Sunteți pe pagina 1din 26

CONJUGATE POLIMERE CU SUPORT POLIZAHARIDIC

Cmpanu Iulia Zam Daria Profesor coordonator: Carmen Nistor C.N.Nicu Gane Flticeni

Cuprins:
0.Scopul lucrrii 1.Studiu Bibliografic 2.Aspecte generale asupra sistemelor polimer-medicament 3.Metode de realizare a sistemelor polimer-medicament 4.Bioconjugate polimer-medicament 5.Conjugate polimer-medicament cu aciune antitumoral 6.Conjugate polimer-medicament pentru tratamentul osteoporozei i artritei reumatoide 7.Conjugate polimer-medicament cu aciune hepatoprotectoare 8.Rezultate proprii 9.Imobilizarea principiilor active pe suporturile polizaharidice 10.Determinarea dozei letale a conjugatelor amidon-N(m-nitrobenzoil) asparagin 11.Concluzii 12.Bibliografie

0.Scopul lucrrii Prezenta lucrare i propune sinteza unor noi compui cu structur heterociclic, biologic activi, derivai de la aminoacizi i imobilizarea acestora pe suporturi polizaharidice, prin legare chimic covalent, precum i caracterizarea acestor conjugate. 1.Studiu bibliografic Cercetrile din ultimele trei decade in domeniul farmaceutic au dus la realizarea de noi sisteme de eliberare contrlot a substanelor biologic active, bazate, mai ales pe aciunea lor intit. Imobilizarea principiilor biologic active pe suporturi polimerice constituie un domeniu relativ nou, obinndu-se rezultate ncurajatoare n elaborarea de noi tehnologii de sintez a medicamentelor retard n domeniul chimioterapiei. Medicamentele derivate prin biotehnologie sunt intens utilizate n practica clinic i reprezint n zilele noastre pe plan mondial un important capitol al bugetului alocat cercetrii i dezvoltrii companiilor biofarmaceutice. Astzi, datorit dezvoltrii biotehnologiilor farmaceutice, proteinele i peptidele devin ageni terapeutici specifici cu eficien crescut, utilizai n diverse terapii sau ca inhibitori sau regulatori ai sistemului imun pentru tratamentul bolilor autoimune multifactoriale. Inovaiile n design-ul i producerea medicamentelor realizate prin biotehnologie i tehnici de recombinare a ADN-ului au fost concurate doar de importantele descoperiri i mbuntiri n domeniul eliberrii controlate, necesare extinderii timpului

de njumtire a acestor produi fragili i evitrii eliminrii rapide din organism, observate la administrarea sistemic. Ultimele decenii s-au remarcat prin rezultate numeroase, uneori chiar spectaculoase n domeniul sistemelor polimer-principiu biologic activ, multe din acestea depind graniele studiului teoretic, fiind implementate n practic. Studiile realizate de diferite grupuri de cercettori au adus contribuii majore la nelegerea acestei clase speciale de materiale ce fac parte din grupul biomaterialelor, mai ales prin dezvoltarea de noi metode de obinere a suporturilor polimere folosite n prezent, dar i a tehnicilor de asociere cu ele a compuilor cu activitate biologic. Pentru proiectarea i obinerea de astfel de sisteme, polizaharidele i derivaii lor sunt de un real interes, n pricipal datorit faptului c cele mai multe dintre ele sunt biodegradabile i biocompatibile, iar, n marea majoritate a cazurilor, utilizarea acestora nu implic i prezena solvenilor organici. Se prevede, ca urmare, crearea de noi materiale pe baz de astfel de compui macromoleculari, capabile s restabileasc funcionalitatea structurilor biologice ntr-o manier ct mai apropiat de cea normal i prin metode ct mai uor controlabile. Substanele cu structur heterociclic, avnd aciune biologic, sunt considerate medicamente ale viitorului. ntre acestea, derivaii de la aminoacizi ocup un loc important n dezvoltarea de noi compui cu aciune antibacterian, antiinflamatoare sau ageni antitumorali. n prezent, sistemele polimer-medicament sunt intens studiate i utilizate n eliberarea i transportul proteinelor, peptidelor, substanelor anticancerigene, polimerul fiind utilizat ca protector al agentului bioactiv, n timpul transportului acestuia prin organism, pn la locul eliberrii.

2.Aspecte generale asupra sistemelor polimer-medicament Domeniul eliberrii controlate de medicamente se extinde din ce n ce mai mult, iar potenialul acestuia a fost deja demonstrat de numeroasele produse aprute pe pia. Din metodele de obinere a sistemelor de eliberare controlat, conjugarea polimerilor reprezint o tehnic intens exploatat i util pentru mbuntirea proprietilor terapeutice ale peptidelor, proteinelor i moleculelor mici sau oligonucleotidelor. n general, prin conjugare, principiile active prezint un timp de injumtire prelungit, o mai mare stabilitate i solubilitate n ap, proprieti imunogene i antigene sczute, i uneori, chiar i proprietatea de acionare intit pe anumite esuturi sau celule. Mai mult, noi polimeri alturi de cei deja consacrai sunt investigai i propui pentru obinerea acestor tipuri de sisteme. Cercetrile din domeniul sistemelor de eliberare controlat s-au concentrat mult i pe prepararea unor variante genetice mai favorabile sau asupra unor formulri medicamentoase realizate special pentru aplicaia dorit, precum lipozomii, modificrile covalente ale medicamentelor cu reactivi mici moleculari sau conjugarea medicamentelor cu polimeri. Ultima metod este o tehnic care prinde din ce n ce mai mult teren, i deja a dus la producerea unor molecule disponibile pe pia. n general, conjugarea cu polimeri hidrofili modific puternic comportamentul compusului imobilizat att in vitro, ct i in vivo. Aceste modificri pot fi observate att la proteine, ct i la agenii activi mici moleculari. Unele din avantajele majore, n acest caz, sunt: Hidrosolubilitate mrit; Creterea biodisponibilitii i duratei de njumtire plasmatic, datorit volumului hidrodinamic care reduce excreia renal;
5

Protecia agenilor bioactivi mpotriva degradrii enzimatice; Prevenirea sau reducerea proceselor de agregare, imunogene sau antigene, acumularea specific n organe, esuturi sau celule, prin polimerii cu activitate intit sau prin exploatarea bine cunoscutului efect de permeabilitate i retenie crescut; Sistemele de eliberare controlat utilizeaz ca suport cel mai adesea polimeri, ceea ce a permis realizarea unor performane greu sau chiar imposibil de obinut altfel. Pentru a fi asociat cu medicamentele n diferite tipuri de formulri, un polimer trebuie s prezinte urmtoarele caracteristici: S fie biocompatibil i biodegradabil;

Produii degradare ai polimerului trebuie s fie netoxici i s nu creeze rspuns inflamatoriu din partea organismului;

Degradarea polimerului trebuie s se produc ntr-o perioad rezonabil de timp; Polizaharidele ndeplinesc condiiile necesare pentru imobilizarea unui principiu biologic activ: sunt lipsite de toxicitate, sunt inerte farmacologic, nu conin impuriti sau aditivi i compui reziduali ai proceselor de reticulare sau polimerizare. n plus, pot fi cu succes utilizate ca suporturi pentru imobilizare deoarece reacioneaz cu substanele biologic active formnd compui stabili. Atunci cnd moleculele principiului biologic activ nu conin grupe complementare cu cele ale polimerului, acesta din urm poate fi funcionalizat.

Exemple de polimeri utilizai pentru realizarea sistemelor polimermedicament de tipul conjugatelor Poli(etilen glicol) Poli(etilen-imin) Polimeri sintetici Poli(vinil-pirolidon) Poli(alcool vinilic) Dextran Dextrin Polimeri naturali Chitosan Acid hialuronic Poli(L-lizin) Poli(acid maleic) Polimeri pseudosintetici Poli(aspartamid) Poli((N-hidroxietil)-L-glutamin)

Datorit proprietilor

pe

care

le posed

unele hidrogeluri

polizaharidice, acestea au fost introduse n domeniul materialelor inteligente cu pocibile aplicaii n realizarea de esuturi artificiale, sisteme de eliberare controlat a principiilor biologic active. Principiile biologic active sunt fixate de ctre macromolecule fie prin procese analoage adsorbiei i absorbiei, fie prin procese chimice care duc la formarea de compleci. n cazul polizaharidelor, grupele hidroxil i carboxil particip la legarea principiului activ.

Tipurile de biomolecule, adeseori biologic active, care pot fi imobilizate pe polimeri sunt: Proteine i peptide Zaharide Lipide Medicamente Liganzi Acizi nucleici, nucleotide Microorganisme Alte tipuri n 1975, Helmut Ringsdorf a publicat un articol n care sugera utilizarea unei catene de polimer sintetic ca transportor pentru moleculele de medicament. n 1977, Abuchowski i colaboratorii si au publicat primul articol referitor la conjugarea poli(etilen glicolului) cu medicamente proteice. Se cunoate proprietatea PEG-ului de aprare mpotriva recunoaterii de ctre sistemul imun al organismului, detrminnd astfel o perioad mai ndelungat de remanen n circulaia sangvin i o eficien crescut a medicamentului. Conjugatele polimer-proteine au fost intens studiate n ultimii 25-30 de ani. Primele publicaii asupra conjugatelor pe baz de proteine i polimeri sensibili la stimuli au aprut pe la sfaritul anilor 70 i nceputul anilor 80, cnd proteinele erau conjugate cu polimeri carboxilai care seprau n faze distincte, fie la pH scazut, fie prin adugarea de ioni de calciu. La nceputul anilor 80, Hoffman i colaboratorii si au conjugat polimeri sensibili la

temperatur. Autorii au sintetizat conjugate pe baz de anticorpi monoclonali i policlonali pentru dezvoltarea unor procese imune prin separare de faz indus termic. De atunci, numeroi cercettori au conjugat polimeri inteligeni cu proteine pentru diverse aplicaiio n separarea pe baz de afiniti chimice, bioprocese enzimatice, eliberare controlat de medicamente, diagnostic i biosenzori, inginerie tisular i culturi tisulare, precum i inginerie genetic. 3.Metode de realizare a sistemelor polimer-medicament Pentru realizarea sistemelor aa-numite polimer-medicament,

substana biologic activ este imobilizat pe un suport polimeri. Imobilizarea este o localizare temporar sau permanent a biomoleculelor pe un suport. Imobilizrile pot fi fizice (permanente) sau chimice. Se poate discuta despre trei metode de imobilizare:

Adsorbie fizic se poate realiza prin fore Van der Waals, atrcie electrostatic, afinitate, adsorbie i reticulare;

Includere fizic presupune existena unor sisteme barier, hidrogeluri, sisteme dispersate; Legare chimic; n cazul legrii chimice, suportul trebuie s conin grupe reactiv (COOH, NH2, -OH, etc.); dac suportul nu are grupri de suprafa reactive, el trebuie mai nti modificat (n acest scop se pot utiliza o serie de metode de funcionalizare-grefare prin iradiere, descrcri n gaz n plasm, modificri chimice, etc.). n scopul imobilizrii medicamentului prin legare chimic la suport se pot utiliza att derivai polizaharidici ct
9

i polimeri sintetici. Tipurile de sisteme care se obin prin legare chimic se pot grupa n:

Conjugate polimere solubile;

Suprafee solide; Hidrogeluri;

Legare chimic, ionic sau covalent, implic, n mod obinuit, utilizarea polimerilor liniari: fie polielectrolii, fie cu grupri funcionale complementare celor ale compusului biologic activ. Se impune ca reactivitatea acestor grupe funcionale s fie ridicat n condiii blnde de lucru (temperatur, pH) sau utilizarea unor activatori precum carbodiimidele, capabile de a realiza condensarea partenerilor de reacie chiar la temperaturi suficient de reduse (maxim 10 grade), evitnd astfel degradarea sau descompunerea compusului biologic activ. Legarea covalent const n cuplarea medicamentului la suport prin legturi de tip esteric, carbonat, hidrazonic, etc. Legarea ionic const n introducerea unui medicament sub form de clorhidrat (ndeosebi antibiotice) n soluia de polimer sub form de sare, sub agitare; prin schimbul ionic, medicamentul cupleaz pe suport, provocnd precipitarea unui produs. ntre grupele funcionale implicate n mobilizarea compusului biologic activ trebuie luate n considerare grupele aminice i carboxilice, tiolice, imidazolice i hidroxilice. Evident, polimerul suport trebuie s posede grupe funcionale complementare, capabile s reacioneze cu cele ale

10

principiului activ (legarea covalent) sau s se asigure interacii fizice (adsorbia sau includerea). Prin interacuni chimice dintre principiul activ i forma de transport (polimeri) rezult proprieti fizico-chimice diferite ale ansamblului fa de componentele din care provin, cu implicaii majore asupra coeficientului de difuzie sau a constantelor de dizolvare. Viteza de eliberare a medicamentului dintr-un astfel de sistem va fi limitat de constanta de disociere a legturii suport-medicament sau de constanta vitezei reaciei de fibrinoliz. Calea aleas pentru obinerea de sisteme de eliberare controlat polimermedicament depinde de proprietile fizico-chimice ale substanei biologicactive, de doza efectiv a acesteia i de durata de eliberare dorit a se realiza. n calea formrii legturii medicament-suport poate aparea un obstacol steric, ca n cazul derivailor poli (acidului metacrilic), i atunci se folosete un spaiator (spacer) care se introduce ntre lanul principal polimeric i medicament, ntr-o etap intermediar. Distanatorul este un grup de atomi, sub form de lan scurt, ce realizeaz o distan oarecare ntre medicament i lanul polimeric principal. Spaiatorii pot fi biodegradabili i pot elibera biomolecule pe msur ce are loc procesul de degradare. Prin metode chimice se obin i medicamente polimerizabile, care sunt compui macromoleculari ce conin principiul activ ca parte component a lanului de baz. Ele se sintetizeaz prin polimerizarea medicamentelor obinuite crora li s-a ataat o grupare vinilic. Ataarea medicamentului la gruparea vinilic se poate realiza prin intermediul legturilor de tipul ester: -CO-O; amid: -CO-NH; uretan: -O-CO-N=; acid o-acilhidroxamic: -CO-NH-O-CO-; hidrazon: -CO-NH-N=C=; tioeter: -CH2-S-CH2-. Pentru a exemplifica, putem enumera cteva medicamente polimerizabile: polimeri
11

pe baz de derivat acid 5-vinilsalicilic, 2,4-dihidroxi-4vinilbenzoxifenona, metal 5-vinilsalicilat; derivai de streptomicin suflat; derivai de N-(4-aminobenzen-sulfonil)-N-butil uree; polimeri pe baz de 10(alcheniloxi) fenoxarsin; derivai de colecalciferol, etc. Una din metodele chimice de realizare a sistemelor de eliberare i de aceea precizat i folosit n aceast lucrare se bazeaz pe realizarea legturilor covalente, n special a celor de tip esteric i amidic. Legturile covalente sunt recomandate, n general, n cazul n care administrarea de medicament se face pe cale oral. n principiu, drept ci de cuplare pot fi: Crearea de grupe reactive pe lanul macromolecular; Condensarea gruprilor carboxilice, hidroxilice sau aminice ale suportului macromolecular cu grupri complementare ale principiului biologic activ n prezena carbodiimidelor ca activator. Majoritatea legturilor medicament-polimer sunt de tip ester, amidic, carbonat i hidrazonic. Ele sunt deci potenial hidrolizabile n sisteme apoase, ceea ce nu nseamn nsa, ntotdeauna, c sunt de fapt hidrolizate ntr-o proporie util dup administrare, astfel ca s poat n final prsi organismele vii. n prezent, n literatur sunt numeroase exemple de medicamente imobilizate pe suporturi polimere prin legturi esterice stabilite ntre grupe hidroxil ale lanurilor polizaharidice i grupe carboxil ale medicamentului sau ntre cele de tip hidroxil ale medicamentului i cele carboxil ale
12

suportului funcionalizat, procesul de imobilizare fiind activat de prezena diciclohexilcarbodiimidei (DCCI); mecanismul de reacie, n general, se desfoar dup urmtoarea schem:

13

Mai jos sunt prezentate cteva exemple de polizaharide i derivai ai acestora folosii n imobilizarea medicamentelor: Medicamente conjugate cu polizaharide studiate n literatur Suportul polizaharidic Substana activ Alginat Doxorubicin Amidon Acid acetilsalicilic, Acid salicilic, Lamfetamin, Efedrin, Tiramin Celuloz triacetat Teofilin Carboximetil celuloz Eritromicin, Novocain, Procain, Sulfatiazol Cloro carbonimetil celuloz Cefalosporin, Metronizadol, Novocain, Sulfatiazol Etilceluloz Amoxicilin, Ampicilin, Antipirin, Ibuprofen, Teofilin, Naproxen Hidroxietilceluloz Ibuprofen Hidroxi-propil-metilEntodolac, Ibuprofen, Naproxen, Melatonin celuloz Metil-celuloz Metronidazol Chitosan 5-fluoracil N-succinil chitosan Mitomicina C Dextran Adriamicin, Alprenol, Doxorubicin, Insulin, Procainamid Guma de guar Indometacin Xantan Acid 6-aminopenilcilanic, Ampicilin, Teofilin, Canamicin, Gentamicin A, Neomicin, Novocain, Penicilin, Streptomicin

14

4.Bioconjugate polimer-medicament Numeroase metode de conjugare a medicamentelor cu polimeri au fost ncercate nc din anii 50. n 1955, Jatzkewitz a obinut conjugatul peptamin-poli(vinil pirolidona) care a mbuntit eficacitatea medicamentului cuplat, dar aplicaiile biologce ale promedicamentelor polimerice nu au fost luate n consideraie prea mult. n 1975, Ringsdorf a propus un model raional pentru polimerii bioactivi, fiind considerat pionierul cercetrii promedicamentelor polimerice. Un reviriment este nregistrat n ultimii ani n ceea ce privete obinerea de conjugate polimer-medicament, ndeosebi pentru eliberarea intit a antitumoralelor. Este bine tiut ca medicamentele antitumorale actuale, dei tot mai sofisticate ca structur, manifest agresivitate nu numai fa de celulele tumorale, ci i fa de cele normale. Cuplarea acestora pe suporturi macromoleculare le confer o mai mare selectivitate, scderea toxicitii i biodisponibilitate ridicat. n revistele de specialitate sunt raportate numeroase rezultate referitoare la legarea medicamentelor pe suporturi polimerice, rezultatele ce fac chiar obiectul unor lucrri de sintez sau monografii. Multe asemenea sisteme polimer-medicament au depit stadiul experimentelor la nivel de laborator, pentru obinere, precum i al testelor clinice, fiind n prezent produse la nivel industrial i comercializate. Cele mai multe se utilizeaz cu precdere n afeciuni dermice, oftalmologice sau stomatologice, dar ar putea fi utilizare, de asemenea, cu succes n componena unor produse cosmetice sau a unor produse alimentare.

15

5.Conjugate polimer-medicament cu aciune antitumoral Diferenele dintre structura i funcionarea esutului sntos i ale celui tumoral, ajut la proiectarea sistemelor de eliberare cu aciune specific antitumoral. n general, pentru tratarea tumorilor, sistemele de eliberare au 3 locuri int principale pentru eliberarea principiului activ: Vascularizaia tumorii Spaiul extracelular dintre esuturile tumorale Celulele tumorale Eliberarea principiilor active n vascularizaia tumorii, acioneaza asupra sngelui care hrnete tumoarea. n spaiul extracelular, dup cumularea conjugatului, se elibereaz medicamentul sub aciunea unor enyime specifice. Sistemele de eliberare care conin anticorpi, acioneaz direct asupra celulelor tumorale, afectnd receptorii specifici de la suprafaa celulelor. Ultimul deceniu a nregistrat noi aplicaii clinice de succes ale conjugatelor polimer-medicament (de exemplu Oncaspar, Neulasta) i rezultate promitoare n ncercrile clinice ale conjugatelor cu aplicaie n tratamentul antitumoral. Astfel, alturi de realizrile din domeniul nanomedicinei, joac un rol important n tratamentul i diagnosticul cancerului. La ora actual, mai mult de 10 conjugate cu aplicaie antitumoral au intrat pe piaa clinic.

16

6.Conjugate polimer-medicament pentru tratamentul osteoporozei i artritei reumatoide Majoritatea conjugatelor folosite n tratamentul osteoporozei i al artritei reumatoide conin catepsina K inhibitor. S-a demonstrat ca, catepsina K este implicat n activitatea resorbtiv a osteoclastelor, de aceea s-a considerat c, aceasta are un rol important constnd n aciunea antiresorbtiv farmacologic, ceea ce o recomand n tratamentul osteoporozei. Catepsina K inhibitor a fost conjugat, ndeosebi, cu polimerii solubili n ap (PEG, HPMA). Conjugatele elibereaz catepsina K inhibitor n esuturile bolnave i inhib producerea catepsinei K , fr a afecta activitatea enzimelor din organele sntoase. 7.Conjugate polimer-medicament cu aciune hepatoprotectoare Conjugatul poli-L-lizina lactozaminat-adenin-arabinosida monofosfat (agent antiviral) se injecteaz intramuscular i are aciune asupra virusului hepatitei B. Conjugatul poli(etilen glicol) - camptotecin acioneaz asupra cancerului de colon, avnd i aciune hepatoprotectoare. 8.Rezultate proprii Compuii heterociclici prezint din ce n ce mai mare importa n ultimii ani datorit proprietilor lor farmocologice. Compuii heterociclici pe baz de azot, sulf sau oxigen, ocup un loc important n chimia aplicat n medicin.

17

Polimerii n general, i derivaii polizaharidici, n special, sunt des folosii ca suporturi pentru obinerea de sisteme polimer-medicament, pentru a mbunti indicii chimioterapici ai principiului biologic activ. Din acest motiv, studiul nostru s-a orientat pe mobilizarea covalent a unor principii biologic active cu structur heterociclic pe suporturi de amidon, gelan si 2-hidroxietil celuloz. Suporturile polimerice naturale alese ndeplinesc condiiile de biocompatibilitate i bun tolera de catre organism, fiind, n mod curent, utilizate n formulri medicamentoase, n industriile farmaceutic, cosmetic sau alimentar. Compuii biologic activi sintetizai au fost ulterior imobilizai, prin legturi de tip ester, pe suporturile naturale amintite. Reacia de imobilizare a tuturor acestor compui decurge n mediu eterogen, fiind activat de diciclohexilcarbodiimid (DCCI). Reacia dintre gruparea carboxilic a compuilor menionai i gruparea hidroxilic a polizaharidei, n prezena DCCI conduce la formarea unui ester i a diciclohexilureei. Iniial are loc adiia grupei carboxilice la carbodiimid, urmat de atacul nucleofil al oxigenului hidroxilic asupra intermediarului format. Reacia de esterificare are loc n mediu de dimetil sulfoxid la temperatura de 16-18 grade Celsius. Pentru fiecare sistem n parte a fost analizat influena unor parametri asupra eficacitaii procesului de imobilizare, stabilindu-se condiiile cele mai favorabile pentru legarea unor cantiti mari de principiu biologic activ la suport. De asemenea, pentru fiecare conjugat sinestezat este analizata

18

eliberarea n mediu bazic a principiilor biologiv activi imbolizai i toxicitatea produilor de imobilizare. Pentru produii obinui a fost realizat analiza elementar, care a constat n determinarea procentului de azot din produii de cuplare, servind astfel la calcularea procentului de medicament fixat pe suportul polizaharidice. Materiale Materialele utilizate la efectuarea prii experimentale a prezentului studiu vor fi enumerate i comentate n cele ce urmeaz: Principii biologic active N(m-nitrobenzoil) asparagina Derivatul de aminoacid, N(m-nitrobenzoil) asparagin (DA), a fost sintetizat n laborator, prin condensarea clorurii acidului m-nitrobenzoic cu acidul asparagic n soluie de bicarbonat de sodiu. Este cunoscut faptul c acidul L-asparagic i derivaii si acilai cu restul benzoil, m- sau psubstituit, participnd la metabolismul organismelor animale, micoreaz toxicitatea unor produse medicamentoase i, n acelai timp asigur o bioactivitate apreciabil la nivel celular.

19

9.Imobilizarea principiilor active pe suporturile polizaharidice Imobilizarea principiului activ pe polizaharide se bazeaz pe reacia de esterificare a grupelor carboxil ale principiului activ cu gruprile hidroxil ale suportului polizaharidic. Reacia este activat de diciclohexilcarbodiimid, prezena activatorului fiind necesar datorit slabei reactiviti a grupelor COOH i OH la temperatura mediului ambiant. Imobilizarea N(m-nitrobenzoil) asparaginei pe amidon i 2-hidroxietil celuloz Conform unui program experimental, diferite cantiti de principiu activ se dizolv n 20 mL DMSO sub agitare, peste care se adaug 0,5 g polizaharid (cantitate constant) i se las sub agitare pn la umflarea maxim a polizaharidului n solvent (aprox. 2 ore). Se adaug apoi o soluie de DCCI (cantitatea stabilit tot de programul experimental) n 15 mL DMSO. Agitarea se menine pe tot parcursul timpului de reacie, la temperaturi de circa 18C. Odat terminat reacia de cuplare, se precipit amestecul de reacie cu 30 mL aceton i se agit energic timp de 5 minute. Suspensia este apoi centrifugat i se ndeprteaz supernatantul. Masa de reacie este splat apoi de 3-4 ori cu cte 10 mL aceton, pentru ndeprtarea activatorului i a principiului activ nereacionat, ct i a diciclohexilureei obinute n urma reaciei de esterificare i a tuturor produilor toxici, dup care produsul de cuplare este uscat la etuva de vid timp de 24 ore la 40C.

20

Influena raportului molar DA-amidon asupra cantitii de principiu activ imobilizat pe suport pentru conjugatele obinute cu raportul molar DCCI/DA=1,2 i dup 24 ore de reacie
65 60

molar

DA cuplata %

Influena

55 50 45 40 35 0 1 2 3 4 5 6 7 DA/Amidon (mol/mol)

raportului

activator/medicament asupra cantitii de principiu activ imobilizat pe suport pentru conjugatele obinute cu raportul molar DA/Amidon=2/1 i dup 24 ore de reacie
25

DA cuplata %

20

15 0,8 1,1 1,4 DCCI/DA (mol/mol) 1,7 2

21

Influena timpului de reacie asupra cantitii de principiu activ imobilizat pe suportul polizaharidic pentru conjugatele obinute cu rapoartele molare DA/Amidon=2/1 i DCCI/DA=1,2

55 50 45 DA cuplata % 40 35 30 25 20 15 6 12 18 24 30 36 Timp(ore)

Se constat creterea coninutului de principiu activ cuplat pn peste 60%, odat cu creterea raportului molar DA/Amidon, n condiiile pstrrii constante a cantitii de bactivator. Pentru acest sistem s-au obinut valori ridicate de principiu activ cuplat la amidon, chiar i n condiiile unui raport minim derivat asparagin/suport. Cu ct cantitatea de derivat de asparagin n masa de reacie crete, crete i cantitatea de principiu cuplat la suport. Diciclohexilcarbodiimida activeay grupele COOH, astfel c eficacitatea imobilizrii principiului activ pe amidon depinde direct proporional de cantitatea de activator. Considernd acestea, creterea

22

eficienei reaciei de sterificare odata cu creterea cantitii de activator, aa cum a fost observat n cazul acestui sistem conjugat, este un efect normal. Durata de reacie joac un rol important n sinteza acestui conjugat, constatndu-se o cretere a eficienei de cuplare odat cu creterea duratei de esterificare, n condiiile pstrrii constante a rapoartelor molare DA/Amidon i DCCI/DA. Se poate observa c o cantitate maxim de principiu activ cuplat se obine dup 24 ore de esterificare. Cantitatea de principiu activ eliberat n mediu bazic din produsul de imobilizare DA/Amidon

120 100 DA eliberata (mg/g) 80 60 40 20 0 0 3 6 9 12 Timp (ore) 15 18 21 24

Graficul evideniaz prezena a dou etape distincte ale procesului de eliberare a principiului activ. Se constat c n prima dintre ele, viteza procesului este ridicat, ceea ce sugereaz producerea hidrolizei gruprilor esterice situate pe suprafaa moleculelor de conjugat, sau n straturile sale superficiale. Difuzia agentului de hidroliz n interiorul gelului format
23

(conjugatul se umfl puternic n mediu alcalin) este mai lent, astfel nct se poate estima c abia la o durat de peste 6 ore ncepe hidroliza grupelor esteirce din intimitatea structurii conjugatului. 10.Determinarea dozei letale a conjugatelor amidon-N(m-nitrobenzoil) asparagin Sistemele conjugate obtinute prin cuplarea derivatului de asparagina pe amidon au fost etstate din punct de vedere al gradului de toxicitate al acestora prin determinarea dozei letale. Conjugatul cu 60% derivat de asparagin cuplat pe amidon are o valoare a dozei letale de 6175 mg/kg corp, ceea ce indic o toxicitate extrem de sczut, aproape nul, deerminnd recomandarea utilizrii acestor tipuri de conjugate ca sisteme de eliberare controlat a medicamentelor. 11.Concluzii Produii biologic activi noi sintetizai au fost imobilizai pe suporturi macromoleculare. Sistemele polimer-medicament prezint numeroase avantaje n comparaie cu cu medicamentele administrate n stare liber, asigurnd o aciune mai ndelungat a medicamentului nglobat ntr-un proces de eliberare susinut, controlat i, n anumite cazuri, intit. S-a constatat c indicii chimioterapeutici ai principiilor biologic activi pot fi mbuntii prin imobilizarea acestora pe suporturi polimerice, mai ales de natur polizaharidic. S-a analizat influena parametrilor de reacie asupra eficienei de imobilizare a principiilor activi pe polizaharide. n general s-a constatat
24

creterea eficienei de cuplare a medicamentului odat cu creterea raportului molar medicament/suport polimeric. Eliberarea principiului activ din produii de imobilizare se realizeaz prin ruperea legturilor esterice n condiiile hidrolizei bazice, caracteristic anumitor segmente ale tractului digestiv. Imobilzarea produsilor bioloc activi pe amidon si HEC s-a realizat cu eficien suficient de ridicat. Astfel, derivatul de asparagin a fost cuplat pe amidon cu randament mare, de peste 60%. Reacia de esterificare a acestui principiu a fost influenat de toi cei trei parametri variabili ai reaciei(rapoarte molare si timp de reacie). Eliberarea derivatului de asparagin din conjugatele pe baz de amidon are loc rapid n primele 5 ore, cnd se elibereaz aproximativ 50% din cantitatea total eliberat, urmat de atingerea unui palier dupa 18 ore. Profilul de eliberare urmeaz o cinetic de ordin 0, caracteristic sistemlor cu eliberare controlat. Conjugatele HEC-N(m-nitrobenzoil) asparagin elibereaz principiul activ rapid n prima jumtate de or, cnd n mediul bazic se regsesc cel putin 30% din cantitatea total eliberat, urmat de o eliberare lent. S-a determinat doza letal pentru produsul obinut i s-a obinut valori mari, indicnd o toxicitate redus. Putem astfel ncheia spunnd c noile conjugate polimer-medicament reprezint un pas deosebit de important n domeniul industriei farmaceutice.

25

12.Bibliografie G.Pasut, F.M. Veronese, Prog. Polym. Sci. 32:933-961, 2007; S.Dumitriu, M.Popa, M.Dumitriu, Polimeri compatibili bioactiv 5:301-314, 2003; V.unel, C.Ciungureanu, M.Ungureanu, Revista medico-chirurgical, Iai, 2001; S.Dumitriu, P. Cremonesi, Adv Chemotherapz, 243, 2002; M. Popa, V. unel, Salonul Internaional al Inveniilor, ediia a XII-a, Iai, 2006; M. Popa, L. Balaita-Rusu, Molecules 8, 297:309, 2003; Z. Kato, Z. Machida, Biomateriale, 907 :915, 2004 ; A. Popa, C. soldea, Tehnologia chimiei celulare, 34 :216, 2006 ;

26