Anexa 2: Recoltarea probelor de sange

Seng*le si serul sunt prohe{e cel rnai {rec',,sni recoltaie p*ntru inr'restiGarea
f*car*iar de bcii
tr"ansmisibile
patogen in cultura si prrr
Sangeie veRos poate fiutilizat penlru izolarea si iclentrflcarea agefitului
inoculare sau serul poate fi separat pentru det*ctarea rnaterialului
geneiic iex. utili:encj r"eaclie
pcR], a anticcrpilor specifici. a antigenelor sau toxinelor {ex. prin Et-lsAi
peniru pr-elucrarea majoritatii probelor pentru diagnosti*ui paicgenilr:r vii"a1i, cla;a nii +':xista o
indicatie cJiferita, este de preferat serul fata de sangele integral'
adica c prcrir
cand urrneaza sa se testeze anticorpii este de prJferat cclectarea seruriior cer"echi.
1-d saptamant
in perioada aCilta, la debutul bolii si o proba in conr,'a!escenta, dupa
peniru preparaie* lan:eir-:r ;le'riiLl
sengeie poate fi *e asemenea coiectal prin punctie digitala
pentru a fi analizat'
nricroscopie sau prin absorbtia pe discuri dln hartie speciala rle fiitrr'1, inn'nle
ilc cate cri este posibll, probele de sange penti'u hernocuitura ti"ebuie prel*vale "l
pacientului sa ii fie adrninisti-ate antibiotice'

Proba de sange venos

Materiale pentru colectare .,, - :-r)-^ ,irl'
* Dezinfectia cutanata: aicocl 70% {atcocl isopropilic, etanol) sai"j povidone- j*dine 1[J ''
tampoane, cCImprese, leuccplast (band aid)
* Manusi de unica folosinta din latex sau vinil
. Garcu, \,/acutainer, l,4onovette sau d!spozitr,te siri"riiare peniru colectarea sang*i'':i s:'rrgi fie
unica foiosinla si ace
daca exista indicaile)'
, vacutainer sau tuburicu dop insurubabii sterile (sau criotuburi"
pentru ccpii), cu m*dii aCec'''at*
flacoane pentru henroculturu 1SO*r pentr"u arJiilti, 25rnl
r . Eticirete si rvrarker reeistent
Metoda de colectare
. Plasati garoui deasupra locuiui de venopunctie locui punct *i cu
. palpatj si localieativena. Este foai"te important sa dezinfectati70% prin stergere-a pie lti
meticutozitate cu poi.,idon iodina 10% sau alcool izopropilic
Lasati d*airlfectat"':l sa se
conc*ntric, dinspre centrul locului de venopunctie catre exte;-ipr.
evapore. Nu mai atingeii pieiea' Practicati venopunctia
. Daca recoltati cr-.r siringi de unica{olosinta co*'tentionale, recnltatl 5-10 ml ce san! * ir:iegi-ai
cie la aciulti, 2-S ml de la copii si 0,5-2 ml de la
sugari'
iirb dr
. Dara recoltati cu sistern vaccum, recoltati cantitaiea dorita de sange i!r*cl in fie c';:r'e
4.ancnnri Si flaCOn de hemOCUltUra.
. ;:i;;;ati garout. Apiicari presiune tocaia pana la incetare,a sangerai-ii, sl apiicaii
leucoplast {daca este agreal} , - ,1^ !^ ,!r.,ro :,r;ri
, Transferaii proba in tuburile de transport cu dcp si flacoani:le de hemacuiiu:"a' *l:lit:"niJ
tehnica aseptica. lnsurubaii strans dopurile' .- -, ^--
n:r:iodei de
corecle si
ca respectati instructiunile fabricantuiui asupra cantitatii
" inoiulare a flacoanelor de hemocultura'
Asigurati-va
ur':*i n":arxtt
* Eiichetati tubul, incluzand nunrarui unic de rdentiflcare a p;acienlului, cu aiulorui
reristent materiaie de
* . Nu repuneti aparatorea la acele utilizate. Aruncati-le direcl: in containe rut de
unica folosinta. cu ac*ia;l
. . completati fisa de investigai-e a cazutui siformularul de solicitare a analizei
n tJ rnar cle identificare'
Manipulare si transport
' , asigurate
Flacoanele de hemocultura si tuburile cu probe de sange trebuie transportate rapid si
intr-un conteiner inchis cu capac insurubabil iau intr-un stativ, intr-o cuiie pe ntru
transport.
" lzolati mecanic in material moale sau susperyiati flacoanele in timput transportului pe ter"en
accidentat, pentru prevenirea lizei celulelor. ln jurul flacoanelor trebuie sa fie o caniitaie
suflcienta de material absorbant pentru a putea absorbi tcrt lichidul, in caz de varsare,
' Daca specimenul va ajunge Ia laborato r in 24 ore, majoritatea patogenllor pot fi recuperatt
din hernocultura din flacoanele transportate la temperatur,a am.biania.

$epararea serului
Materiale suplimentare necesare
' . Pipete Pasteur ster"ile si pipete cu bula sau pipete de transfer flexibite (pastete). L.rlri*reie
sunt rnai usor de manipulat si de inactivat in conditii de teren,
. Tuburi sterile cu dop insurubabil - 2 tuburilproba.

Metoda de separare
' Cu ajutoru! r-naterialelor si metodelor descrise mai sus recoltati '10 mt de sange venos sr
transferati-l intr-un tub cu dop insur"ubabil cu anticoagulant. Ca metoda alternativa, sangele
paate fl colectat direct intr-un tub adecvat de colectare si transpcrt
{ex. Vacuiainei".
tu4onovette, etc.).
' . Lasati proba de sange sa coaguleze la temporatura ambiarnta pentru 30 minute, apoi
plasati-l intr-o cutie racita pentru retractia cheagului Ia 4-8'"C pentru minimum 1 Z ore
(poate fi stocat la aceasta temperatura pentru 48-72 ore).
-
r . Probele trebuie centrifugate in laboraiorla turatie joasa (1000 g pentru 10 rninute), psntru
inlatunarea celulelor sanguine. Cand se procedeazala separarea serului intr-un laboraior
de teren trebuie adoptate precautii adecvate pentru asigurarea conditiilor de biosecuritate.
Asigurati-va ca centrifuga este in stare de buna functionare si tuburile bine inchise si
echilibrate, in sopul evitarii spargerii sau varsarii.
' Daca se suspecteaza puternic o febra virala hemoragica, prcbele nu se vcr procesa cie cal
in laboratoare speciaiizate, adecvat echipate, Discutati cu laboratorui ciaca in cazui dat este
acceptabila utilizarea unui tub de separare cu geloza-$ange
ivezi nota).
' , Separati serul aseptic de pe cheag, utilizand o pipeta Pasleur sterila si o pipeta de uriica
folosinta cu bula sau moale.Transferati serul in mod egal itr 2 tuburi cu dcp insui'ubabil,
Securizati dopurile. insurubandu-le strans.
' Daca nu este la indemana o centrifuga si daca aceasta determina o iniarziere in trarrsportul
prohrelor la un labcrator, serul poate fi separat cu grija de pe cheagul retractat, uiiiieanC o
pipeta de transfer dispozabila. Lasat 4-6 ore Cupa prelevarea sangelui pentru a asigura
retractia cheagului in conditii adecvate.Cu ajutorul pipetei de transfer colectati serr:i galben,
cu precautie pentru a pastra varful pipetei cat se poate de departe de cheag si evitand
agitarea tubului cu sange in timpul colectarii serului. (Poatra fi nrai usor daca se utilizeaza
un tub de separare cu gel) Transferati in tuburi de plastic cu dop insurubabii si securizat
dopurile insurubandu-ie strans.
' . Etichetati tuburile cu aceleasi detalii despre pacient care apar pe tubul cu proi:a de sange.
NOTA: ln unele cazuripoafe fi acceptabilsa se utilizeze untub specialde sange continand ui gel
de separare, care faciliteaza separarea seru/ui de pe cheag.!n acesf caz, etapa de centrifi)garc
est* eliminafa. Aceasta prezinfa un avantaj ctin puctu! de vedere al usurintei si siglrantei a
prelucrarii probelor in canditii de teren, dar este imporianta verificarea cu laboratarul inainte de
prelevare pentru asigurarea compatibititatii cu o anumita investigatie particulara.

Manipulare si transport

' . Daca este necesar serul pentru investlgatie, separare din sange trebuie facuta cat mai
curand posibil, de preferat in linrita a 24 de ore, la temperatura ambianta.
 Daca specimenul nu ajunga intr-un laborator pentru ia fi prelucrat in t4 de'oi*l *'*rur
buie, in masura posibilitatilo., sa fie separat din sange inainte de trapcrt,
tre
Seruri{e poi ii stocate ia 4-8'C tinrp de peste 10;:ile. Daca testarea esie anranala
peniru o perioada mai lunga de tipm, probele trebuie inghetate.
' Daca nu este posibile separarea sau nu este de dorit din motive de biosecuritat*, prola de
sange trebuie stocata la 4-8"c. Astfel de probe nesepararte trebuie
Aceste pr-obe neseparate trebuie protejate de vibratie excesiva in timpul transpc;-'iului. probeie dc
saage neseparate nu vor fi inghetate.

Probe de sange capilar

Materiale pentru recoltare

. . Lante te de unica folosinta stei"ile

. . Lame de sticla, lamele, cutie de Iame
. f-iartie de filrru
. Agenti de fixare, cum este metanolul

Metoda de recoltare
. . Dezjnfectati un deget sau degelui mare penti-u adulti. degetul mare penli'u cr:pli sail ijeriea
l^+^-^t^
rai?iaia a ^,
^ calcaiului pentru sugari prin stergerea cu alcool izopropilic si intepati cu * ian:eta
sterila. lndepartali prima picatura cie sange.
. Aruncaii lantaiele utilizate direct in conteinerul pentru insiirumente ascutite.
" Colectaii sangele direct pe lame de microscop marcate si,lsau harti* de fiiti'u.
Metada de preparare a biofilmelor
FiImele de sange trebuie facute de personal pregatit
Daca nu este posibil, ele pct fl intinse din probe de sange heparinizaie sau cr.: EDT/i t;'rmis* il
laboratn;-.
Fi!me g]foase pentru rnicroscopie
; [,,4arcati lama cil numarul de identificare a pacientuiui si numele.
* Dezinfectati si intepati locul de recoltare cu o lanteta, asa curn s-a descrls rnai sus
. Aiing*ti 1-2 picaturi mari de sange cucentrul lanrei, asigurandu*va ca lamele nu atir:g
nic!o:
* . !ntindeii sanEele in cerc cu diametrul de aproape 1 cm utitizand coltul unei alte lan:* cie
sticla.
' tiscati la aer flimui in pozitie orizontala. Nu uscaii prin lngalzire deasupra unei fia;ari sa,-r
unei alie su:"se de calciura.
. Filme suoflrl pentru n:icroscopie
r il.4arcati lania cu nilmarul de identificare al pacientului si numele.
. Aiitigeti alia picatura de sange de sticla, la aproape 2 cm de un capat, asi;,,randu-va ca
lama nu aiinge pielea"
* . Piasati iama orizontal pe o suprafata plana.
. Funeti latura unei a Coua lame curate dr:aupra cenirului unei a dcua lamg sierile ispreac*r-
ul) si mlscati-o inapoi pana atige picaiura si sangele se inlinde de-a lungui bazei lan:ei.
r i\,.{iscati spreader-ul ferm si constant de-a lungul lamei si uscati la aer filmul, repede. l.lu
uscati deasupra unei flacari sau alte surse de caldura.
* . Fixati filmul uscat cufundand lama de sticla in metanol sau alt fixator pentru cateva secund=
si uscati la aer.

Manlpulare si transport

' . Filnrele uscate la aer silsau uscate sunt transpartate la termperatura ambianta, de prelei'at
in limita a 24 de ore de la colectarea probei. Nu trebuie refrigerate.Fiimele groase si subiiri
sunt de obicei pastrate in cutii de lanre separate.
Anexa 3: Recoltarea lichidului cefalo-rahidian (LCR)

LCR trebuie recoltat de catre medlc sau o persoana cu experienta in efectuarea prccedurii, LCR
este uiilizat in diagnosticul meningiteior virale, bacteriene, parazitare si fungice.

Necesar de materiale pentru reeoltare

. Tava pentru purrctia lornbara, care include:

". fu,!ateriale siei-iie : manusi, vata, prosoape
Anestezic local, ac, seringa
. Dezinfectant cutanat : 10?i "povidone iodine" sau alcool l0%
. Deua ace de punctie lornbara,
. Sa*qe tuburi nrici sterile cu capac cu fiiet si stativ
. fulanometru de apa
, Lame de microscop

Metoda de recoltare

Deoai'ece numai persoanele experimentate trebuie sa recolteze lcr nretocla nu estc C*scrsa
Lcr este recoltat direct in tuburile amintite mai sus, Daca prob,ele nu vor fi transpcrtaie rrneClaI,
este ne cesara recoltarea in tuburi separate pentru diagnosiicul bacteriologic si virologic

Prelucrare si transport

in gene;'al. probeie trebuie aduse la laborator si prelucrate cat n:ai curand cu putinta.

' Probele de LCR pentru bacter.iologie se transporta la temperatura mediului ambiani, in

general fara medju de transporl. Acestea nu trebuie sa fie puse la frigider, deoerece rn*iii
dintre germenii patogeni nu supravietuiesc ra tennperaturi scazute.
Probele de LCR pentru diagnosticul virologic nu necesita mediu Ce transperi, A:+s:ea po: ;l
tianSpOt'tate la +4 -. + BcC in interval de 48 ore Sau la 70r C pentru perroar;e lnai ir;nrli
-
Anexa 4: f{ecoltarea probelor oculare

Tar::pcanele si {rctlr-irile din cornee si rIe c*rrji:ncliva sunt *rie n:ai frecv*nte $i{'oir*r"*{:i)lltti
per'tru a diagncstica {kerato)cnnjunctivrle}e,rirale sau bacter!sne . Etich*tati tr:ate prr:hel* si i::iiir:lti
Caca s,unt cnnjucti'ra1e sau cot"ileene si daca au fr;st pr"elevate de la chir.ri sierg sal ilre:' J't." i:::i
;:seplica stricta este esentiala alunci canci s* lucreaza cu acestc proh*. Tnate rncdicanr,:nlclr; si
n:aielalel* care au venit in contact cr-r pacientii trebule aru*cate.

ln linrp ce raciaiul corneean poate fl uneori folositor F€fltr"r.r diagnosiicai'ea Lrnor infectii at:
r:rchlului, acestea nu sunt intotdeauna infectii cu potential epidernic. Probele de cornee trebuie
colectate numai de un oftalmolog sau de o alta perscana pregatita in acest donreniu. t,:*
aile *a, instructiunule pentru co!cctarea cie racla(e dc cornec nLr vo!" fi claie n:ar jos.

l',{ateriale necesare pentru colectare

. Tarrioan* de calciu aiginat srlsau de vata, soiut!e sajlra liiziol,:gica sici,ia ii.;bul si*r'ti* L:.:
transport (Nu fclositi tampoane de calciu alginat pentru probele virologicei
. l*lanusi sierii*
. Lame cie stiela, rnarker pentru lame Ce sticia, cutie pentru lame
-lrebuie purtate n-ranusi si ochelari de prntectie daca exista riscl:l ur"lei ker;:t,:cnrjucti,;it'*
" onir^ir: n:iro
I'vv
uP'uv"

illetcCe Cc colectarc a prnhelor conjuncti,re

. Curatati zona cin jurui ochiulu! cu un antisepii*.
. lnmuiati un tampon i* solutie salina fiziologica sterila sii tarnponati conjunctivr in si:ns
circular
* lnt,r<;duceti lamponul intr-un trrb steril prevazut cu capac care se insurubeaza ;ti carc :.r
ccniina r,rediui de transpcrt adecvat peniru bacterie
" Ruprti pafiea de sus a bati:lui iara sa atingeti vai-fr:l tr-:bului si strar-igei capa:ul cu f,;r"n:i1,:':it:

r t-.^^+^ti
rar|-isrdrr ^^--^|;,
upl*fstiUr-r€a Cu,,'^un tub
l,,i- ^^--. rn aan+,n+
Car* sa ccntina me*iuirrarin^rrcr
*arl r,ir*l
adecvai vlral ,.,' t'=lq'-:,-1
rs r,c,iiL*.!
. Puneti etichete pe prelevate

i\.."!eiode de pi"eparae a frotiuriior penti'u exafflen nricroscoptc:

" Precarati doua froiii:ri pe doua lame curat€ cu un tarnpon **n.iunc:ival n+:f*lcs:t P* i-ai
pasii:il accst lucru trebui* fa,;ut la {ata locuiui. Aitfel, preievateie pct fr tri,tist 1a in::o:ilci
intr-un mediu adecvat de transport pentru prepararea frotir-rrilor". A'reti in v*rjere c;,1 t':i; t,s'r*
llU}, u il Jd J1f prepaf0 fr$iiurl de ne iamnea*e iranSpOrtaie il anirm!t*
nn*ir-ir sr r::ijrt, i::.t dc +f.1e::-rilil,
r,'r
c*le ccntinand cfirbune. Penti'u detectarea Chlarnydiei este e$enti*i l* ir'*lir;riifi -c.it
preparate la fata locului, inainte de a fi transportate.
. I'i'larcati lamete de siicla si asezatl-le intr-o cutie corespi:nzatoare. N; rcrr-tgr:r;.t1: s;
-1 r

inghetati lamele.

i!,lanipularea si transpotlui
. Froiiurile pentru cleteclarea hacteriilor patogen'3 sunt transportate ia * ter:pr:ra1-''':
anrbianta int:--un medig cl* transpcrt adec'/at pentru bacterii
r Frclevaicle pentru detcctarca afectiuniior ,rirale sunt transportate ia 4-B !rildo C intr-L"]n
1r"ieiliu de trensp*rt pentru vlrr'lsi. Tampoanale transportate intr-un nrediu pentru';i'1;5i
pi:l l
rnghetaie in iichid nitrogen
. l-amele de microscop sunt uscate si transportate la temperatura anrbianta intr-c cr-;iic
pentru lame.