Dozarea zaharurilor reducătoare din extract de măr

cu reactiv 3,5-dinitrosalicilic

Zaharurile reducătoare conţin o grupare carbonil C=O liberă. Metoda de faţă implică
oxidarea grupării funcţionale aldehidice prezente în glucoză sau a grupării funcţionale cetonice
din fructoză. Glucoza existentă în extractul de măr poate fi dozată colorimetric cu rectiv 3,5-
dinitrosalicilic, acesta din urmă este redus la acid 3-amino,5-nitrosalicilic în condiţii alcaline.
oxidare
grupare aldehidică ----------> grupare carboxil
reducere
acid 3,5-dinitrosalicilic ----------> acid 3-amino,5-nitrosalicilic

Reactivi şi soluţii:
a). reactiv dinitrosalicilic
- se dizolvă prin încălzire 10 g de reactiv 3,5-dinitrosalicilic în 200 ml NaOH 2M
- se dizolvă 300 g de tartrat dublu de sodium şi potasiu în 600 ml apă
- cele două soluţii se amestecă prin agitare
- reactivul este diluat la un volum final de 1 litru
b). soluţie standard de glucoză 0,1% (0,1 g/100 ml = 100 mg/100 ml = 1 mg/ml)
c). extract proaspăt de măr

Modul de lucru :
a). prepararea extractului
- 10 g măr se mojarează cu 20 ml apă distilată şi se lasă 10 minute la temperatura camerei
- extractul este transferat în tuburi de centrifugă şi se centrifughează 15 minute la 5000 rpm
- după centrifugare supernatantul este colectat într-un balon cotat de 50 ml şi se aduce la semn
cu apă distilată.
b). prepararea curbei etalon
Nr. Sol standard glucoză 0,1% Apă distilată Concentraţia Absorbanţa la
crt. (ml) (ml) glucoză (mg/ml) 540 nm
1 0 1 0
2 0,2 0,8 0,2
3 0,4 0,6 0,4
4 0,6 0,4 0,6
5 0,8 0,2 0,8
6 1 0 1
- se pipetează în fiecare eprubetă câte 2 ml reactiv dinitrosalicilic şi se incubează 5 minute pe
baie de apă la fierbere
- eprubetele se racesc şi în fiecare se adaugă câte 7 ml apă distilată
- se citeşte absorbanta la 540 nm faţă de blanc (eprubeta nr 1)
- se trasează curba etalon (absorbanţa pe ordonată şi concentraţia pe abscisă) şi se determină
ecuaţia dreptei care trece prin origine
c). proba
- din proba obţinută se ia 1 ml care se va prepara similar punctelor din curba etalon
- prin extrapolarea densităţilor optice citite ale probelor citite la 540 nm pe curba etalon se va
determina concentraţia de glucoză din extractul de măr, înmulţindu-se apoi cu factorul de
diluţie şi raportându-se la gram de măr.