UNIVERSITATEA „ ALEXANDRU IOAN CUZA” din IAŞI

FACULTATEA DE CHIMIE
Anul universitar 2020-2021
Semestrul I

DISCIPLINA
TEHNICI ŞI INSTRUMENTE ANALITICE UTILIZATE ÎN LABORATOARELE CLINICE
ACTIVITӐŢI PRACTICE DE LABORATOR

PROTOCOL

SAVIUC-PAVĂL ANA-MIHAELA

GRUPA: 1553 B

EFECTUAREA PRACTICӐ A LUCRӐRII

 1. SCOPUL/OBIECTIVUL LUCRӐRII
Cobalamina sau Vitamina B12 este o vitamină hidrosolubilă implicată în metabolismul
proteinelor, lipidelor și glucidelor, contribuind la funcționarea normală a fiecărei celule din
corpul uman.
Ciancobalamina și hidroxicobalamina sunt formele farmaceutice utilizate pentru a
preveni sau trata deficitul vitaminic. Indiferent de formă lor farmaceutică , toate vitaminele B12
conțin elementul cobalt.
Lucrarea are drept scop determinarea cantitӑţii de Co dintr-un preparat farmaceutic ce
conţine Vitamia B12 prin spectrometrie de absorbţie atomicӑ.

2. PRINCIPIUL METODEI

Spectrometria de absorbție atomică este o metodă de analiză cantitativă de înaltă

selectivitate, care are la bază fenomenul de absorbție al radiațiilor electromagnetice de către
atomii probei de analizat, aflați în stare de vapori.

Proba de analizat (sub formă de soluție) este pulverizată într-un dispozitiv de atomizare
confecționat dintr-un tub de grafit, acoperit în interior cu grafit pirolitic, plasat orizontal și
conectat la o sursă de curent alternativ, unde au loc o serie de procese elementare care duc la
obținerea atomilor liberi. Sistemul de răcire cu apă, plasat în jurul tubului de grafit, permite
revenirea acestuia la temperature ambiantă, la scurt timp după terminarea analizei.

Atomii liberi ai metalului astfel obținuți absorb energia radiantă, provenită de la o sursă
exterioară de radiații, când au loc tranziții ale electronilor de valență din starea fundamental în
stări energetic superioare (primele nivele excitate).

Starea excitată a metalului este foarte puțin stabilă, astfel că după un timp foarte scurt
atomii revin în starea fundamentală și eliberează energia absorbită sub formă de energie
neradiantă.

Frecvența radiației absorbite de către atomii probei de analizat aflați în stare liberă trebuie
să fie egală cu frecvența radiației emise cu probabilitatea cea mai mare de către atomii aceluiași
element.
 Sursa de radiații exterioară utilizată în spectroscopia de absorbție atomic trebuie să fie o
sursă liniară monocromatică, care să emită radiații de lungimi de undă specifice (linia de
rezonanță a atomului de analizat) și suficient de intense (lampa cu catod cavitar monoelement
sau multielement).

3. MODUL DE LUCRU

Pregătirea curbei de calibrare.

Soluțiile standard de lucru de Co se vor prepara în aşa fel încât sӑ se obţinӑ o curbӑ de
calibrare care sӑ ajute la determinarea corespunzӑtoare a nivelului de Vitaminӑ B12 (respectiv
Co) din preparatul farmaceutic, în parametrii optimi ai echipamentului.
Concentraţia soluţie stoc este 1000 mg/L şi domeniul de liniariate pentru Co, în cazul
utilizӑrii cuptorului de grafit, este cuprins între 0,50 – 5,0 μg/L.
Pentru prepararea soluției stoc 1 am măsurat 0,1 mL soluție standard, am introdus-o într-
un balon cotat de 100 mL și am adus la semn cu o soluție de HCl 1%.
Pentru prepararea soluției stoc 2 am măsurat 1,25 mL soluție stoc 1, am introdus-o într-un
balon cotat de 50 mL și am adus la semn cu o soluție de HCl 1%.
Din soluția stoc 2 am mӑsurat pe rând următoarele volumele de soluţie: 0,5 mL, 1 mL, 3
mL, 4 mL și 5 mL necesare pentru a prepara un set de soluţii etalon de Co în 5 flacoane de 25
mL și am adus la semn cu o soluție de HCl 1%.
Pregătirea probei.
Am preparat trei probe din produsul farmaceutic ce conține vitamina B 12. Astfel, am
măsurat câte 0,1 mL, 0,2 mL și 0,3 mL din acest produs farmaceutic, iar fiecare probă măsurată
am introdus-o în câte un pahar Berzelius. Pentru dezagregare am dăugat în fiecare pahar cu proba
măsurată câte 1,0 mL soluție concentrată de H2SO4 și 1,0 mL H2O2. Peste paharele Berzelius am
aşeazat câte o sticlă de ceas, iar ulterior le-am pus la încӑlzit (în nişӑ), pe o plitӑ electricӑ, la
100°C, până la dizolvarea completă a probei (5 minute).
După dizolvare, am lăsat paharele să se răcească, iar apoi lichidul rezultat l-am transferat
cantitativ într-un flacon cotat de 25 mL şi am adus la semn cu o soluţie de HCl 1%.
Proba martor (blank) am preparat-o într-un balon cotat de 25 mL utilizând 1 mL soluție
de H2SO4 și 1 mL H2O2, și am adus la semn cu o soluție de HCl 1%.
PREZENTAREA DATELOR EXPERIMENTALE

4. DATELE EXPERIMENTALE

Soluții pentru Concentrația Absorbanța

calibrare (μg/L)
S1 0,5 0,02881
S2 1 0,19560
S3 3 0,05353
S4 4 0,06884
S5 5 0,08258

Curba de calibrare:

0.08000
f(x) = 0.01 x + 0.02
R² = 0.99
Absorbanța

0.06000

0.04000

0.02000
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0
Concentrația (μg/L)

5. GRAFICE ȘI CALCULE

Concentrația vitaminei B12 este de 50 μg/mL

M B12 = 1355,38 g/mol

1355,38 μg Vitamină B12 …………………58,933 μg Co

 50 μg vitamin B12 ………………………… x μg Co

x = 2,1740 μg Co din Vitamina B12

Domeniul de liniaritate al Co este cuprins între 0,5 și 5 μg/L

Volumul necesar din soluția de probă pentru obținerea soluției stoc 1

cCo = 998 μg/L

c1V1 = c2V2 → 998 • V1 = 1 • 100 → V1 = 0,1 mL

Volumul necesar din soluția stoc 1 pentru obținerea soluției stoc 2

25 ppb = 25 μg/L
c1V1 = c2V2 → 1000 • V1 = 25 • 50 → V1 = 1,25 mL

Absorbanțele probelor:

Probe Concentrația Absorbanța

(μg/L)
Proba 1 1 0,11571
Proba 2 2 0,07538
Proba 3 3 0,07403

Curba analitică pentru determinarea Cobaltului

 0.12000

0.11000
f(x) = − 0.02 x + 0.13
R² = 0.77
0.10000
Absorbanța
0.09000

0.08000

0.07000

0.06000
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00
Concentrația (μg/L)

Dacă luăm în calcul toate cele 3 probe eroarea relativă și deviația standard au volori
foarte mari, iar dacă luăm în clcul doar primele două probe putem spune că metoda este eficientă
pentru analiza medicamentului investigat în scopul controlului calității.

0.12000

f(x) = − 0.04 x + 0.16

0.11000 R² = 1

0.10000
Absorbanța

0.09000

0.08000

0.07000
0.00 1.00 2.00 3.00
Concentrația (μg/L)

Absorbanțele Blank – urilor

 HCl 1% - 0,00153

Probe Concentrația Absorbanța

Blank (μg/L)
Blank 1 1 0,00026
Blank 2 2 0,00417
Blank 3 3 0,00855

Amedie blank = 0,00433

Curba analitică a blank -urilor

0.00900
0.00800 f(x) = 0 x − 0
R² = 1
0.00700
0.00600
Absorbanța

0.00500
0.00400
0.00300
0.00200
0.00100
0.00000
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00
Comcentrația (μg/L)

Amedie blank = 0,00433

Amedie probe = 0,08837

Eroarea absolută:

Δ = Amedie blank - Amedie probe = 0,00433 - 0,08837 = 0,08404

∆ 0,08404
Eroarea relativă =
A medie blank
= = 19,41
0,00433

Deviația standard, S
 (0,11571−0,08837)2+(0,07538−0,08837)2+(0,07403−0,0883)2
S=
√ 2
0,00075+ 0,000169+0,0002056 0,0011246
S=
√ 2
=
√ 2
= √ 0,0005623

S = 0,02371

Deviația standard relativă, RDS

RDS = 100 • S /Amedie
RDS = 100 • 0,02371/ 0,08837
RDS = 26,83%

S 0,02371
Eroarea standard = = = 0,0136
√n √3

2•10−4
Eroarea medie de pipetare : = 1,15 • 10 - 4
√3

Eroarea
0,2 • S =
√n
Eroarea
0,2 • 0,02371 =
√3
Eroarea = 0,2 • 0,02371• √ 3

Eroarea = 0,0082

Deoarece deviația standard relativă are valoarea de 26,81% pentru probele investigate,
indică o eroare în pregătirea celor trei probe, dar metoda este importantă pentru analiza
Cobaltului din Vitamina B12 existentă ca produs farmaceutic.