Organizarea intern a nucleului n interfaz

Cromatina
Cromatina reprezint complexul format de ADN-ul nuclear cu histone i proteine cromozomale nehistonice. Denumirea provine de la cuvntul chroma din limba greac, nsemnnd culoare. Examinarea nucleilor n interfaz prin tehnici de microscopie, relev aspectul neomogen al cromatinei, fiind evideniate dou tipuri distincte: eucromatina (cromatina adevrat, de la eu n limba greac) i heterocromatina (cromatina diferit, de la heteros n limba greac). Heterocromatina este o form de cromatin nalt condensat i inactiv din punct de vedere transcripional (netranscriptibil), avnd o pondere de circa 10% din genom, n timp ce eucromatina este o form de cromatin mai puin condensat i activ din punct de vedere transcripional (conine secvene de ADN ce sunt transcrise).

Eucromatina
corespunde zonelor clare

1928 Emil Heitz

Heterocromatina
corespunde zonelor ntunecate

 Heterocromatina poate fi clasificat la rndul ei n dou tipuri: heterocromatin constitutiv, form n care cromatina rmne permanent condensat i care conine secvene de ADN ce nu sunt transcrise, i heterocromatin facultativ, form de cromatin condensat care nu este transcris, cu meniunea c fie s-a fcut transcrierea ntr-o perioad anterioar, fie se va face ulterior dac heterocromatina se va transforma n eucromatin sub aciunea unor factori specifici. Heterocromatina constitutiv apare n nucleul interfazic sub forma unor aglomerate localizate la periferia nucleului i n jurul nucleolilor.

Heterocromatina facultativ apare numai n anumite tipuri de celule.

Heterocromatina facultativ a fost descris n cazul inactivrii unuia dintre cei doi cromozomi X n nucleii celulelor somatice de mamifere, la organismele femele, n cursul dezvoltrii embrionare timpurii.

Heterocromatina facultativ
Inactivarea cromozomilor X. n faze embrionare timpurii unul din cei 2 cromozomi X (la organismele femele) devine inactiv prin condensare (corpuscul Barr). n celulele descendente rmne condensat acelai cromozom X.

Organizarea structural a cromatinei i nivelurile de compactare

Macromoleculele de ADN se asambleaz cu histonele i proteinele cromozomale nehistonice ntr-o manier nalt ordonat ce permite un grad mare de compactare a ADN-ului. Astfel, raportul de condensare specific interfazei este de 500 de ori, iar n condiiile de maxim condensare din cursul metafazei raportul de condensare este de 10.000 de ori. Histonele sunt un grup de proteine de mici dimensiuni, cu caracter bazic datorat prezenei n structura lor a unui numr mare a resturi de Lys i Arg. Aceast proprietate favorizeaz asocierea lor de ADN prin atracie electrostatic, de gruprile fosfat din coloanele glucido-fosforice ale catenelor polinucleotidice. Aadar, interaciunea histonelor cu ADN-ul nu este influenat de secvena de nucleotide a ADN. n celulele eucariote au fost identificate cinci tipuri principale de histone: H1, H2A, H2B, H3 i H4.

Structura nucleosomal (fibra de cromatin de 11 nm)

Structura nucleosomal reprezint primul nivel de compactare a cromatinei. Organizarea sub form de nucleosomi este rezultatul asocierii ADN cu anumite tipuri de histone. n imaginile de microscopie electronic nucleosomii apar sub forma unor particule discoidale de 11 nm, ce dau cromatinei aspectul unui irag de mrgele.

Nucleosomul
Nucleosomul conine un miez de histone format din 8 molecule de histone (octamer de histone) de forma unui cilindru turtit cu diametrul de 11 nm i nlimea de 5,5 nm, nconjurat de 1,65 ori de ADN-ul dublu catenar (rsucirii de 1,65 ori n jurul miezului de histone i corespunde o secven polinucleotidic de 147 perechi de nucleotide). Miezul de proteine al nucleosomului are cte dou copii ale histonelor H2A, H2B, H3 i H4, numite histone nucleosomale. Nucleosomul nu conine proteine nehistonice. Particulele nucleosomale succesive sunt separate prin secvene de ADN spaiator scurt ce poart numele de ADN de legtur sau ADN linker, a cror lungime poate s varieze ntre 18 i 80 de perechi de nucleotide (valoarea medie fiind de circa 50 perechi de nucleotide).

Structura nucleosomului

Structura nucleosomului

Vedere lateral

Vedere de sus

Structura solenoid (fibra de cromatin de 30 nm)

Acest mod de mpachetare se realizeaz prin rsucirea a ase nucleosomi ntr-o structur spiralat numit solenoid. Aceast mpachetare strns este posibil att datorit implicrii histonei H1 (histon linker), ct i interaciunilor dintre nucleosomii adiaceni, stabilite ntre cozile histonelor (n special aparinnd histonei H4), ce se extind ca nite prelungiri din particula nucleosomal.

Nivelurile superioare de compactare ale cromatinei

Nivelul urmtor de mpachetare corespunde organizrii fibrei de cromatin de 30 nm sub form de bucle de 300nm fixate de un miez proteic de natur non-histonic, de tip scaffold. Nivelul maxim de condensare a cromatinei corespunde unor bucle super-rsucite cu dimensiunea de 700nm (n concordan cu dimensiunea cromatidei cromozomului mitotic). n concluzie, formarea cromatinei prin asocierea i mpachetarea nalt ordonat cu histonele i alte proteine cromozomale este important att pentru compactarea ADN-ului pn la nivelul maxim reprezentat de comozomul metafazic, ct i pentru reglarea accesului la secvene specifice de ADN n cursul transcrierii i replicrii.

Nivelurile de mpachetare (condensare) ale cromatinei

 n momentul intrrii celulei n mitoz cromatina se condenseaz sub form de cromozomi, structuri vizibile la microscopul optic. Aceast condensare puternic este necesar pentru a permite micarea cromozomilor de-a lungul fusului mitotic, fr ca macromoleculele de ADN s se ncolceasc sau s se rup n timpul distribuiei n celulele fiice. Cromozomii sunt formai din ADN i proteine, n proporii aproximativ egale. Componenta proteic este un amestec heterogen de proteine, dintre care pot fi menionate histonele, proteinele scaffold, ADN i ARN polimerazele. Dup ieirea din mitoz, cromozomii individuali se decondenseaz ocupnd anumite zone bine delimitate n interiorul nucleului interfazic numite teritorii cromozomale. Un cromozom este format dintr-o singur molecul liniar de ADN. Un cromozom opereaz ca o unitate structural distinct, astfel nct o copie a fiecrui cromozom s fie transmis fiecreia dintre celulele fiice.

CROMOZOMII

Structura cromozomilor la EK
Un cromozom funcional prezint 3 tipuri de secvene specializate de ADN: origine a replicrii reprezint secvenele nucleotidice de unde ncepe replicarea ADN. centromer (constricie primar) reprezint regiunea specializat a cromozomului ce asigur adeziunea cromatidelor surori, ancorarea i deplasarea cromozomilor de-a lungul fibrelor fusului de diviziune i segregarea corect a cromatidelor surori n timpul diviziunii celulare. n timpul diviziunii mitotice la nivelul centromerului se formeaz tranzitoriu o structur proteic complex numit kinetocor. telomere secvene de la capetele cromozomului ce confer stabilitate cromozomilor i mpiedic asocierea lor.

Cariotipul reprezint totalitatea cromozomilor unui celule, dispui ntr-un set

complet (caracteristic unui individ sau unei specii) i ntr-un anumit aranjament. Realizarea cariotipului const n aezarea cromozomilor microfotografiai dintr-o celul n metafaz n ordinea descresctoare a dimensiunii lor n perechi omoloage. Conform Standardului Internaional de Nomenclatur Citogenetic, cariotipul uman este redat prin numrul total de cromozomi (46) urmat de formula comozomilor de sex (XX pentru femeie i XY pentru brbat), de exemplu 46, XX i respectiv 46, XY. Cariotipul uman are 23 de perechi de dintre care 22 perechi de autozomi i o pereche de heterozomi (cromozomii ce determin sexul unui organism, denumii i gonozomi). Cariotipurile sunt studiate pentru a determina aberaiile cromozomale.
Cariotip normal de brbat 46, XY

Cariotip de femeie (46, XX)

Cromozomii au fost marcai fluorescent cu fluorocromi de diferite culori. Datorit marcrii fluorescente difereniate toate perechile de cromozomi pot fi vizualizate i identificate simultan.

Dup ieirea din mitoz, cromozomii individuali decondenseaz i ocup anumite zone bine delimitate n interiorul nucleului interfazic numite teritorii cromozomale.

NUCLEOLUL
Nucleolul este o formaiune intranuclear decelabil la microscopul optic, ce reprezint sediul producerii subunitilor ribosomale. Nucleul celulelor somatice umane conine n mod obinuit cte un nucleol pentru fiecare set de cromozomi, astfel c majoritatea celulelor umane somatice (diploide) prezint doi nucleoli. Nucleolul nu este delimitat de membrane, ci este organizat n aria regiunilor cromozomale ce conin gene codificatoare pentru ARN-urile ribosomale.

Morfologia nucleolului
Din punct de vedere morfologic n nucleol au fost evideniate trei regiuni distincte: centrul fibrilar zona fibrilar dens zona granular Genele pentru rARN sunt localizate i transcrise n centrul fibrilar i n zona fibrilar dens. Prelucrarea rARN i asamblarea cu proteinele ribosomale este iniiat n zona fibrilar dens i continu n zona granular unde se formeaz subunitile ribozomale, gata de a fi exportate n citoplasm. Mrimea nucleolului depinde de activitatea metabolic a celulei.

Imagini de microscopie electronic: nucleul (A) i nucleolul (B) din fibroblast uman.