LP 20. Identificarea bacililor gram-negativi fermentativi (E. coli).

Examenul citobacteriologic al urinii

OBIECTIVE:
I. Cunoaşterea etapelor identificării unui bacil gram-negativ fermentativ;
II. Însuşirea etapelor examenului citobacteriologic al urinii în infecţii produse de bacterii
conditionat patogene.

I. Identificarea bacililor gram-negativi fermentativi (E. coli)

1. Caractere microscopice:
• bacili gram-negativi cu extremităţi rotunjite;
• E.coli este mobil.

2. Caractere de cultivare:
• nepretenţioşi nutritiv;
• aerobi-, facultativ anaerobi;
• colonii de tip S;
• E.coli formeaza colonii lactozo-pozitive pe medii diferenţiale lactozate.

3. Caractere biochimice:
 catalazo-pozitivi,
 oxidazo-negativi,
E.coli
 lactozo-pozitivi, fermenteaza glucoza cu producere de gaz, nu produc H2S (TSI)
 mobil, indol-pozitivi, ureaza-negativi (MIU)
 citrat negativi (Simmons)
 lizin decarboxilaza pozitiv
 fenilalanin-dezaminaza negativ

4. Caractere antigenice – utile de studiat pentru tulpinile de E. coli care produc boala diareica
acuta

II. Examenul citobacteriologic al urinii

Condiţia microbiologicǎ a tractului urinar:
- rinichii + ureterele + vezica urinară si uretra proximala = normal sterile;
- uretra distală = normal colonizată (stafilococi coagulazo-negativi, enterococi, difterimorfi,
enterobacteriacee).

Etiologia bacteriană a infecţiilor tractusului urinar (ITU):

1) bacterii condiţionat patogene
Bacili gram negativi:
 Escherichia coli
 Proteus mirabilis

1
  Enterobacter cloacae
 Klebsiella pneumoniae
 Pseudomonas aeruginosa
 Acinetobacter baumannii

Coci gram pozitivi:

 Enterococcus faecalis
 Staphylococcus saprophyticus
 Streptococcus agalactiae
 Staphylococcus aureus

Bacili gram pozitivi:

 Corynebacterium urealyticum

2) bacterii primar patogene:

 Mycobacterium tuberculosis

Etapele examenului citobacteriologic al urinii în ITU determinate de bacterii condiţionat

patogene:
1) Prelevate utile diagnosticului de ITU:
- urină (examen citobacteriologic);
- sânge (hemoculturǎ) la pacienţii cu pielonefritǎ.

Prelevarea urinii:
- Prelevǎri uzuale: proba curatǎ, prinsǎ în zbor din jetul mijlociu;
- Prelevǎri speciale: aspiraţia suprapubianǎ, prelevǎri prin cateter.

- Proba curatǎ prinsǎ în zbor din jetul mijlociu:

 Toaleta localǎ cu apǎ şi sǎpun, urmatǎ de uscarea zonei decontaminate;
 Momentul prelevǎrii: prima urinǎ de dimineaţǎ sau dupǎ cel puţin 3 ore de la micţiunea
anterioarǎ;
 Volumul prelevat: 20 ml pentru izolarea cantitativǎ a microorganismelor condiţionat
patogene.
 Jetul mijlociu, fara a intrerupe mictiunea
Transportul probelor la laborator pentru examinare în maxim 1-2 orǎ de la prelevare.
Refrigerarea urinii dacă se temporizează examinarea.

2) Examen microscopic
A. aprecierea calităţii probei
• prezenţa leucocitelor pledeazǎ pentru prezenta inflamatiei,
• celule epiteliale scuamoase sunt markerii contaminǎrii (cel mai frecvent vaginale)
B. aprecierea leucocituriei
- preparat umed - camera Fuchs Rosenthal
 ≥ 10 leucocite / mm3 = leucociturie prezenta
 ≤ 3 leucocite / mm3 = leucociturie absentă

2
  4 – 9 leucocite / mm3 – proba Addis stabileşte numarul exact al leucocitelor eliminate in
urina
- frotiu de urină colorat Gram, din urina omogenizata: > 1 leucocit / câmp microscopic =
leucociturie
C. aprecierea bacteriuriei (frotiu colorat Gram din urina omogenizata): prezenţa a ≥ 1 – 2
bacterii/câmp microscopic = BACTERIURIE SEMNIFICATIVǍ (se coreleaza cu ≥ 105
UFC/ml urina)

3) Urocultura cantitativă = însǎmânţarea pe gelozǎ sânge şi, respectiv, pe agar MacConkey a

câte 0,1 ml din diluţia 10-2 a urinii omogenizate, urmată de incubare la 37ºC şi numărarea
coloniilor dezvoltate.
Calculăm bacteriuria după formula:
Nr. UFC/mL = N×D×1/volumul însămânţat
N = nr. colonii dezvoltate pe mediu
D = inversul diluţiei

Interpretarea rezultatelor :
a. O singură specie de bacili gram-negativi izolată în concentraţie de 105 UFC/ml, ≥ 5x104
UFC/ml stafilococi sau ≥ 104 UFC/mL levuri:
• în prezenţa piuriei = ITU;
• în absenţa piuriei = colonizare abortivă / probă examinată tardiv fără refrigerare imediată.

b. Două tipuri de izolate care depăşesc fiecare 105 UFC/mL:

- pe o singură probă = cel mai frecvent contaminare
- acelasi rezultat în 2 probe succesive = infecţie mixtă

c. Mai multe tipuri de bacterii care depăşesc fiecare 105 UFC/mL = contaminare/ probă
examinată tardiv fără refrigerare imediată.

4) Identificarea bacteriei cu semnificaţie clinică

5) Antibiograma
- metoda difuzimetrică (pentru antibiotice active în urină);
- agar Mueller- Hinton
- antibiotice active: nitrofurantoin, cotrimoxazol, peniciline de semisinteza ± inhibitori de beta-
lactamaza, cefalosporine, aminoglicozide, fluorochinolone.

Bibliografie: Buiuc D. Microbiologie Medicală, ed. a VI-a, Editura “Gr. T. Popa” Iaşi, 2003,
cap. 11, pag. 181-187; cap. 46, pag. 406-413.

În sală se găsesc:
- Frotiu urina colorat Gram (leucociturie si bacteriurie semnificativă)
- Frotiu urina colorat Gram (leucociturie si bacterioscopie negativa)
- Urocultura cantitativă (urocultură pozitiva, cu semnificație clinică de infectant)
- Urocultura cantitativă (cultură fără semnificație clinica de infectant)
- Urocultura contaminata (cultura mixta in cantitate mare)

3
- Cultura E. coli pe geloza sange, agar Mac Conkey; teste biochimice: TSI, MIU, mediu
Simmons, FA, lizina
- Antibiograma difuzimetrică pe agar Mueller-Hinton (aminopeniciline (ampicilina),
aminopeniciline + inhibitori de beta-lactamaze (amoxicilina+acid clavulanic);
cefalosporine (cefotaxim, ceftazidim); fluorochinolone (ciprofloxacin, levofloxacin);
carbapeneme (ertapenem, imipenem); aminoglicozide (gentamicina, amikacina); tabele,
rigle