inhib competitiv complexul II (succinat
dehidrogenaza);
- antimicina A (un antibiotic toxic) inhib LR ntre cit b i cit c1 (n cadrul complexului III);
- cianurile i monoxidul de carbon inhib citocrom oxidaza (complexul IV).
15
Decuplarea lanului respirator de fosforilarea ADP poate fi realizat:
- 2,4-dinitrofenolul este un decuplant chimic: acid slab cu molecul hidrofob, care poate
strbate membrana mitocondrial intern. Intr n matrice n form protonat i elibereaz un H +
se ntoarce n spaiul intermembranar n form deprotonat; aici capteaz un proton traverseaz
din nou membrana i elibereaz protonul n matrice .a.m.d.; n felul acesta, DNP permeabilizeaz
membrana mitocondrial intern pentru H+, disipnd astfel gradientul de protoni transmembranar
(este un protonofor).
Rata respiraiei (consumul de oxigen, sau altfel spus viteza transportului electronilor prin
lanul respirator) n mitocondrie este reglat riguros; n general este limitat de disponibilitatea de
ADP ca substrat pentru fosforilare, avnd n vedere cuplarea dintre cele dou procese (n prezena
ADP, rata consumului de O2 este semnificativ mai mare dect n absena ADP).
Concentraia intracelular a ADP este o msur a statusului energetic al celulei.
atunci cnd consumul de ATP crete (pentru diverse procese ce au loc cu consum de
energie), acesta este scindat n ADP i Pi rezervele de ATP scad iar concentraia ADP crete
(aceasta semnific faptul c rezervele energetice ale celulei trebuie refcute) crescnd cantitatea
de ADP disponibil pentru procesul de fosforilare, rata respiraiei va crete aceasta va determina
regenerarea ATP;
atunci cnd consumul de ATP este redus, n celul se menin concentraii ridicate de ATP
(ceea ce semnific satisfacerea necesitilor energetice) n aceste condiii, concentraia ADP
este sczut scznd cantitatea de ADP disponibil pentru fosforilare, rata respiraiei va scdea.
Reglarea ratei respiraiei are loc sincronizat cu reglarea vitezei cilor metabolice de
degradare a combustibililor biologici, care duc la sintez de ATP. Acestea sunt, n general,
controlate feedback de nivelul ATP: o cretere a concentraiei ATP (ca urmare a utilizrii sale
reduse) determin scderea vitezei cilor degradative, n timp ce creterea utilizrii ATP duce la
scderea nivelului su i creterea nivelului ADP sau AMP, avnd ca efect creterea vitezei cilor de
oxidare a combustibililor.
Se poate vorbi, astfel, de homeostazia ATP: aceasta se refer la capacitatea celulelor de a
menine niveluri constante de ATP n ciuda fluctuaiilor mari n rata utilizrii sale. ATP-ul se
formeaz att de rapid pe ct este utilizat n activitile celulare consumatoare energie.
16