UNIVERSITATEA „ ALEXANDRU IOAN CUZA” din IAŞI

FACULTATEA DE CHIMIE
Anul universitar 2020-2021
Semestrul I

DISCIPLINA
TEHNICI ŞI INSTRUMENTE ANALITICE UTILIZATE ÎN LABORATOARELE CLINICE
ACTIVITӐŢI PRACTICE DE LABORATOR

PROTOCOL

SAVIUC-PAVĂL ANA-MIHAELA

GRUPA: 1553 B
EFECTUAREA PRACTICӐ A LUCRӐRII
1. SCOPUL/OBIECTIVUL LUCRӐRII
Se știe că în majoritatea soluțiilor biologice, se gӑsesc o varietate de compuși solubili și
insolubili.
Etanolul este un compus organic din clasa alcoolilor, întâlnit în toate băuturile alcoolice.
Este un lichid volatil, inflamabil și incolor, cu un miros caracteristic, un drog psihotrop care dă
dependență, cauzând intoxicație acută, obținut prin fermentația zaharurilor prin intermediul
drojdiilor, sau prin procedee petrochimice.
Lucrarea are drept scop determinarea cantitativă a concentrația de etanol din probe
biologice prin aplicarea unei metode spectrofotometrice.

1. PRINCIPIUL METODEI

Spectrofotometrul este un instrument capabil să măsoare cu precizie cantitatea de fotoni

absorbită de trecerea lor prin soluția de analizat. Astfel, se poate determina indirect și cantitatea
de substanță.

Raza de lumină compusă din fascicule de fotoni a căror lungime de undă variază între
185 – 800 nm (domeniul UV-Vis) este proiectată pe cuva care conține moleculele de analit,
înregistrându-se pentru fiecare lungime de undă numărul de fotoni transmiși prin analit. La
ciocnirea fotonului cu moleculele de analit, acesta poate să absoarbă fotonul, trecând din stare
fundamentală într-o stare excitată. Astfel, absorbția reduce numărul de fotoni de o anumită
lungime de undă, reducând și intensitatea luminii transmise. Condiția de absorbtie a fotonul
incident de către molecula de analit este dată de egalitatea dintre energia cuntificată hν a
fotonului și diferența de energie ΔE între nivelul fundamental și cel excitat al moleculei de analit.

Spectrofotometria este utilizată în chimia analitică pentru determinarea cantitativă a

soluțiilor ce conțin cationi ai metalelor tranziționale, care fiind colorate absorb radiații
electromagnetice din spectrul vizibil sau a compușilor organici, în special cei care manifestă un
înalt grad de conjugare și se bazează pe legea Lambert-Beer, conform căreia cantitatea de lumină
absorbită de o soluție este expresia unei funcții exponențiale a concentrației și a lungimii de undă
în raport cu acea soluție.
 2. MODUL DE LUCRU

Metoda cuprinde douӑ etape: în prima etapă, etanolul dintr-o probӑ apoasă este extras
folosind un solvent nealcoolic (tri-n-butil fosfat (TBP)), iar în a doua etapă este oxidat de ionii de
crom, care astfel sunt reduși de la +6 (culoare portocalie) la +3 (culoare verde-albastru).

Pregătirea soluţiilor de calibrare

Pentru a estima concentrație de etanol se vor folosi soluții de etanol diluate cu apă
deionizată în intervalul 0,2% până la 10% etanol.
Am preparat soluția stoc utilizând 5 mL soluție de etanol pe care i-am introdus într-un
balon cotat de 50 mL apoi am adăugat 0,5 mL K2Cr2O7 și 4,5 mL HClO4, apoi am adus la semn
cu apă deionizată.
Din soluția stoc am măsurat câte 1 mL, 2 mL, 3 mL, 4 mL, 5 mL și 10 mL pe care l-am
introdus într-un balon cotat de 25 mL și am adăugat 0,5 mL K 2Cr2O7 și 4,5 mL HClO4, apoi am
adus la semn cu apă deionizată.
Absorbanțele soluțiilor se vor măsura la 595 nm față de o probӑ martor, care trebuie
preparatӑ în mod identic cu probele/etaloanele de analizat.
Pregătirea probei
1 mL probӑ lichidă se amestecӑ într-un microtub cu un ml de TBP (tri-n-butil fosfat și
apoi amestecul se agitӑ puternic timp de 1 minut cu ajutorul unui vortex, apoi amestecul este
centrifugat la 3500 x g timp de 5 minute pentru a se separa în două faze. Faza superioară, stratul
TBP, clară și transparent se separӑ de soluţia apoasӑ care în timp se va tulbura.
Se vor extrage 5mL din fază superioară care se vor transfera într-un alt microtub unde se
vor amesteca cu 0,5 mL de K2Cr2O7 și se vor agita energic timp de 1 min cu ajutorul unui vortex.
Amestecul rezultat se va lӑsa pentru cca 10 minute, la temperatura camerei, pentru a
permite produsului de oxidare să-și dezvolte culoarea (verde-albastru). Din soluţia coloratӑ se
vor mӑsura 2,5 mL, 5 mL, 7,5 mL şi se vor dilua cu apă deionizată direct în cuva unui
spectrofotometru UV-vis.
Soluţia astfel preparatӑ se va citii la un spectrofotometru la 595 nm faţӑ de o probӑ martor
(blank) - K2Cr2O7.
PREZENTAREA DATELOR EXPERIMENTALE

3. DATELE EXPERIMENTALE

Domeniul de liniaritate este cuprins între 2 și 80%

Soluții pentru Concentrația (%) Absorbanța

calibrare
S1 1 0,1889
S2 2 0,2570
S3 3 0,3050
S4 4 0,3300
S5 5 0,3360
S6 10 0,3421

Curba de calibrare

0.3500

0.3000 f(x) = 0.06 x + 0.13

R² = 0.99
0.2500
Absorbanța

0.2000

0.1500

0.1000
0.00 1.00 2.00 3.00
Concentrația (%)

5. GRAFICE ȘI CALCULE

Prebe Concentrația (%) Absorbanța

 P1 2,5 0,5720
P2 5 0,6954
P3 7,5 0,8520

0.9000

f(x) = 0.06 x + 0.43

0.8000 R² = 1
Absorbanța

0.7000

0.6000

0.5000
2.00 4.00 6.00 8.00
Concentrația (%)

Amedie probă = 0,7065

Amedie blank = 0,2932

Eroarea absolută:

Δ = Amedie blank - Amedie probe = 0,29320 - 0,70650 = 0,4133

∆ 0,4133
Eroarea relativă =
A medie blank
= = 1,4096
0,2932

Deviația standard, S

S= √ 0,5720−0,7065 ¿2 +(0,6954−0,7065)2 +(0,8520−0,7065)2 ¿

2
0,01809+ 0,000123+0,02117 0,03938
S=
√ 2
=
√ 2
= √ 0,0197

S = 0,14032
Deviația standard relativă, RDS
 RDS = 100 • S /Amedie
RDS = 100 • 0,14032/ 0,7065
RDS = 19,86%

S 0,14032
Eroarea standard = = = 0,08102
√n √3

2•10−4
Eroarea medie de pipetare : = 1,15 • 10 - 4
√3

Eroarea
0,2 • S =
√n
Eroarea
0,2 • 0,14032 =
√3
Eroarea = 0,2 • 0,14032 • √ 3

Eroarea = 0,0496

Deoarece deviația standard relativă are valoarea de 19,86% pentru probele investigate,
indică o eroare în pregătirea celor trei probe, dar metoda este importantă pentru analiza
alcoolului din probele biologice.