28/02/2018

1 Staphylococcus
2 Minidefiniţie
• coci Gram-pozitivi aşezaţi în grămezi; pot fi observaţi şi izolaţi, în perechi sau scurte
lanţuri
• imobili
• catalază pozitivi, oxidază negativi
• nepretenţioşi nutritiv
• aerobi, facultativ anaerobi
• tolerează >7,5% NaCl
3

4 Clasificare
Testul coagulazei îi clasifică în
- coagulazo-pozitivi: S.aureus;
- coagulazo-negativi: mai multe specii izolate de la om, dintre care S.epidermidis,
S.saprophyticus, S.haemolyticus, S.warneri, S.hominis, S.lugdunensis.
•
5

7 Staphylococcus aureus
• Importanţa medicală
• determină infecţii comunitare sau nosocomiale care se remarcă prin frecvenţă şi
diversitate, unele cu evoluţie deosebit de gravă (bacteriemii cu localizări
secundare, şoc septic, şoc toxic stafilococic)
• s-a dovedit capabil să dezvolte rezistenţă la toate antibioticele folosite în terapie

• Habitat: colonizează tegumentul şi mucoasele (nări, faringe şi/sau intestin) la ~ 30%

din indivizii normali.

• Rezistenţa la factorii de mediu: foarte rezistent

– întuneric,
– uscăciune,
– lizozim,
– acţiunea bactericidă nespecifică a serului,
– acizi graşi de pe tegument
8

Caractere morfo-tinctoriale
• sunt cele caracteristice genului;
• în unele produse patologice poate predomina dispoziţia in diplo, fiind dificilă
diferenţierea de S.pyogenes;
• gram-variabili în frotiul din puroi provenit din colecţii închise sau din culturi vechi.

Caractere de cultură
• nepretenţios nutritiv
• colonii mari, S, de consistenţă untoasă, pigmentate în galben-portocaliu sau
nepigmentate ( alb-cenuşii) pe geloză nutritivă;
• pe geloză-sânge coloniile pot fi hemolitice;
1
 • în unele produse patologice poate predomina dispoziţia in diplo, fiind dificilă
diferenţierea de S.pyogenes; 28/02/2018
• gram-variabili în frotiul din puroi provenit din colecţii închise sau din culturi vechi.

Caractere de cultură
• nepretenţios nutritiv
• colonii mari, S, de consistenţă untoasă, pigmentate în galben-portocaliu sau
nepigmentate ( alb-cenuşii) pe geloză nutritivă;
• pe geloză-sânge coloniile pot fi hemolitice;
• dezvoltă colonii manito-pozitive pe mediul Chapman (mediu hiperclorurat cu
manită şi roşu fenol).
9

10

11 Mannitol salt agar (MSA) is selective because it contains 7.5% salt–a high
salt concentration that promotes the growth of some organisms while
discouraging the growth of others. MSA is a differential medium because it
contains the sugar mannitol and the pH indicator phenol red. Although both
Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus aureus can tolerate the
high salt content of MSA, only S. aureus can ferment mannitol
12 Factori de patogenitate
• componente structurale
– glicocalix (capsula)
– peptidoglican
– acid ribitol teichoic
– proteina A
– coagulaza legată

• toxine
– hemolizine (α, β, γ, δ)
– leucocidina
– toxine exfoliative (ETA, ETB)
– enterotoxine (A-E, H, G, I)
– toxina 1 a sdr. şocului toxic stafilococic (TSST-1)

• enzime
– coagulaza
– catalaza
– hialuronidaza
– fibrinolizina
– lipaze
– nucleaze
13 Factori de patogenitate
Virulenţa acestei specii este rezultatul efectului combinat al mai multor factori de
patogenitate

1. Structuri parietale
• peptidoglicanul manifestă proprietăţi endotoxină-like
• acidul ribitol teichoic, cu specificitate de specie, are proprietăţi adezive la
receptorii celulari şi determină reacţii de sensibilizare după infecţii repetate
• proteina A leagă IgG prin Fc şi împiedică opsonizarea şi fagocitoza
• adezine la proteine ale gazdei:
• fibrinogen/fibrină (coagulaza legată)
• fibronectină 2
 patogenitate
28/02/2018
1. Structuri parietale
• peptidoglicanul manifestă proprietăţi endotoxină-like
• acidul ribitol teichoic, cu specificitate de specie, are proprietăţi adezive la
receptorii celulari şi determină reacţii de sensibilizare după infecţii repetate
• proteina A leagă IgG prin Fc şi împiedică opsonizarea şi fagocitoza
• adezine la proteine ale gazdei:
• fibrinogen/fibrină (coagulaza legată)
• fibronectină
• colagen
• microcapsula polizaharidică cu efect antifagocitar

14

2. Exoenzime
• coagulaza liberă
- se leagă de protombină şi determină conversia fibrinogenului în fibrină
- înglobează cocii în trama de fibrină, protejându-i de fagocite
- formează trombi, implicaţi în patogenia tromboflebitelor septice
• stafilokinaza
- activează plasminogenul, determinând disoluţia cheagurilor de fibrină
• hialuronidaza
- hidrolizează matricea intercelulară
• lipaze
- active pe lipidele din plasmă şi sebum, explicând tropismul pentru unitatea pilo-
sebacee
15

3. Exotoxine
• citotoxine
- hemolizine α, β, γ şi δ, active pe eritrocite provenite de la diferite specii
animale; cel mai bine caracterizată este hemolizina α, incriminată în manifestări
ale şocului septic
- leucocidina care are efect leucolitic, prezentă în special la tulpini izolate din
leziuni dermonecrotice

• toxine exfoliative (A şi B)
- au activitate proteazică, determinând ruperea desmozomilor de la nivelul
stratului granulos, cu formare de bule epidermice
- implicate în sindromul pielii opărite
16

17

3. Exotoxine
• toxina 1 a sindromului şocului toxic (TSST-1)
- funcţionează ca superantigen, stimulând nespecific limfocitele T cu eliberare de
citokine în cantitate mare
- determină febră, erupţie eritematoasă cu descuamare, hipotensiune şi
insuficienţe funcţionale multiorgan
- manifestările au fost asociate cu utilizarea tampoanelor hiperabsorbante
intravaginale dar şi cu infecţii extragenitale

• enterotoxine
- mai multe tipuri antigenice (A-E, H, G, I)
- funcţionează de asemenea ca superantigene
3
 citokine în cantitate mare
- determină febră, erupţie eritematoasă cu descuamare, hipotensiune şi
28/02/2018
insuficienţe funcţionale multiorgan
- manifestările au fost asociate cu utilizarea tampoanelor hiperabsorbante
intravaginale dar şi cu infecţii extragenitale

• enterotoxine
- mai multe tipuri antigenice (A-E, H, G, I)
- funcţionează de asemenea ca superantigene
- termorezistente
- determină toxiinfecţii alimentare; enterotoxinele B şi C pot determina şi
manifestări sistemice (şoc toxic stafilococic)
18 Superantigens and the non-specific stimulation of T cells
TSST-1, enterotoxin, and exfoliative toxin are superantigens
Superantigens bind directly to class II major histocompatibility complexes
(MHC II) of antigen-presenting cells outside the normal antigen-binding
groove. Up to one in five T cells may be activated. Cytokines are released in
large amounts, causing the symptoms of toxic shock.
19 Virulence factors of Staphylococcus aureus

20 Patogeneza infecţiilor cu S. aureus

Factori care favorizează infecţiile stafilococice:
– deficienţele chemotaxiei leucocitare:
• congenitale – sdr. Down
• dobândite – diabet, artrita reumatoidă
– deficienţe ale opsonizării prin Ac – hipogamaglobulinemia
– deficienţe ale distrugerii i.cel. a bacteriilor secundar fagocitozei – boală
granulomatoasă cronică
– leziuni cutanate – arsuri, incizie chirurgicală, eczeme
– corpi străini – suturi, proteze intratisulare
– infecţii cu alte microorganisme
– boli cronice – neoplazii, boli cardiace, alcoolism
– administrare preventivă sau terapeutică a AB
21 Infecţii cu S. aureus
• Infecții localizate supurative
– Infecţii cutanate
• Foliculita
• Furuncul
• Carbuncul (furuncul antracoid)
• Hidrosadenita
• Panariţii
• Impetigo / impetigo bulos
• Infecţii ale plăgilor
• Sindromul pielii opărite
– Infecţii ale mucoaselor (otite, sinuzite, infecţii uterine postabortum, ITU)
– Mastită puerperală, pneumonie, endocardită, meningită
– Osteomielită post-operatorie/post-traumatică
• Infecții generalizate
– Bacteriemie, septicemie
• Toxiinfecţii alimentare
• Sindromul şocului toxic stafilococic
22 Pathogenesis of S. aureus infections
4
 – Infecţii ale mucoaselor (otite, sinuzite, infecţii uterine postabortum, ITU)
– Mastită puerperală, pneumonie, endocardită, meningită 28/02/2018
– Osteomielită post-operatorie/post-traumatică
• Infecții generalizate
– Bacteriemie, septicemie
• Toxiinfecţii alimentare
• Sindromul şocului toxic stafilococic
22 Pathogenesis of S. aureus infections

23 Foliculită
24

25 Carbuncul
26

27

28 Impetigo bulos
29 Sindromul pielii opărite
30 Leziuni embolice la un pacient cu endocardită cu Staphylococcus aureus.
31

32 Impetigo stafilococic
33

34 Imunitatea anti-stafilococică
• fagocitoza este mecanismul major de apărare
• nu există o corelaţie între titrul Ac şi receptivitatea/ rezistenţa la infecţia cu S.aureus
• Ac anti-leucocidină par a proteja împotriva infecţiilor recurente
• vaccin antistafilococic eficient doar la 50% din persoanele vaccinate
35

Diagnosticul de laborator al infecţiilor supurative

• se bazează pe examen bacteriologic

• produsul patologic variază în raport cu localizarea infecţiei
• examenul microscopic are în special valoare în cazul produselor provenite din zone
normal sterile
• izolarea S.aureus o realizăm prin însămânţare pe geloză-sânge iar în cazul
produselor contaminate pe mediul selectiv Chapman
• identificarea se bazează pe caracterele de cultivare, microscopice, testul catalazei
şi coagulazei
• în investigaţii epidemiologice (izbucniri epidemice) se poate recurge la lizotipare
sau tipare moleculară
• enterotoxinele și TSST-1 – metode imunologice/biologie moleculară

36 Diagnostic de laborator
• Frotiu din puroi, colorat Gram, X1000
37 Diagnostic de laborator
• Frotiu din puroi, colorat Gram, X1000
38 S.aureus – colonii pe agar-sânge
39 Tratament
• purtători sănătoşi – AB (mupirocin) local (nări) 5
 28/02/2018
36 Diagnostic de laborator
• Frotiu din puroi, colorat Gram, X1000
37 Diagnostic de laborator
• Frotiu din puroi, colorat Gram, X1000
38 S.aureus – colonii pe agar-sânge
39 Tratament
• purtători sănătoşi – AB (mupirocin) local (nări)
• infecţii minore – autolimitate după drenaj chirurgical + AB topic (bacitracină, acid
fusidic, mupirocin, clorhexidină)
• infecţii severe: drenaj chirurgical + antibiotic
– penicilină – doar tulpini care nu produc beta-lactamază
– oxacilină – tulpini producătoare de beta-lactamază
– vancomicină – MRSA (sinteză PLP 2a).
MRSA este rezistent la toate beta-lactaminele
– tulpini cu sensibilitate modificată la vancomicină – dalfopristina+quinupristină
– alternative: eritromicină, lincomicină (infecţii osoase), pristinamicină, acid fusidic,
aminoglicozide, cotrimoxazol (trimetoprim + sulfametoxazol)
• toaleta corespunzătoare a plăgii şi aplicarea unui antiseptic microbicid (e.g., săpun
antiseptic, alcool iodat, hexaclorofen)
40 Epidemiologie
• Rezervor de infecţie
– pacienţi cu infecţii cu S. aureus
– purtători sănătoşi de S. aureus
•
• Transmitere
– direct: purtători nasali  picături Flügge; pacienţi  personal medical (70-80%
purtători sănătoşi)  alţi pacienţi
– indirect (aer, pulberi, obiecte, mâini, alimente, insecte)
•
• Frecvente infecții nosocomiale

41 Profilaxie
• Generală
– antisepsie, asepsie, igienă personală
– TI, arsuri, chirurgie cardiovasculară, neonatologie
• Specială
– purtătorii nasali de tulpini agresive de S. aureus trebuie carantinaţi faţă de
pacienţii cu risc crescut până la eradicarea portajului
• Specifică
– vaccinuri inactivate + anatoxine
– autovaccin
•
42

Stafilococii coagulazo-negativi
•
• constituienţi ai florei bacteriene rezidente de la nivelul tegumentului şi mucoaselor
colonizate
• pot determina infecţii legate de prezenţa unor implante protetice şi catetere,
grave în special la imunodepresaţi
• sinteza unor exopolizaharide favorizează ataşarea la suprafaţa acestor dispozitive
• cea mai frecventă specie implicată este S.epidermidis 6
42 28/02/2018
Stafilococii coagulazo-negativi
•
• constituienţi ai florei bacteriene rezidente de la nivelul tegumentului şi mucoaselor
colonizate
• pot determina infecţii legate de prezenţa unor implante protetice şi catetere,
grave în special la imunodepresaţi
• sinteza unor exopolizaharide favorizează ataşarea la suprafaţa acestor dispozitive
• cea mai frecventă specie implicată este S.epidermidis
• diagnosticul bacteriologic impune criterii care să stabilească semnificaţia clinică a
izolatului, eliminand o posibilă contaminare
• stafilococii coagulazo-negativi sunt frecvent meticilino-rezistenţi
• S.saprophyticus ocupă o nişă specială, fiind cauza unor infecţii ale tractusului
urinar in special la femeia tânără; sensibil la majoritatea antibioticelor, inclusiv
benzil-penicilină (rezistenţă naturală la novobiocină)
43 Infections associated with indwelling devices
44 Stafilococi coagulază-negativi
•
• S. epidermidis
• S. saprophyticus
• S. haemolyticus
• S. lugdunensis
• S. schleiferi
45 S. epidermidis
• prezent pe tegumente
• produce glicocalix (biofilm)  aderenţă
– Protectie contra AB
– Protectie contra efectorilor imunitari
– Focare din care SCN se deverseaza in sange  septicemie
• infecţii de cateter, infecţii de pace-maker, endocardită subacută a valvelor protezate,
infecţii ale grefei vasculare, infecţii asociate cu şunturi LCR, proteze articulare,
dispozitive ortopedice, dializă peritoneală ambulatorie cronică, ITU
• 50% tulpini rezistente la oxacilină
• identificare: coagulază-negativ, sensibil la novobiocină
•
46 S. saprophyticus
• condiţionat patogen
• ITU la femei tinere, active sexual
• uretrite la bărbaţi tineri, activi sexual
• coagulază-negativ, rezistent la novobiocină
• sensibil la majoritatea antibioticelor (inclusiv P)
47 S. saprophyticus are resistant to novobiocin (top half of SBA plate), a factor
which distinguishes them from sensitive S. epidermidis (bottom half of SBA
plate).
48 Alţi stafilococi coagulază-negativi
• S. haemolyticus
– endocardite subacute (valve native), septicemii, peritonite, ITU, infecţii plăgi
chirurgicale, oase, articulaţii
• S.lugdunensis
– endocardite pe valve protezate/ native, infecţii de cateter, septicemii, abcese
cerebrale, osteite, osteoartrite cr., infecţii proteze vasculare, infecţii cutanate/
plăgi, peritonite 7
 plate). 28/02/2018
48 Alţi stafilococi coagulază-negativi
• S. haemolyticus
– endocardite subacute (valve native), septicemii, peritonite, ITU, infecţii plăgi
chirurgicale, oase, articulaţii
• S.lugdunensis
– endocardite pe valve protezate/ native, infecţii de cateter, septicemii, abcese
cerebrale, osteite, osteoartrite cr., infecţii proteze vasculare, infecţii cutanate/
plăgi, peritonite
• S. schleiferi
– empiem cerebral, infecţii plăgi, bacteriemii, osteite, infecţii cateter
49

50