1842 Carl Vogt a descris principiul apoptozei

1885 Walther Flemming a oferit o descriere mai precisa a

MCP
1965 John F. Kerr a descris necroza celulara programata
1972 - Kerr JF, Wyllie AH, Currie AR. Apoptosis: a basic
biological phenomenon with wide-ranging implications in
tissue kinetics. Br J Cancer 1972; 26: 239-257

apo din; ptosis - cadere
Cunoasterea mecanismelor moleculare responsabile pentru
reglarea apoptozei sugereaza o varietate de noi strategii
terapeutice care ar putea imbunatati eficacitatea
tratamentului in cancer
Dereglari ale
apoptozei contribuie
la aparitia neoplaziilor
(prevenirea sau
intarzierea turnover-
ului celular normal) si
faciliteaza progresia
tumorala
Embriogeneza involutia canalelor Wolff si Muller, formarea
degetelor la fat
In dezvoltarea fetala tesutul nervos este produs in exces, iar pentru
formarea conexiunilor dintre neuroni este necesara eliminarea
surplusului de celule







Organogeneza, turnover tisular normal, absenta unor factori trofici
Eliminarea LB si LT la sfarsitul raspunsului imunologic
Eliminarea postinflamator a PMN extravazate in tesuturile inflamate
Eliminarea celulelor epiteliale si a formarii keratinocitelor

Cele doua procese sunt strans legate pentru a preveni o
crestere incontrolabila a numarului de celule
Alterari ale expresiei sau functiei genelor ce controleaza
MCP pot deregla acest echilibru contribuind la expansiunea
celulelor neoplazice

Acumularea celulara (moartea celulara < diviziunea celulara)
Longevitatea (acumularea de leziuni genetice)
Activarea proto-oncogenelor (anuleaza efectele pro-apoptotice)
Instabilitatea genomului (tolerarea defectelor ADN)
Raspunsul imun afectat (CTL si NK depind de integritatea apoptozei)
Independenta la GF/hormoni (supravietuire fara GF paracrini/endocrini)
Angiogeneza (rezistenta la hipoxie; hipoglicemie)
Metastazia (supravietuirea celulelor metastatice fara atasare la ECM)
Chimiorezistenta/radiorezistenta (doze crescute pentru moarte celulara)
Condensarea cromatinei (picnoza)
Condensarea citoplasmei
Fragmentarea nucleului (kariorexis)
Distrugerea mitocondriilor cu eliberarea cyt-c
Vezicularea membranei plasmatice
Contractia si fragmentarea celulara
Formarea corpilor apoptotici
Kerr JF, Wyllie AH, Currie AR. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-
ranging implications in tissue kinetics. Br. J. Cancer 26:239-57
Fagocit
Celula
apoptotica
PS
Receptorii
PS
Alterari citoplasmatice si
mitocondrii dilatate
Superagregarea cromatinei.
Leziuni mitocondriale si lipsa
invelisului nuclear

Ce anume declanseaza
modificarile morfologice din
apoptoza? Raspuns: proteazele
Activarea unei familii de cistein
proteaze intracelulare (clivarea
Asp) caspaze (Cistein
Aspartaze)
Caspazele sunt prezente in toate
celulele animale ca si enzime
inactive
Enzimele active sunt
heterotetrameri compusi din 2
subunitati mari si 2 subunitati
mici cu 2 situsuri active /
molecula
Thornberry NA, Lazebnik Y. Caspases: enemies within. Science 1998;281:1312-6
Cryns V, Yuan Y. Proteases to die for. Genes Dev 1999;12:1551-70
Alnemri ES, Livingston DJ, Nicholson DW, et al. Human ICE/CED-3 Protease Nomenclature. Cell 1996;87:171
Caspaze initiator
Stimuli pro-apoptotici
Caspaze efector
Cascada
caspazelor
Apoptoza
Caspazele cliveaza substraturile la
nivelul Asp si sunt activate prin
proteoliza la nivelul Asp
colaboreaza in cascade proteolitice
Functional, caspazele se grupeaza in
caspaze initiator si efector
Caspazele efectoare sunt dependente
de caspazele initiatoare
Substraturi: protein-kinazele si alte
proteine de transductie a semnalului,
proteine ale citoscheletului si ale
matricei nucleare, proteine de
reparare a ADN-ului si subunitati
inhibitorii ale endonucleazelor
Thornberry NA, Lazebnik Y. Caspases: enemies within. Science 1998;281:1312-6
Cryns V, Yuan Y. Proteases to die for. Genes Dev 1999;12:1551-70
Clasificarea caspazelor
Mediatori ai
inflamatiei
Casp-1
Casp-4
Casp-5
Activatori ai apoptozei
Casp-2
Casp-8
Casp-9
Casp-10
Efectori ai apoptozei
Casp-3
Casp-6
Casp-7
Deletii ale genei caspazei-3 in celule
MCF7
Mutatii ale genei caspazei-8 in
neuroblastoame si alte tumori solide
Mutatii ale genei caspazei-5 in
cancerele de colon
Mutatiile asociate cu starile
neoplazice la nivelul genelor ce
codifica caspazele probabil contribuie
la rezistenta la apoptoza
Datorita redundantei membrilor familei
caspazelor aceste mutatii nu previn
apoptoza, lasand cai alternative ale
apoptozei intacte
Blane C, Deveraux QL, Krajewski S, et al. Caspase-3 is essential for procaspase-9 processing and cisplatin-induced apoptosis of
MCF-7 breast cancer cells. Cancer Res 2000;60:4386-90
Schwartz S Jr,, Yamamoto H, Navarro M, et al. Frameshift mutations at mononucleotide repeats in caspase-5 and other target
genes in endometrial and gastrointestinal cancer of the microsatellite mutator phenotype. Cancer Res 1999;59:2995-3002.
Extrinseca
Celulele CTL si NK
introduc proteaze pro-
apoptotice granzima
B
Receptorii familiei TNF
Mitocondria poate
participa la calea
TNFR prin cross-talk
Intrinseca
Eliberarea cyt c din mitocondrie
Factori de stress asupra RE/Golgi
Calea nucleara de reglare a apoptozei
Celulele CTL si NK
introduc proteaze pro-
apoptotice granzima
B (Motyka et al. 2000)
Granzima B (serin
proteaza) cliveaza
Asp
Granzima B este
capabila sa cliveze si
sa activeze numeroase
caspaze si substraturile
lor (Martin et al. 1996)
Motyka B, Korbutt G, Pinkoski MJ, et al. Mannose 6-phosphate/insulin-like growth factor II receptor is a death receptor for
granzyme B during cytotoxic T cell-induced apoptosis. Cell 2000;103:491-500
Celule de soarece knock-out la care gena FADD lipseste sunt rezistente la inducerea
apoptozei prin citokinele familiei TNF (Zhang et al. 1998)
Celule de soarece cu caspaza-8 knock-out nu pot intra in apoptoza ca raspuns la
liganzi sau anticorpi ce activeaza D-receptorii familiei TNF rol esential al caspazei 8 in
aceasta cale (Varfolomeev et al. 1998)
DR death receptor
DISC death-inducing signalling complex
FADD, Fas-associated death domain
DR4 DR5
Procaspaze 8, 10
Procaspaze 8, 10
DISC
FADD
FADD
Caspase 8,10 Caspase 8,10
Adaptat dupa Hengartner, M.O. 2000. Nature. 407:770.
Green, D. and Kroemer, G. 1998. Trends Cell Biol. 8:267.
Calea mitocondriala
Calea extrinseca
FasL
Caspaza 3
D D
D
D
Fas/Apo1
/CD95
FADD
Procaspaza 8
DISC
Caspaza 8
BID
oxidanti deprivare GF

alti factori
Bcl-2 D
Citocrom
c
dATP
Procaspaza 9
Apaf -1
dATP
Apaf -1
Caspaza 9
Procaspaza 3
Apoptozom
Lezare
ADN
Tinte celulare
BAD Bcl-XL/Bcl-2-associated death promoter
Alberts B, Johnson A, Lewis J, Raff M, Roberts K, Walter P, Molecular Biology of the Cell, New York and London: Garland Science,
2002
Mitocondria mai elibereaza si alte
proteine pro-apoptotice:
endonucleaze G, AIF, Smac
(Diablo) si Omi (HtrA2) si
antagonisti IAP (proteine inhibitorii
a caspazelor)
Celule fara genele pentru Apaf1
sau pro-casp-9 sunt incapabile de
apoptoza ca raspuns la agenti ce
determina eliberarea cyt c din
mitocondrie (Hakem et al. 1998).
Totusi, aceste celule pot muri pe
cai non-apoptotice, demonstrand
ca mitocondria controleaza cai
caspazo-dependente cat si
caspazo-independente (Haraguchi
et al. 2000)
Caspaza 3, 6, 7
Apoptoza
p53
BAX, BAK
BCL2, BCLX
L

Mitocondria
SMAC/DIABLO
Caspaza 9
PUMA, NOXA
APAF1
Citocrom c
Lezare ADN
IAP
Adaptat dupa Ashkenazi A. Nat Rev Cancer 2002;2:420430.
APAF1 factorul de activare al proteazei apoptotice-1; BAK Bcl-2 homolog antagonist/killer; BAX proteina asociata Bcl-2;
Bcl-2 leucemie limfocitara cronica cu celule B; BCLX
L
Bcl-2-like 1; IAP inhibitor al proteinei apoptozei; PUMA - p53-
upregulated modulator of apoptosis; SMAC/DIABLO - second mitochondria-derived activator of caspase/direct IAP binding
protein with low pI
Studii de ablatie genica sugereaza
posibilitatea existentei unei cai
RE/Golgi apoptoza care sa implice
casp-12 (Nakagawa et al. 2000).
Caspaza 12 la celulele umane este
nefunctionala datorita prezentei
precoce a unui codon stop (Fischer et
al. 2002)
S-a mai sugerat o relatie intre casp-
2 si Golgi dar detaliile sunt inca neclare
(Mancini et al. 2000)
Nakagawa T, Zhu H, Morishima N, et al. Caspase-12 mediates endoplasmic-reticulumspecific apoptosis and cytotoxicity by
amyloid-. Nature 2000;403:98-103
Fischer H, Koenig U, Eckhart L, Tschachler E. Human caspase-12 has acquired deleterious mutations. Biochem Biophys Res
Commun 2002;293:722-6
Mancini M, Machamer CE, Roy S, et al. Caspase-2 is localized at the golgi complex and cleaves golgin-160 during apoptosis. J
Cell Biol 2000;149:603-12.
Casp-2 si casp-12 sunt proteine ce contin domenii CARD, dar nu se
cunoaste care sunt proteinele adaptor care se leaga de CARD si care
controleaza activarea acestor proteaze
CARD - CAspase Recruitment Domains
Calea nucleara de reglare a
apoptozei este centrata asupra
unor mici unitati nucleare POD
(Pml oncogenic domains) sau
corpi nucleari (NB)
Ablatia genei pml duce la o
rezistenta generala la apoptoza
printr-un mecanism inca
necunoscut (Wang et al. 1998)
Au fost localizate cateva proteine
pro-apoptotice in NB: Daax,
DAPK3 si Par4 (1997-2000)
PAR4 - Prader-Willi/Angelman region gene 4
DAPK3 death associated kinase 3
Wang Z-G, Ruggero D, Ronchetti S, et al. Pml is essential for multiple apoptotic pathways. Nat Genet 1998;20:266-72
Salomoni P, Pandolfi PP. The role of PML in tumor suppression. Cell 2002;108:165-70
Pml a fost prima data identificata datorita fuziunii sale cu gena RAR in
t(15;17) cromozomiala din leucemia promielomonocitica, unde disloca NB
si se creaza un status apoptozo-rezistent (Salomoni et al. 2002)
Desi exista diverse mecanisme de activare a casp-initiator,
in cele mai multe cazuri mecanismele biologice sunt foarte
similare
Activarea caspazelor poate fi explicata prin modelul
proximitatii induse (Salvesen, Dixit 1999)
Acest model se bazeaza pe observatia empirica a faptului
ca formele neprelucrate a caspazelor nu sunt in totalitate
inactive ci poseda o activitate proteazica redusa (~1%)
Aduse in stransa apozitie prin interactiuni proteice,
zimogenele se pot trans-procesa reciproc proteaze
active total
Acest mecanism este clar in caile de activare a caspazelor
prin receptorii fam. TNF (extrinseca) si cyt c mitocondrial
(intrinseca)
Salvesen GS, Dixit VM. Caspase activation: the induced-proximity model. Proc Natl Acad Sci U S A 1999;96:10964-7
NF-kB induce exprimarea
unor gene antiapoptotice:
familia BCL-2 (BCL-X
L
, BFL-
1), familia IAP (C-IAP2) si
familia genei DED (C-FLIP)
(Karin M, Lin A. 2002)
Karin M, Lin A. NFkappaB at the crossroads of life and death. Nat Immunol 2002;3:221-7
Karin M, Cao Y, Greten FR, Li Z-W. NFB in cancer: from innocent bystander to major culprit. Nat Rev Genet 2002;2:301-10
Cresteri ale activitatii NF-kB cresc rezistenta celulara la
apoptoza afectand:
Calea intrinseca (mitocondriala): Bcl-2 antiapoptotice
Calea extrinseca (receptorii fam. TNF): reglarea FLIP
Cai comune ce implica caspazele efector ca si rezultat al
supra-expresiei C-IAP2
Date recente arata o hiperactivitate a NF-kB in numeroase
neoplazii solide si hematopoietice (Karin M et al., 2002)
Medicamentele anticanceroase
activitatea proteozomilor supresia
degradarii IkB NF-kB (Hayashi et al.
2000)
IkB kinazele (IKK) fosforilarea IkB
(pentru degradarea IkB), sunt de
asemenea evaluate ca tinte pentru noi
medicamente
Karnolsky IN. Cytogenetic abnormalities in chronic lymphocytic leukemia. Folia Med (Plovdiv) 2000;42:5-10
Hayashi T, Faustman D. Essential role of human leukocyte antigen-encoded proteasome subunits in NFB activation and prevention
of tumor necrosis factor-a-induced apoptosis. J Biol Chem 2000;275:5238-47
Virusul HIV, prezinta locusuri pentru NF-kB ce controleaza expresia
genelor virale si contribuie la replicarea virala si patogenicitatea
virala. In cazul virusului HIV-1, NF-kB este implicata in parte in
activarea virusului.
YopJ, secretata de Yersinia pestis (ciuma bubonica), previne
degradarea IkB. Aceasta determina ca acest patogen sa inhibe
efectiv calea NF-kB si astfel sa blocheze raspunsul imun al unei
persoane infectate cu Yersinia.
Protein kinaza Akt (PKB) joaca un rol
important in legarea factorilor de
crestere si oncoproteinelor la calea
apoptotica.
Celulele umane prezinta 3 tipuri de
gene Akt. Akt pot fosforila diverse
proteine apoptotice: BAD (fosforilarea
BAD inhiba capacitatea sa de a
heterodimeriza cu Bcl-X (Datta et al.
1999)
Kim AH, Khursigara G, Sun X, et al. Akt1 phosphorylates and negatively regulates ASK1. Mol Cell Biol 2001;21:893-901
Testa JR, Bellacosa A. AKT plays a central role in tumorigenesis. Proc Natl Acad Sci USA 2001;98:10983-5.
Akt poate fosforila si casp-9, blocand apoptoza pe calea
mitocondriala (Cardone et al. 1998)
Akt are un rol important si in activarea NF-kB (Ozes et al. 1999)
Akt se opune apoptozei indusa de kinaza Ask1 (Kim et al. 2001) si
promoveaza degradarea p53 prin actiunea sa asupra Mdm2 (Testa
JR, Bellacosa A, 2001).
PI-3K - Phosphatidylinositol-3-kinase
BAD Bcl-XL/Bcl-2-associated death promoter
Alberts B, Johnson A, Lewis J, Raff M, Roberts K, Walter P, Molecular Biology of the Cell, New York and London: Garland Science,
2002
Expresia Bcl-2 in epiteliul mamar
este estrogen-dependenta. Prin
inhibarea activitatii transcriptionale
a ER, antiestrogenii (Tamoxifen)
reduc expresia Bcl-2 si
promoveaza apoptoza in celulele
tumorale mamare, explicand
efectele benefice ale agentilor
antihormonali in tratamentul
cancerelor mamare (Teixeira et al.
1995)
Guzey M, Kitada S, Reed JC,Apoptosis induction by 1alpha,25-dihydroxyvitamin D3 prostate cancer.
Mol Cancerl Ther 2002;1:667-77.
Similar, vitamina D si unii analogi sintetici activeaza receptorul vitaminei D
(VDR) si inhiba expresia unor gene Bcl-2 antiapoptotice (Bcl-2, Bcl-X
L
)
restabilind sensibilitatea la apoptoza. Doze mari de vitamina D se folosesc
in prezent in trialuri clinice pentru cancer prostatic (Guzey et al. 2002).
Diosgenina (Trigonella sp.), activeaza apoptoza in celule canceroase
mamare probabil prin scaderea expresiei Bcl-2 antiapoptotic si prin
activarea casp-9
Alberts B., Johnson A., Lewis J., Raff M., Roberts K., Walter P., Molecular Biology of the
Cell, 4th ed., New York, Garland Publishing, 2002
Ardelean A, Biologie celulara si moleculara, Ed. Vasile Goldis Univ. Press, 2007
Benga Gh., Biologie Celular i Molecular, Ed. Dacia, Cluj-Napoca, 1985
Cooper G.M., The Cell - A Molecular Approach, 2nd ed., Sunderland (MA), Sinauer
Associates, Inc.; 2000
Craciun C, Florea A, Dragos N, Ardelean A, Introduction to Cell and Molecular Biology,
Cluj Univ. Press, 1999
Cruce M., Biologie Celular i Molecular, Ed. Aius Craiova, 2002
Diculescu I., Onicescu D., Benga Gh., Popescu L.M., Biologie Celular, Ed. D.P. Buc.,
1983
Frsinel N., Verde D., Biologie Celular i Molecular, Ed. Mirton, Timioara, 1994
Lodish H., Berk A., Zipursky S., Matsudaira P., Baltimore D., Darnell J., Molecular Cell
Biology, 4th ed., New York, W. H. Freeman & Co., 1999.
Kufe, DW; Pollock, RE; Weichselbaum, RR.; Bast, RC., Jr.; Gansler, TS.; Holland, JF.;
Frei III, E., Cancer Medicine, BC Decker Inc. ; 2003
Mixich F., Ardelean A., Principii fundamentale de biologie molecular, Ed. Med. Univ.
Craiova, 2002
Moldoveanu E, Popescu LM, Apoptoza - Mecanisme moleculare, ed. a II-a, Ed. Univ.
Carol Davila Bucuresti, 1999
Strachan T., Read A.P., Human Molecular Genetics, 2nd ed. Oxford, UK, BIOS Scientific
Publishers Ltd; 1999