MICROBIOLOGIA I

DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL DIFTERIEI
I TUSEI CONVULSIVE
 DIFTERIA toxiinfecie acut, caracterizat
printr-o angin pseudo-membranoas cu
efecte toxice la distan (miocardit,
polineurit, nefroz).

familia Corynebacteriaceae
genul Corynebacterium,
 Clasificarea genului Corynebacterium
I. Corinebacterii fitopatogene
II. Corinebacterii patogene pentru animale:
C.pseudotuberculosis, C.ulcerans
III. Corinebacterii cu tropism uman:
- Specie patogen: C.diphtheriae (biovaruri
gravis, mitis, intermedius).
- Specii comensale (specii pseudodifterice,
difteroizi): C.xerosis, C.pseudodiphthericum,
etc.
 1821 Bretonneau individualizeaz difteria i
demonstreaz caracterul ei contagios
1883 - Klebs descrie agentul din membranele
false
1884 - Loeffler izoleaz corynebacteriile, apoi
demonstreaz patogenitatea lor pe cobai
1888 - Roux i Yersin demonstreaz secreia
exotoxinei i inoculnd-o la animal reproduc
difteria
1923 - Ramon prepar anatoxina difteric,
primul vaccin antidifteric.
 Caractere morfotinctoriale ale
C.diphtheriae
Bacterii (bastonae) de 1-8 m x 0,3-0,8 m,
drepte sau puin ncurbate, cu extremitile
rotunjite sau ngroate (aspect de halter sau
de mciuc), datorit granulaiilor de volutin.
n frotiuri se aranjeaz unghiular, n palisade
sau sub forma caracterelor chinezeti, cifre
romane sau litere majuscule: Y, M, N, V...
Imobile, asporogene, necapsulate.
Se coloreaz G+, pentru evidenierea
granulaiilor de volutin - Loeffler, Neisser
 Caractere de cultur
C.diphtheriae este o specie facultativ anaerob, exigent
la cultivare, temperatura optim de cultivare 37C, Ph 7,4-8,0.

Medii de cultur elective:

- Mediul Loeffler (ser bovin coagulat): colonii S, mici, netede,
opace, albe-cenuii, apar peste 16-18 ore de cultivare
- Geloz-snge (identic)

Medii de cultur selective difereniale:

- Mediul Clauberg (geloz-snge cu telurit de potasiu).
C.diphtheriae gravis: colonii R, mari, negre, crenelate, aspect
de floare de mrgritar, nehemolitice; mitis: colonii S,
mijlocii, negre, bombate, cu zon de hemoliz
- Mediul Tinsdale (geloz-ser-cistin-telurit de potasiu- tiosulfat)
- Mediul Bucin (geloz-snge cu hinozol) colonii de culoare
albastr
 Factori de patogenitate:

Toxina difteric - origine proteic

Pilii
Microcapsula
Enzime de patogenitate
 Patogeneza i formele clinice de difterie
Sursa de infecie: bolnavul cu difterie i
purttorii sntoi de germeni (colonizeaz
rinofaringele, rareori tegumentul sau
conjunctiva).
Mecanismele i cile de transmitere:
- Direct pe cale aerogen (picturi) sau contact
cu plgi contaminate
- Indirect prin obiecte (jucrii, cri), praf sau
alimente contaminate (lactate)
 Metode de diagnostic:
Examenul microscopic (Gram, Loeffler,
Neisser), microscopia imunofluorescent
 Examenul bacteriologic (izolarea,
identificarea culturii pure). Studierea
toxigenezei obligator. Se efectueaz prin RN
cu ser antitoxic in vivo (cobai), in vitro (RP
Elek, Ouchterlony), sau depistarea genei Tox
n prelevat sau n cultura pur prin PCR.
Examenul serologic retrospectiv,
- RA cu seruri perechi (I sptmn i a III) i
cultur de C.diphtheriae. Titrul semnificativ
1:100 sau creterea titrului de Ac.
- Evaluarea titrului de antitoxine n serul
bolnavului (RN, RHAI, ELISA).
 Receptivitatea la difterie poate fi determinat
prin:
- Testul Schick (in vivo): i/dermic 0,1 ml toxin
difteric (1/40 DLM).
Reacie +: eritem 1cm (receptivitate la difterie),
Reacie -: lipsa eritemului (persoan imun)
- RN in vitro
- RHAI
- ELISA
Titrul antitoxinelor > 0,1 UI/ml protector
Titru inferior 0,01 UI/ml lipsa proteciei
 Tratamentul difteriei:

1.Seroterapie precoce (ser antitoxic antidifteric,

Ig).

2. Antibioterapie (macrolide, tetracicline,

cloramfenicol, aminozide, beta-lactamine).
Asigur eradicarea germenilor.

3. Tratament simptomatic
Profilaxia specific a difteriei:
Vaccinarea obligatorie cu anatoxin difteric
a copiilor conform calendarului de vaccinri.
- Exist vaccinuri asociate: ADT, ADTP.
Vaccinarea primar cu ADTP la 2-4-6 luni;
revaccinarea la 22-24 luni cu ADTP; la 6-7,
apoi la 14-15 ani cu ADT.
- Vaccin sintetic antidifteric.
 TUSA CONVULSIV
Familia Halobacteriaceae
Genul Bordetella
Specii:
1. Bordetella pertussis (agentul tusei convulsive)
2. Bordetella parapertussis (agentul parapertusei)
3. Bordetella bronchiseptica (pneumonii, bacteriemii)
4. Bordetella avium
5. Bordetella holmensii (izolat din hemoculturi)
6. Bordetella hinzii (izolat din prelevate respiratorii)
7. Bordetella trematum (infecii cutanate i auriculare)
B.pertussis agentul cauzal al tusei convulsive
Caractere morfobiologice
Cocobacterii G-, asporogene, imobile,
formeaz microcapsul, n frotiu se dispun
separat, n perechi sau lanuri scurte.
Reprezint mi/o strict aerobe, foarte pretenioase
la cultivare.
Medii speciale de izolare:
- mediul Bordet-Gengou
- geloz-cazein-snge-crbune activat

Mediul de transport Kuzneov (soluie tampon

fosfat, 0,5% agar-agar, 0,2% crbune activat)
 Patogeneza tusei convulsive

Sursa de infecie omul bolnav, n special

n perioada de debut al bolii.

Mecanismul de transmitere aerogen,

prin picturi
n evoluia tusei convulsive se disting 4 perioade:

I. Perioada de incubaie (3-15 zile)

II. Perioada cataral, foarte contagioas.
Caracterizat prin tuse seac, rinoree (3-14 zile)
III. Perioada convulsiv. Accese de tuse
spasmodic, epuizant, asociat cu cianoz,
vom, convulsii. (2-4 sptmni)
IV. Perioada de convalescen (2-4 sptmni)
Diagnosticul de laborator al tusei convulsive:
Prelevate: mucoziti nasofaringiene sau
bronice, recoltate ct mai precoce.
Metode de diagnostic
1. RIF
2. Examenul bacteriologic (nsmnare cu
tamponul sau prin tehnica plcilor tuite)
3. Tehnnici de biologie molecular (PCR)
4. Examenul serologic (RA, RFC, ELISA).
Reaciile se pozitiveaz din sptmna a II a
perioadei convulsive. Se examineaz seruri
perechi.
Tratamentul tusei convulsive:
Eritromicin sau cloramfenicol cel puin 10
zile (pn la apariia Ac)
Imunoglobulin uman antipertussis
Profilaxia specific:
Imunizarea artificial obligatorie cu vaccin
ADTP.
Vaccinul acelular
Imunoglobulin uman antipertussis