UNIVERSITATEA „ ALEXANDRU IOAN CUZA” din IAŞI

FACULTATEA DE CHIMIE
Anul universitar 2020-2021
Semestrul I

DISCIPLINA
TEHNICI ŞI INSTRUMENTE ANALITICE UTILIZATE ÎN LABORATOARELE CLINICE
ACTIVITӐŢI PRACTICE DE LABORATOR

PROTOCOL

SAVIUC-PAVĂL ANA-MIHAELA

GRUPA: 1553 B
EFECTUAREA PRACTICӐ A LUCRӐRII
1. SCOPUL/OBIECTIVUL LUCRӐRII
Se știe că medicamentele care conţin fier sunt importante, în special pentru prevenirea și
tratamentul anemiei cu deficit de fier. Pentru a evita acest deficit, sunt necesare surse adecvate de
fier precum alimente sau medicamentele care au un conținut suficient de mare de fier.
Scopul acestei lucrări este determinarea fierului din medicamentele indicate persoanelor
cu deficit de fier (Feroglobina B12, Feroză-F și Feroză) prin aplicarea unei metode
spectrofotometrice.

1. PRINCIPIUL METODEI

Spectrofotometrul este un instrument capabil să măsoare cu precizie cantitatea de fotoni

absorbită de trecerea lor prin soluția de analizat. Astfel, se poate determina indirect și cantitatea
de substanță.

Raza de lumină compusă din fascicule de fotoni a căror lungime de undă variază între
185 – 800 nm (domeniul UV-Vis) este proiectată pe cuva care conține moleculele de analit,
înregistrându-se pentru fiecare lungime de undă numărul de fotoni transmiși prin analit. La
ciocnirea fotonului cu moleculele de analit, acesta poate să absoarbă fotonul, trecând din stare
fundamentală într-o stare excitată. Astfel, absorbția reduce numărul de fotoni de o anumită
lungime de undă, reducând și intensitatea luminii transmise. Condiția de absorbtie a fotonul
incident de către molecula de analit este dată de egalitatea dintre energia cuntificată hν a
fotonului și diferența de energie ΔE între nivelul fundamental și cel excitat al moleculei de analit.

Spectrofotometria este utilizată în chimia analitică pentru determinarea cantitativă a

soluțiilor ce conțin cationi ai metalelor tranziționale, care fiind colorate absorb radiații
electromagnetice din spectrul vizibil sau a compușilor organici, în special cei care manifestă un
înalt grad de conjugare și se bazează pe legea Lambert-Beer, conform căreia cantitatea de lumină
absorbită de o soluție este expresia unei funcții exponențiale a concentrației și a lungimii de undă
în raport cu acea soluție.
 2. MODUL DE LUCRU

Metoda propusă se bazează pe reacția fierului cu tiocianatul de amoniu după o

dezagregare pe cale umedă a medicamentelor cu HNO 3 și H2O2. Lungimea de undӑ maximӑ a
complexului de fier format este la 430 nm. Dependenţa liniară a legii Lamber-Beer este
respectatӑ în intervalul 0,5 - 60 μg / mL în fier.
Pregătirea soluţiilor de calibrare
Soluția stoc am obținut-o prin măsurarea unui volum de 1,25 mL din soluția standard pe
care l-am introdus într-un flacon volumetric de 50 mL și am adus la semn cu apă deionizată. Din
soluție stoc de fier, se vor pipeta, în 5 pahare Berzelius de 100 mL, volumele 1 mL, 2 mL, 3 mL,
4 mL și 6 mL pentru a obţine o curbӑ de calibarea în intervalul 0,5 - 60 μg / mL în fier. Apoi se
daugӑ 6 mL HNO3 concentrat, 2 mL de H2O2 30% şi se acoperӑ cu câte o sticlă de ceas.
Conținutul paharelor se va încălzit la 110 0C pe o plitӑ electricӑ pentru 30 de minute.
Dupӑ rӑcire, soluţiile se vor transfera în flacoane volumetrice de 50 mL şi se vor
completa cu apă deionizată pânӑ la semn.
Pregătirea probei
În tabletele pe bază de fier sunt 30 mg Fe care trebue aduse într-un flacon volumetric de
50 mL.
Am cântărit la balanța analitică două tablete dintr-un produs farmaceutic.
Masa a două tablet de fier = 1,0051g
Masa unei tablete = masa totală/2 = 0,50255g
mcântărit = 0,5024g
Am mojarat o tabletă într-un mojar cu pistil, apoi am determinat masa ei prin cântărire la
balanța analitică.
Masa tabletei mojarate = 0,5001g
Am împărțit masa putrei rezultate la 20 și am obținut:
Mpudră /20 = 0,5001/2 = 0,025005g
Din pudra rezultatӑ am câtӑrit trei cantitӑţi de probӑ cu masele m 1 = 0,0253 g, m2 =
0,0252 g și m3 = 0,0253g care apoi le-am transferat în câte un pahar Berzelius de 100 mL. Am
daugat în fiecare pahar Berzelius câte 6 mL HNO 3 concentrat și 2 mL de H2O2 30%, apoi le-am
acoperit cu o sticlă de ceas. Conținutul paharelor va fi încălzit la 110˚C pe o plitӑ electricӑ pentru
cca. 30 de minute.
 Dupӑ rӑcire soluţiile se vor transfera în flacoane volumetrice de 50 mL şi completate, cu
apă deionizată, pânӑ la semn.
Dacӑ tableta farmaceuticӑ are un conţinut în fier de 0.1 g, se recomandӑ, pentru analiza
ulterioarӑ, sӑ se utilizeze un volum de 1÷2 mL din soluţia preparatӑ în maniera prezentatӑ mai
sus.
Pregătirea soluţiilor de analizat
2 mL din fiecare dintre soluțiile preparate mai sus (probe şi soluţii de calibrare) se vor
transfera în tuburi gradate de 5-10 mL peste care se adaugӑ câte 2 mL de soluţie de pH = 3,0 şi
câte 1mL de 40,0 % (SCN-). Soluțiile se vor încălzii pe o baie de apӑ la 30˚C timp de 5 minute.
Absorbanțele soluțiilor se vor măsura la 430 nm față de o probӑ martor, care trebuie
preparatӑ în mod identic cu probele de analizat.
Soluția martor: 2mL soluție pH = 3 + 1 mL (SCN-) 40%, încălzită timp de 5 minute pe
baie de apă la 30˚C.

PREZENTAREA DATELOR EXPERIMENTALE

3. DATELE EXPERIMENTALE

Soluții pentru Concentrația Absorbanța

calibrare (μg/mL)
S1 1 0,3490
S2 2 0,3943
S3 3 0,5051
S4 4 0,8238
S5 6 0,8221

Curba de calibrare
 f(x) = 0 0.9000
R² = 0
0.8000

0.7000
Absorbanța
0.6000

0.5000

0.4000

0.3000
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00
Concentrația (μg/mL)

4. GRAFICE SI CALCULE

Probe Concentrația Absorbanța

(μg/mL)
Proba 1 1 0,1051
Proba 2 2 0,0844
Proba 3 3 0,0890
Curba analitică pentru determinarea Fierului

0.1200

Absorbanța 0.1100

0.1000 f(x) = 0.01 x + 0.07

R² = 0.91

0.0900

0.0800
0.00 1.00 2.00 3.00
Concentrația (μg/mL)

Amedie probă = 0,0928

Amedie blank = 0,5789

Eroarea absolută:

Δ = Amedie blank - Amedie probe = 0,5789 – 0,0929 = 0,4861

∆ 0,4861
Eroarea relativă =
A medie blank
= = 0,8397
0,5789

Deviația standard, S
S = √¿ ¿ ¿
0,000151+ 0,000071+0,0000144 0,0002364
S=
√ 2
=
√ 2
= √ 0,0001182

S = 0,01087

Deviația standard relativă, RDS

RDS = 100 • S /Amedie
RDS = 100 • 0,01087/ 0,0928
RDS = 11,71%
 S 0,01087
Eroarea standard = = = 0,00627
√n √3

2•10−4
Eroarea medie de pipetare : = 1,15 • 10 - 4
√3

Eroarea
0,2 • S =
√n
Eroarea
0,2 • 0,01087 =
√3
Eroarea = 0,2 • 0,02371• √ 3

Eroarea = 0,00376

Deoarece deviația standard relativă are valoarea de 11,71% pentru probele investigate,
indică o eroare în pregătirea celor trei probe, dar metoda este importantă pentru analiza fierului
din produsele farmaceutice.