0.

Examniare frotiuri colorate Gram, Ziehl-Nielsen, AM

Coci gram-pozitivi: Staphylococcus (aureus etc.), Streptococcus (pneumoniae,

influenzae etc.), Enterococcus
- stafilococ, streptococ (pneumococ), enterococ
- stafilococ dispunere in ciorchine
- streptococ dispunere in lanturi
- pneumococ doi cate doi, uneori cu capsula comuna (in diplo)
- Streptococcus pneumoniae prezinta capsula cu structura polizaharidica
(la coloratie cu albastru de metilen ramane un halou necolorat in jurul
bacteriei)

Coci gram-negativi: Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhea

- anumite tulpini de Neisseria meningitidis prezinta capsula

Bacili gram-pozitivi: Corynebacterium diphteriae, Bacillus anthracis, Listeria

monocytes, Actinomyces, Clostridium (tetani, botulinium)
- bacilul antracic are capsula polipeptidica (la coloratie cu albastru de
metilen ramane un halou necolorat in jurul bacteriei)
- bacilul antracic si clostridium sunt capabile sa sporuleze (la coloratia
gram, locul sporului ramane necolorat)

Bacili gram-negativi: Pseudomonas aeruginosa (bacilul piocianic), Enterobacterii

(Salmonella spp., Escherichia coli, Klebsiella spp., Shigella spp., Enterobacter spp.)
- captele usor rotunjite (enterobacterii)
- drept cu capetele taiate drept (bacilul antracic)
- Klebsiella pneumoniae si unele tulpini de E.coli au capsula polizaharidica
(la coloratie cu albastru de metilen ramane un halou necolorat in jurul
bacteriei)

Cocobacilii gram-negativi: Haemophilus influenzae, Bordetella pertussis, Brucella

abortus

1. Efectuarea/colorarea unui frotiu din cultura bacteriana

2. Efectuarea/colorarea unui frotiu din produs patologic (colectie purulenta)
3. Colorare prin Ziehl Nielson a unui frotiu din produs pat. (sputa)

Se prefera utilizarea de lame si lamele noi, trecute prin urmatoarele procedee

(imersare in amestec sulfo-cromic cateva zile, spalare, clatire, pastrare in alcool
50%).
Se vor usca inainte de folosire prin tamponare cu o carpa curata si se
degreseaza suplimentare prin flambare.
Pentru culturi microbiene realizate in mediu lichid/p.p. cu consistenta fluida
- asezam lama cu partea flambata in sus
- sterilizam ansa, asteptam sa se raceasca
- prelevam produsul/cultura si o depunem in centrul lamei
- intindem prin miscari de hasurare, in strat cat mai subtire, fara sa ne
apropiem de marginile lamei
- lasam lama sa se usuce
- fixam frotiul prin flambare pe cealalata fata

Pentru culturi microbiene realizate in mediu solid/p.p. cu consistenta solida

- asezam lama cu partea flambata in sus
- sterilizam ansa, o lasam sa se raceasca
- depunem o picatura de ser fiziologic sau apa distilata in centrul lamei
- prelevam un fragment de produs/cultura si il depunem peste picatura
- omogenizam
- intindem prin miscari de hasurare, in strat cat mai subtire, fara sa ne
apropiem de marginile lamei
- lasam lama sa se usuce
- fixam frotiul prin flambare pe cealalta fata

Coloratia Ziehl-Nielsen
- se foloseste pentru identificarea bacililor acid-alcool rezistenti (genul
Mycobacterium, nocardiile) – au culoare rosie pe fond albastru (contin o
cantitate substantiala de lipide la nivel parietal, ex. acizi mycolici)
- acoperim complet lama cu fucsina bazica nediluata
- trecem becul de gaz pe sub lama pana incepe emiterea de vapori (nu
atingem temperatura de fierbere)
- repetam de trei ori procedura
- spalam insistent cu apa
- adaugam amestecul decolorant acid-alcool pentru 2-3 minute
- spalam cu apa
- recoloram cu albastru de metilen 1 minute
- spalam cu apa
- asezam frotiul in stativ pentru uscare

Coloratia Gram
- diluam intr-un recipient fucsina 9 parti apa/1 parte fucsina
- acoperim frotiul cu violet de metil pentru 1-3 minute (nu neaparat in
intregime)
- indepartam colorantul, acoperim frotiul cu lugol (mordant) pentru 1-3
minute
 - indepartam lugolul
- acoperim frotiul cu un amestec de alcool-acetona 7-8 secunde
- spalam cu apa
- acoperim frotiul cu fucsina diluata 1 minut
- spalam cu apa
- asezam frotiul in stativ pentru uscare

Albastru de metilen
- acoperim frotiul cu solutie de albastru de metilen 3-4
- spalam cu apa
- asezam frotiul in stativ pentru uscare
- examinam la microscop

12. Caracterizati comportamentul biochimic al unei enterobacterii

insamantate pe medii diferentiale
AABTL diferentiaza bacteriile lactoza-pozitive (E.coli) de bacteriile lactoza-negative
(Salmonella, Shigella).
Salmonella (Typhi?) duc la formarea H2S care se combina cu FeSO4 din mediu ->
FeS negru.
E.coli poate fermenta toate 3 bacteriile (lactoza, zaharoza, glucoza).
Shigella nu consuma toate zaharuruile si nu produce FeS.

Coloniile S
- suprafata bombata si neteda, margini circulare, lucioasa
- germenii pastreaza structura antigenica, eventual capsula
- virulenta este conservata (majoritatea bacteriilor studiate: S. aureus, S.
pyogenes)

Coloniile R
- plata, suprafata rugoasa, margini crenelate
- structura antigenica nu este caracteristica, nu se pastreaza capsula,
virulenta neconservata
- Bacillus anthracis, Mycobacterium tuberculosis, Corynebacterium
diphteriae (antracic, tuberculoza, difterie)

Coloniile M
- mare, stralucitoare, mucoasa
- data de bacterii care prezinta capsule mari (Klebsiella pneumoniae,
Streptococcus pneumoniae – poate forma S sau M)
16-18. P.p. exudat faringian, coprocultura, urocultura
Recoltarea trebuie facuta preferabil inainte ca pacientului sa i se administreze
antibiotic. Daca este in stare de urgenta, imediat dupa prelevare se poate alege un
antibiotic pe criterii de probabilitate care sa fie administrat pana la obtinerea
rezultatului antibiogramei.
In cazul in care tratamentul cu antibiotice a fost inceput inainte de
prezentarea la spital, se poate recomanda:
- oprirea tratamentului 24-48h
- recoltarea pp. imediat inainte de urmatoare doza
- incercarea de a antagoniza antibioticul in mediul de cultura
- notificarea in formular a tratamentului urmat de pacient

Se vor recolta portiunile cele mai reprezentative (portiuni muco-purulente,

muco-sangvinolente) la momentul optim (de exemplu in accesul febril pentru
hemocultura).