Universitatea‘’Lucian Blaga’’ din Sibiu

Facultatea de Stiinţe
Specializarea Biologie Aplicată

Profesor :Daniel Daniel

MASTERAND : ROTAR Roxana

1
Citologia exfoliativa vaginala a reprezentat prima tehnica citologica cu ajutorul careia
s-a precizat un diagnostic prin examinarea la microscop a celulelor isolate , cu
aplicabilitate practica in diagnosticul neoplaziilor maligne de col uterin.Metoda a fost
descoperita de Aurel A.Babes si Constantin Daniel .Georgios Papanicolau a
perfectionat aceasta tehnica , transformand-o intr-o metoda de laborator larg acceptata
si utilizata –metoda citologiei cervico-vaginala .Tehnica a fost ulterior extinsa si spre
depistarea unor tumori cu alte localizari ( pulmonare, urinare) .
Primii cercetatori care au demonstat utilitatea folosirii frotiurilor in diagnosticarea
rapida a cancerului de col uterin a fost Aurel A. si Constantin Daniel, care au aratat ca
diagnosticul precoce al cancerului cervical poate fi realizat pe frotiuri ,prezentand
criteriile citologice de malignitate ale celulelor tumorale si indicand totoodata
modelul de studiere al acestora pe frotiurile vaginale colorate prin metoda Giemsa
.Papanicolau a avut meritul de a perfectiona citodiagnosticul exfoliativ enuntata
anterior de Aurel Babes prin clasificarea frotiurilor in 5 clase ., metoda pe care ulterior
a aplicat-o in screeningul cancerului de col uterin.Testul Papanicolau
Testul Papanicolaou este cel mai important test diagnostic pentru depistarea displaziei
cervicale (displazia de col uterin) şi a cancerului de col uterin (cancerul cervical).
Tipuri de celule prezente in mod normal intr-un frotiu citovaginal:
1. Celule pavimentoase :
 Superficiale
 Intermediare
 Bazale
 parabazale
2. Celule endocervicale
3. Celule metaplazice
4. Celule endometriale

Metode de investigatie utilizate care pot preveni cancerul de col

sau îl pot depista la timp:
1. Examenul citologic ( Testul Papanicolau – depistează celulele anormale de la
nivelul colului uterin care se pot transforma canceros;)

-Permite depistarea precoce a leziunilor precanceroase care au potential de a evolua in

cancer de col uterin .

-secundar poate suspecta prezenta unor infectii genitale cu candida sau Trichomonas
Este un test de screening ( de suspiciune )

Clasificarea Examenului citologic

a) Testul Papanicolau conventional (pe lama )

b) Testul Papanicolau in mediu lichid ( in strat subtire )

2
 Testul Papanicolau conventional (pe lama) :

Etapele realizarii unui frotiu Papanicolau :

1. Vizualizarea colului
2. Recoltarea de la nivelul colului uterin ,a celulelor exfoliate ,prin
razuire cu unul sau mai multe instrumente

3. Transferul celulelor de pe dispozitivele de recoltare pe o lama de

sticla

celulele recoltate sunt mai intai intinse ( etalate) pe o lama de sticla ,apoi sunt
fixate si colorate prin trecere succesiva prin mai multe baite cu reactivi si in final
montate ( peste preparatul colorat se lipeste o lamella fina ) obtinandu-se astfel un
frotiu care poate fi pastrat.Etalarea direct pe lama se realizeaza de catre medical
sau asistenta care a efectuat recoltarea.

Avantajele testului Papanicolau Conventional (pe lama )

Sensibilitate mare ( reprezentata de procentul de paciente care au boala si care avor
avea un rezultat pozitiv al testului) si specificitate (procentul de paciente care au boala si
care vor avea un rezultat negative )
-Risc scazut
-Larg acceptat atat de medici cat si de populatia tinta
-Eficienta in reducerea morbiditatii sau mortalitatii
-Este un examen ieftin ,usor si simplu
-Este o tehnica de examinare simpla ,netraumatizanta ,lipsita de risc
-Are valente multiple permitand descoperirea si a unor localizari ale cancerului genital
feminin cu alte sedii decat exocolul , acolo unde colposcopia nu are acces adica
endocervical si endometrial .
-Poate surprinde prezenta neoplaziei in faze estrm de incipiente , nedepistabile prin
niciun alt mijloc de diagnostic de suspiciune

b.Avantaje testul Papanicolau in mediu lichid (in strat subtire )

Spre deosebire de testul Babes –Papanicolau conventional ,cel in mediu lichid ofera o
imagine cat mai fidela asupra starii de sanatate femeilor
Recoltarea este simpla , eliminandu-se etapele de etalare si fixare a lamelor in cabinetul
medical
Recipientul in care se recolteaza proba citologica , contine un lichid de conservare , filtru
pentru conservarea mucusului ,a celulelor inflamatorii si a sangelui ( care nu sunt
relevante pentru diagnostic ) astfel ca are loc o imbogatire a celulelor relevante clinic
,permitand o vizualizare mai rapida si o crestere calitativa a diagnosticului.
Stabilitatea probei in lichidul de conservare , are o durata de 12 luni de la recoltare
,pastrat la temperature camerei .Nu necesita conditii speciale de temperature
Periuta pentru recoltare ( pt probele ginecologice ) raman in flaconul inchis , astfel incat
intreaga cantitate de celule recoltate ajunge in mediul de conservare( 99 % din celulele

3
recoltate ) In cazul metodei conventionale ,la transferal probei pe lama ,doar 20% din
celulele recoltate ajung pe lama ,restul pe periuta care se arunca .
Nu exista riscul contaminarii incrucisate,capacul recipientului nu se va mai deschide
dupa recoltarea probei
Se pot executa mai multe lame din acelasi recipient , nu este necesara o noua recoltare
pentru testul HPV
Scad semnificativ lamele necorespunzatoare ,deci repetari inutile ale testelor
Ea adduce o scdere a numarului de frotiuri care nu pot fi interpretate in siguranta in
etalarea conventionala
Se reduce cu aproximativ 15-20 % timpul necesar interpretari lamelor
Usureaza citirea si interpretarea la microscop prin dispozitia nesuparapusa a celulelor
si permite efectuarea unor investigatii suplimentare din aceeasi recoltare , in special
pentru HPV
Este mai exacta decat examenul papanicolau conventionala
mediul lichid PreservCyt® Solution permite conservarea celulelor in conditii optime
Toate celulele colectate sunt transferate in flacon si sunt astfel disponibile pentru
prelucrare
Sensibilitatea (RRP - rezultate real pozitive) si specificitatea (RRN – rezultate real
negative) sunt crescute
Din materialul existent in flacon se pot efectua teste asociate (testare HPV (screening
HPV - genotipuri 16,18 si cu risc crescut, genotipare HPV – tipizarea pentru 37 de
genotipuri), determinare HPV OncoTect E6/E7 mRNA) si teste suplimentare PCR ADN
C. trachomatis, PCR ADN N. gonorrhoeae
permite o apreciere mai buna a morfologiei celulelor prin etalarea lor in strat subtire pe
frotiu
Avantajele citologiei în mediu lichid vs metoda clasică:
- permite o apreciere mai bună a morfologiei celulelor prin etalarea lor în strat subțire pe
frotiu;
- evită pierderea de probă recoltată cu 37% (vârful periuței cu care se recoltează rămâne
în flacon, rezultând menținerea a 100% celule în probă);
- permite separarea celulelor de sânge, mucus și alte resturi celulare;
- sensibilitatea (RRP - rezultate real pozitive) si specificitatea (RRN – rezultate real
negative) sunt crescute pentru depistarea cancerului și leziunilor precanceroase a colului
uterin:

- folosește colorant Papanicolau proaspăt pentru fiecare lamă;

- mediul lichid permite conservarea celulelor în condiții optime, pe o perioadă de 4
săptămâni la temperatura camerei și 6 luni păstrată la 2 – 8 grade C;
- variabilitatea în colorarea nucleului se traduce prin detalii cromatiniene mai clare și mai
ușor de interpretat;
- din același recipient se testează atât HPV, BTS cât și teste ICC

Toate aceste avantaje ale testarii in mediul lichid contribiue la cresterea acuratetii
rezultatelor .

4
2. Virusul HPV ( Human Papilloma Viruses )
Incadrare sistematica :

Suprafamilia : polymoviridae

Familia: papilloma viridae

Gen : Papillomavirus

specia: Human Papilloma viruses

HPV - Human Papilloma Virus – este un virus comun care se transmite prin contact
sexual (vaginal, oral sau anal). Infecţia persistentă cu HPV reprezintă cauza principală a
cancerului de col uterin..Este una dintre cele mai frecvente infectii care se transmit pe
cale sexuala . Infectia cu virusul HPV reprezinta cel mai important factor de risc
pentru cancerul cervical .Sunt cunoscute peste 100de tipuri diferite de HPV .
IN functie de epiteliul afectat de descriu 2 categorii:
1. HPV cutanate cu tropism pentru epiteliul Keratinizat
2. HPV mucoase cu tropism pentru epiteliul nekeratinizat

Actualmente, cauza principală a cancerului de col uterin se consideră papillomavirusul

uman, care poate conduce la transformarea malignă a celulelor colului uterin..Virusul
HPV genital este relationat cu alterarea colului uterin denumit displazie cervicala si
neoplazia intraepithelial cervical (NIC) .

Displazia cervicala : se numeste displazie cervicala dezvoltarea anormala a celulelor de

la nivelul colului uterin .

Cauze : Virusul HPV

Pe criterii epidemiologice acestea au fost clasificate

1. cu risc scăzut (low-risk): 6, 11, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 70, 81 şi CP6108
2. cu risc crescut (high-risk): 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58,
59 , 68, 73 şi 82.1

Metode de detectie ale infectiilor :

- . Determinarea AND-HPV

5
Genotiparea HPV: are la baza tehnici de biologie moleculară (PCR , hibridizare) care
sunt aplicate unei probe de celule recoltate de la nivelul zonei cervico-vaginale şi
resuspendate în mediu special pentru citologie; tehnica identifică prezenţa în proba
examinată a ADN-ului HPV pentru 28 de genotipuri de HPV prin detectarea unei
secvenţe specifice a regiunii L 1 din genomul virusului
(Testul HPV – depistează infecţia cu virusul HPV care poate cauza modificările
celulelor.) pentru 13 tipuri cu risc inalt (Hpv 16,18, 33,35,45,51,52,56,58,59,68)
Prin Chemoluminiscenta (Metoda HybridCapture II,Digene)
Sau testul de genotipare HPV Linear Array (Roche)
Testul de captura hibrida II este un test de hibridare pr microplaca pentru determinarea
calitativa a ADN -HPV ,realizat printr-o amplificare de semnal ce utilizeaza principiul
chemiluminiscentei .

3.Colposcopia

COLPOSCOPIA – este o investigaţie care permite vizualizarea vaginului, a colului

uterin şi modificările ce intervin la nivelul acestora. Se face cu ajutorul unui colposcop,
un instrument asemănător unui microscop. Colposcopul măreşte de circa 10-40 de ori
imaginea, şi conectat la un computer, medicul poate analiza mult mai bine toate
schimbările de ţesut ce intervin. Împreună cu testul Babeş-Papanicolau, colposcopia oferă
date precise referitor la riscul de apariţie a cancerului de col uterin, dar şi a stadiului de
dezvoltare în care se află acesta. Este recomandată, în primul rând, femeilor care, la
efectuarea frotiului citologic, au primit rezultate anormale. Colposcopia nu este
dureroasă, nu necesită pregătire specială, nu presupune internare şi nu se face sub
anestezie, astfel încât activităţile zilnice nu vor fi perturbate. Examinarea durează, în
medie, 10-15 de minute.

Colposcopia este o metoda neinvaziva de a examina mai indeaproape textura si

celularitatea colului uterin. El este de fapt un microscop ce poate mari imaginea pana la
25 de ori astfel putandu-se observa in situ eventualele leziuni la nivelul tesutului.

4.Biopsia

Biopsia cervicala este recoltarea unei portiuni din tesutul suspectat de a avea modificari
celulare. Poate fi de 3 tipuri: biopsia prin ciupire (recoltarea unei portiuni mici din col),
conizatia (recoltarea unui fragment mai mare in forma de con), chiuretajul endocervical
(introducerea unei chiurete la nivelul orificiului colului pentru a racla celulele de la acest
nivel.

Biopsia colului uterin sau biopsia cervicala este extragerea unei probe de tesut de la
nivelul colului uterin pentru a vedea daca exista celule canceroase .

Rezultatele biopsiei .

Anormalitatile biopsiei se numeste neoplazie intraepiteliala cervicala (NIC)

6
Clasificarea Neoplaziei cervicale :

1. NIC 1 –usoara ( leziuni interesand o treime din grosimea epiteliului )

2. NIC 2-moderata (Leziuni interesand doua treimi din grosimea epiteliului )

3. NIC 3-severa (Leziuni interesand toata grosimea epiteliului )

Factori de risc ai cancerului de col uterin

 Contactul sexual la o varsta frageda

 Parteneri sexuali multipli
 Boli cu transmitere sexuala
 Fumatul
 Varsta
 Numarul de sarcini
 Utilizarea contraceptivelor