21/04/2013

1 Genetica bacterian
2

Genetica bacterian
studiaz ereditatea i variabilitatea la bacterii;
suportul material al ereditii este reprezentat de genomul bacterian, suma genelor
unui microorganism;
gena constituie unitatea funcional de baz a informaiei genetice;
genomul bacterian este reprezentat de
- ADN cromozomal (include gene eseniale)
- ADN plasmidic (conine gene care codific caractere de tulpin);
genotip = totalitatea informaiei nscris n genomul bacterian;
fenotip = suma caracterelor observabile consecutiv interaciunii genotipului cu
mediul ambiant.
3

4 Genomul bacterian
cromosom
16x106 perechi nucleotide, 6000 gene
ctrl. structura, creterea, multiplicarea normal a bacteriei
plasmide
elemente genetice extracromosomale
replicare autonom
ADN circular
dispensabile
supravieuirea bacteriei n condiii modificate de mediu
plasmide de virulen
plasmide care codific enzime ale unor ci metabolice particulare
plasmide care codific sinteza unor ageni antimicrobieni
plasmide de rezisten la ageni antimicrobieni
plasmide criptice
episomi
plasmide (sau genome profagice) integrate linear n crs. bacterian

5

9 Variaia fenotipic vs. variaia genotipic

Variaia fenotipic
indus de interaciunea genomului cu factorii de mediu
reversibil
nu se transmite ereditar
Variaia genotipic
modificare brusc a unuia/m.m. caractere ale unui individ
se transmite ereditar
mecanisme:
1
 9 Variaia fenotipic vs. variaia genotipic
Variaia fenotipic 21/04/2013
indus de interaciunea genomului cu factorii de mediu
reversibil
nu se transmite ereditar
Variaia genotipic
modificare brusc a unuia/m.m. caractere ale unui individ
se transmite ereditar
mecanisme:
mutaia
transferul ADN recombinare genetic
10 Mutaia
modificare n secvena nucleotidic a unei gene codon diferit secven de a.a.
diferit
eveniment rar, spontan i imprevizibil
mutaiile acumulate de-a lungul a miliarde de ani, sub efectul seleciei naturale,
explic evoluia speciilor
noile gene aprute prin mutaie se numesc alele i ocup acelai locus genetic ca
gena de origine
11 Modalitile mutaiei
Substituii i inversii nucleotidice modific un singur codon (punctiforme)
codon sinonim M. imperceptibil
codon nou M. cu sens greit
a.a. nou nafara situsului fc. al polipeptidului M. mut
a.a. nou n situsul fc. fc. pierdut/modificat
codon non-sens (stop) M. non-sens, M. polar
Inserii i deleii 1/m.m. nucleotide - cu decalarea citirii mesajului genetic
microinserii/microdeleii mutaii cu schimbare de proiect protein total nou
macroinserii mutaie cu pierderea funciei
macrodeleii mutaii letale/ apariia de genuri noi de bacterii
12

13

14

Rata mutaiei = probabilitatea de apariie spontan a unei mutaii ntr-o populaie
bacterian;
rata mutaiei este foarte sczut (10-7 10-9) dar poate crete n prezena unor
ageni mutageni (chimici sau fizici).
Frecvena mutaiei = proporia unui anumit mutant ntr-o populaie bacterian;
frecvena mutantului poate crete ca urmare a seleciei
- relative (mutantul are un timp de generaie mai scurt)
- absolute (prin prezena unui factor de mediu favorabil mutantului dar defavorabil
restului populaiei).
15

Mutaii bacteriene observate n laborator:

mutaii privind morfologia coloniei bacteriene (variaia S R);
mutaii nutriionale (mutani auxotrofi);
mutaii care duc la pierderea unor factori de patogenitate (mutani aviruleni la
S.pneumoniae care
i-au pierdut capsula);
mutaii care conduc la apariia fenomenului de rezisten la antibiotice (att ADN 2
15 21/04/2013

Mutaii bacteriene observate n laborator:

mutaii privind morfologia coloniei bacteriene (variaia S R);
mutaii nutriionale (mutani auxotrofi);
mutaii care duc la pierderea unor factori de patogenitate (mutani aviruleni la
S.pneumoniae care
i-au pierdut capsula);
mutaii care conduc la apariia fenomenului de rezisten la antibiotice (att ADN
cromozomic ct i cel plasmidic poate fi sediul unor asemenea mutaii).

16

Transferul genetic
se realizeaz n sens unic, de la o bacterie donor la una receptor;
exogenot = materialul genetic transferat;
endogenot = materialul genetic propriu;
evoluia exogenotului n celula receptor
- recombinare: alinierea secvenelor cu omologie structural, urmat de substituirea
uneia sau mai multor gene ntre exo- i endogenot;
- integrare n genomul bacteriei receptor (transpozoni, fagi);
- meninerea n poziie extracromozomal dac este un replicon (plasmide, fagi);
- supus aciunii endonucleazelor de restricie (informaie genetic pierdut).
17

18 Recombinarea genetic
Recombinri legitime (omologie structural exogenot-endogenot)
recombinare generalizat
ruperea i reunirea moleculelor de ADN endogenot, exogenot
exogenot distrus n final
recombinarea situs-specific
zon de omologie pe ambele elemente genetice
episomi (factor F, profagi)
Recombinri nelegitime (recombinri catalizate enzimatic ntre secvene diferite de
ADN) transpoziia
excizia copiilor monocatenare ale unor secvene specifice de ADN, apoi inseria lor
aleatorie n acelai replicon/ diferit
elemente transpozabile
secvene de inserie
transpozoni
19

Elemente genetice transpozabile

reprezint segmente de ADN capabile s se excizeze i apoi s se insere n acelai
replicon (cromozom sau plasmid) sau n unul diferit, putnd determina blocarea
expresiei unei gene n care se inser (factor mutagen);
are loc cu intervenia unei enzime, transpozaza, fr s fie necesar omologia
genetic.
Tipuri de elemente transpozabile
secvene de inserie (SI) constituite din gena care codific transpozaza flancat
de repetri inversate a 20-40 perechi de baze;
transpozoni, care posed n regiunea central una sau mai multe gene ce codific
anumite caractere (ex rezistena la antibiotice), flancate de SI.

3
 are loc cu intervenia unei enzime, transpozaza, fr s fie necesar omologia
genetic. 21/04/2013
Tipuri de elemente transpozabile
secvene de inserie (SI) constituite din gena care codific transpozaza flancat
de repetri inversate a 20-40 perechi de baze;
transpozoni, care posed n regiunea central una sau mai multe gene ce codific
anumite caractere (ex rezistena la antibiotice), flancate de SI.

20

21

22

23

24 Transferuri genetice
transformare
conjugare
transferul prin bacteriofagi
transducia
conversia lizogenic
25 Transformarea
o bacterie accept ADN liber provenit de la bacteria donor (stare de competen)
ADN transformant rezult din liza spontan a bacteriilor donatoare
prezena de ADN liber trebuie s coincid cu starea de competen a bacteriilor
receptoare
exogenotul = ADN transformant d.c., cu dimensiune critic max. 1% din genomul
bacterian (106 da)
n prezena exces ADN doar 10% din bacteriile competente l primesc efectiv
fenomenul a fost descoperit prin experimentri pe oarece cu S.pneumoniae n 1928
i explicat dup dou decenii mai trziu
rol redus n evoluia natural a bacteriilor

26

27

28

Conjugare
- transfer genetic consecutiv contactului fizic ntre dou bacterii cu polaritate sexual
diferit;
- bacteria donor(sex masculin) posed un plasmid conjugativ (factorul F+) cu gene
ce codific sinteza de pili sexuali, prin care se ataeaz la receptori specifici de pe
suprafaa unei celule receptor ( F-, de sex feminin);
- retragerea pililor aduce cele dou celule n contact, prin puntea citoplasmatic care
se stabilete urmnd s fie transferat ADN plasmidic;
- consecutiv acestui tip de conjugare rezult dou celule F+ ;
- plasmidul F poate purta gene adiionale (ex gene de R la antibiotice) care pot fi
transferate;
29

Conjugare (continuare)
-
- plasmidul F integrat n cromozom poate conduce la transfer de gene cromozomale
(ntre o bacterie Hfr i una F-);
- transferul ncepe din vecintatea locului de inserie a plasmidului F, care este ultimul 4
 se stabilete urmnd s fie transferat ADN plasmidic;
- consecutiv acestui tip de conjugare rezult dou celule F+ ; 21/04/2013
- plasmidul F poate purta gene adiionale (ex gene de R la antibiotice) care pot fi
transferate;
29

Conjugare (continuare)
-
- plasmidul F integrat n cromozom poate conduce la transfer de gene cromozomale
(ntre o bacterie Hfr i una F-);
- transferul ncepe din vecintatea locului de inserie a plasmidului F, care este ultimul
transferat;
- cel mai frecvent bacteria receptor ramne F-;
- transferul de ADN la bacterii gram-pozitive este controlat de feromoni sexuali,
molecule de suprafa prin care celulele bacteriene ader ntre ele.
30

31

32

33 Transferuri genetice mediate de bacteriofagi

Transducia
transfer fragment ADN de la bacterie D la bacterie R prin intermediul unui
bacteriofag (temperat)
cotransducia (max. 2% crs. bacteriei D) este limitat la gene bacteriene vecine

Conversia lizogenic
apariia unui nou caracter la bacterii care gzduiesc un profag
bacteriile lizogene manifest noul caracter ct timp gzduiesc profagul
e.g., toxigeneza unor bacterii, sinteza AgO ale salmonelelor
34

35

36

37

38

39 Semnificaii biologice ale variaiei genetice a bacteriilor

variaiile genetice creeaz indivizi cu caractere noi
mutaiile scurteaz timpul de generaie (pierdere structuri i funcii)
transferurile genetice prelungesc timpul de generaie (1-m.m. caractere
suplimentare)
modificrile mediului creeaz avantaje sau dezavantaje pentru diferite variante
selecia relativ
pozitiv pentru mutantele cu timp de generaie mai scurt dect al populaiei
parentale
negativ cnd transferul genetic crete timpul de generaie al variantei
selecia absolut factor de mediu favorabil unei variante dar letal pentru populaia
parental
40

41

42

5
 parentale
negativ cnd transferul genetic crete timpul de generaie al variantei 21/04/2013
selecia absolut factor de mediu favorabil unei variante dar letal pentru populaia
parental
40

41

42