Identificarea spirochetelor.

Diagnosticul de laborator al leptospirozei

Obiective:
1. Cunoasterea principalelor caractere utilizate pentru identificarea spirochetelor
2. Cunoasterea metodelor de diagnostic direct in leptospiroza
3. Cunoasterea metodelor de diagnostic serologic in leptospiroza

1. Identificarea spirochetelor

Treponema Borrelia Leptospira

Caractere bacterii Gram-negative spiralate, mobile

microscopice
subtiri, groase fine,
capete efilate unul sau ambele capete
indoite in carlig
spire regulate spire laxe si neregulate spire regulate, stranse,
putin adanci

- pot fi observate in - pot fi observate pe - pot fi observate in

microscopie pe fond
intunecat si pe preparate
colorate prin impregnare
argentica
- nu pot fi observate pe
preparate colorate Gram sau
Giemsa
frotiu colorat Giemsa microscopie pe fond
sau Wright si in intunecat
microscopie pe fond - nu pot fi observate pe
intunecat preparate colorate Gram
sau prin impregnare
argentica

- Mobilitate fibre axiale periplasmice fibre axiale axistil format din 2

inrulate in jurul periplasmice flageli periplasmici in
protoplastului jurul carora se inruleaza
protoplastul
Caractere de strict anaerobe sau microaerofile - strict aerobe
cultura microaerofile
- foarte pretentioase nutritiv - pretentioase nutritiv - pretentioase nutritiv
– speciile patogene nu - cultiva lent - temperatura optima 28-
cultiva pe medii acelulare 30ºC

2. Diagnosticul direct in leptospiroza:

Clasificarea leptospirelor:
- tulpinile patogene sunt reunite în specia Leptospira interrogans (e.g. serovaruri Icterohaemorrhagiae,
Autumnalis, Canicola, Pomona)
- tulpinile nepatogene au fost plasate în specia Leptospira biflexa (e.g. serovar Patoc )

Produse patologice:
- sânge
- LCR
- urină
- postmortem: microfragmente de ficat, corticală renală, plămâni, suprarenale.
 Examen microscopic:
a. Microscopia pe fond întunecat:
→ indicată pentru sedimentul urinar şi LCR
→ în sânge expansiunile fibrilare ale hematiilor pot fi confundate cu leptospirele
→ leptospirele = filamente regulat spiralate, luminiscente, foarte mobile, descriind mişcări de „sfredel”
→ metodă lipsită de sensibilitate şi nespecifică

b. Imunofluorescenţa directă = metodă specifică

Cultivarea:
→ Izolare din sânge sau LCR în primele 10 zile de boală;
→ Izolare din urină după prima săptămână de boală, timp de 3 luni;
→ Sunt necesare mai multe probe deoarece concentraţia leptospirelor poate fi scăzută;
→ Cultivă optim la 28-30 ºC, în aerobioză, pe mediu de cultură lichid Korthof îmbogăţit cu ser de iepure;
→ Culturile se urmăresc până la 30 de zile prin microscopie pe fond întunecat la intervale de 5 zile.

Tehnici de biologie moleculară

- PCR
- Metode de hibridizare directă

3. Diagnosticul serologic in leptospiroza

Reacţia de aglutinare microscopică = metoda de referinţă

- măsoară capacitatea serului pacientului de a aglutina leptospire vii;
- utilizează antigene specifice de tip preparate din tulpini patogene;
- practicată doar în laboratoarele de referinţă.
Aglutininele apar în a doua săptămână de boală.
Titrul la pacienţii infectaţi este > 100

Teste alternative:
- hemaglutinarea indirectă
- aglutinarea pe lamă
- ELISA
→ mai puţin sensibile sau specifice
→ folosesc antigene preparate din tulpini saprofite