Vibrio cholerae

Definitie: organisme acvatice, adaptate la diverse salinitati, prezente in apele marine si apele din
estuare, in simbioza cu vertebratele si nevertebratele acestor ecosisteme.

- bacili Gram negativi, incurbati in virgula, nesporulati, mobili prin flageli polari mono- sau
multitrichi,

- catalazo +,

- oxidazo +

- nepretentiosi nutritiv, facultativ anaerobi,

- fermenteaza zaharurile, fara producere de gaz,

- produc enzime extracelulare: toxine citotoxice, citolitice, neuraminidaza, chitinaza,

proteaza, lipaze etc.

Vibrionii: microorganisme acvatice:

1. Specii halofile:

- Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus: ape marine, estuarine, costiere, lagunare

2. Specii non- halofile:

- Vibrio cholerae, Vibrio mimicus: ape dulci, rauri, lacuri,

Bacili gram negativi scurti, forma de virgula, incurbati, mobili (datorita unui cil polar)

V. cholerae si V. parahaemolyticus sunt cele mai importante specii ale genului Vibrio.

Ambele specii produc enterita, dar mecanismul este diferit.

V. choleric

- grupa O1 - V. cholerae O:1 cu 2 biotipuri: clasic si biotipul El Tor

- grupa non- O:1, este asociata cu cazuri izolate de holera si cazuri sporadice de diaree.

V. choleric - produce enterotoxina

Vibrio parahemolyticus

sindroame diarice determinate de consumul de alimente de provenienta marina (fructe de

mare).

v. parahaemolyticus este invaziv si toxigen

Holera:

endemica in Asia si epidemica in Africa.

persoane asimptomatice purtatori sanatosi.

Contaminare umana: transmitere fecal orala

Contact interuman direct,

 Consum de apa contaminata (cu MF): cea mai frecventa modalitate de transmitere a
holerei

Consum de alimentele contaminate: alimente de mare, vegetale, produse

nepasteurizate

Se produce colonizarea intestinului subtire.

Vibrionii persista in apele marine sub mai multe forme:

- Forma libera: persista atata timp cat li se ofera concentratii optime de nutrienti

- Forma epibiotica: asociatie intima cu matricea chitinoasa a scoicilor si crustaceelor;

depasesc mai usor bariera acida a sucului gastric decat formele libere,

- Forma dormanta- forme viabile, dar necultivabile.

* Holera: gastroenterocolita de interes major pentru sanatatea publica, prin mortalitate si

morbiditate

- determinata de Vibrio cholerae serogrupuri O:1 si O:139

Sindroame clinice:

- 1. Gastro- enterite: V. cholerae O:1, O:139; V. cholerae non- O:1;

- V. fluvialis, V. mimicus, V. parahaemolyticus

- 2. Infectii ale plagilor: V. cholerae non- O:1, V. alginolyticus, V. vulnificus,

- 3. Pneumonii (la persoane salvate de la inec): V. vulnificus,

- 4. Infectii otice: V. mimicus, V. alginolyticus

- 5. Septicemii: V. cholerae non- O:1, V. vulnificus

Factori de patogenitate- Vibrrio cholerae:

1. Enterotoxina termolabila,
2. Hemolizina termostabila (responsabile de fenomenul Kanagawa),
3. citotoxina,
4. Capsula

B. DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC IN HOLERA COPROCULTURA VIBRION CHOLERAE

Enteritele de tip holeriform
asociarea a 2 factori de patogenitate ai microorganismelor:
- factorul de colonizare: atasare de receptori de la nivelul celulelor mucoasei,
colonizarea mucoasei intestinale
- adera de microvili (marginea in perie a enterocitelor);
 - se ataseaza pe un receptor gangliozidic de pe celulele intestinale si se multiplica.
- producerea de enterotoxina
Enterotoxina- enterocite
Este o proteina formata din 2 subunitati: A, B (binding) .

Subunitatea A stimuleaza adenilat ciclaza sau guanilat cyclaza, enzime care cresc
nivelul nucleotidelor ciclice (cAMP sau cGMP) din enterocite.
Nivelul crescut de cAMP activeaza o pompa de ioni care determina secretia clorului si
a bicarbonatilor in intestinal subtire si inhiba absorbtia sodiului (Na) si K
Rezulta secretia activa a apei si electrolitilor in lumenul intestinal
se manifesta prin:
-varsaturi,
-scaune diareice apoase
nu sunt prezente in materiile fecale resturi celulare si PMN-uri (polimorfonucleare).
COPROCULTURA Vibrio cholerae
1. Produse patologice:
- materii fecale (la bolnavii cu forma acuta de boala, se izoleaza germenii in cultura
pura),
- produs de voma,
- bila,
- lambouri de rufe murdarite cu materii fecale,
- continut intestinal de la cadavre (intestin subtire),
- materii fecale, bila de la contacti, convalescenti, pacienti cu forme inaparente de
boala.

2. Conditii de recolta:
- materiile fecale se recolteaza inainte de administrarea unui chimioterapic,
- de la bolnavii cu tulburari acute, se recolteaza materii fecale din scaun emis spontan,
- daca bolnavul nu are tulburari gastro intestinale (contacti, convalescenti, forme
inaparente de boala, purtatori cronici): se administreaza purgativ salin,
NU se recolteaza cu sonda.

3. Aprecierea aspectului macroscopic:

- materii fecale de consistenta redusa, apoase, aspect riziform (apa de orez),

4. Transport: mediu Cary Blair transportat si stocat la temperatura camerei (V.

cholerae rezista si 1 saptamana in Cary Blair, la temperatura camerei),

5. Examen microscopic:
 - preparat proaspat intre lama si lamela: flora bacteriana cu aspect morfologic
caracteristic: bacterii incurbate in forma de virgula, cu mobilitate f. mare
determinata de cilul polar, mai lung decat corpul bacterian,
- - frotiuri Gram si albastru metilen: absente sau extrem de rare PMN (1-3 PMN/
camp) si bacili incurbati Gram (-) cu flagel polar

6. Imbogatire: apa peptonata alcalina pH 9,0 9,2

incubare la 37C timp de 4- 6- max 8 ore (daca se depasesc 8 ore, flora de asociatie
din materiile fecale, determina acidifierea mediului si vibrionii sunt distrusi),
multiplicarea vibrionilor holerici determina formarea la suprafata mediului de
imbogatire/ apa peptonata, un val (sunt aerobi, se dezvolta la suprafata mediului),

7. Cultivare:
insamantare din suprafata mediului de imbogatire sau din valul format, pe medii
selective, solide:
* moderat selectiv: BSA (Bile Salts, Agar),
* inalt selective: TCBS (Thiosulphate, Citrate, Bile Salts, Sucrose)
* Agar 5% sange berbec,
* Agar MacConkey

8. Incubare:
18- 20 ore la 37C,

9. Identificare Vibrio cholerae pe baza caracterelor culturale

- mediul BSA: colonii plate sau usor convexe, netede, umede, extrem de transparente
(se vad doar dupa deschiderea placii),
- mediul TCBS: colonii galbene,
- geloza- sange: V. cholerae non: O1 produc beta- hemoliza,
- MacConkey: V. cholerae cresc sub forma de colonii lactozo- negative (L-).
- medii cromogene
- in culturi imbatranite: bacili drepti, greu de diferentiat de alti bacili Gram negativi
enterici.
- pe medii cu concentratii suboptimale de NaCl: bacili polimorfi

Identificare pe baza caracterelor microscopice: bacili Gram (-) incurbati, in forma

de virgula, cu flagel polar, mai lung decat corpul bacterian.
- Microscopia preparatelor umede, pe fond intunecat: V. cholerae are o mobilitate
caracteristica, de rostogolire,

Identificare pe baza caracterelor biochimice: V. cholerae clasic si ElTor:

- R. catalazei: (+),
- R. oxidazei (+),
TSI: fermenteaza glucoza fara producere de gaz (G+, g-), zaharoza Z (+/-), H2S (-)
- V. cholerae clasic: lactozo (+) tardiv (L+),
- fermenteaza manita (M+),
- lizindecarboxilaza (+),
- ornitindecarboxilaza (+),
 Identificare pe baza caracterelor antigenice:
- aglutinare pe lama cu ser antiholeric grup O:1,
- aglutinare pe lama cu ser anti O: 139 (mutanta O a biovarului ElTor).
- test de imobilizare: suspensie de materii fecale + 1 picatura de ser antiholeric O:1:
se observa la microscop imobilizarea bacililor.
- Imunofluorescenta: nespecifica.
- Lizotipia:
- Metode de biologie molecula