MEDII DE CULTURĂ

METODE DE IZOLARE
 Bacteriile trebuie cultivate (cultivate)
pentru a fi identificate.
 Prin proceduri adecvate, acestea trebuie
cultivate separat (izolate) pe medii de
cultură și obținute ca pure pentru studiu.
Istorie
 Suportul original folosit de Louis Pasteur -
urină sau bulion de carne
 Mediu lichid - creștere difuză
 Colonii medii solide - discrete.
Colonie - colecție vizibilă macroscopic de
milioane de bacterii originare dintr-o
singură celulă bacteriană.

 Cartof tăiat gătit de Robert Koch - primul

mediu solid
 Gelatina - nu este satisfăcătoare
- se lichefiază la 24 de anioC
Agar
 Frau Hesse
 Folosit pentru prepararea mediului solid
 Obținut din alge marine.
 Fără valoare nutritivă
 Nu este afectat de creșterea bacteriilor.
 Se topește la 98oC & setează la 42oC
 2% agar este utilizat în mediu solid
 Tipuri de medii de cultură
I. Pe baza consistenței lor
a) mediu solid
b) mediu lichid
c) mediu semi solid
II. Pe baza constituenților / ingredientelor
a) mediu simplu
b) mediu complex
c) mediu sintetic sau definit
d) Medii speciale
Mass-media speciale
– Mass-media îmbogățită
– Medii de îmbogățire
– Medii selective
– Medii indicatoare
– Medii diferențiale
– Mediul de zahăr
– Mijloace de transport
– Medii pentru reacții biochimice

III.Pe baza cerinței de oxigen

- Medii aerobe
- Mass-media anaerobă
Medii solide - conține 2% agar
 Se pot aprecia morfologia coloniei, pigmentarea,
hemoliza.
 De exemplu: Agar nutritiv, Agar de sânge

Medii lichide - fără agar.

 Pentru prepararea inoculului, hemocultură, pentru
izolarea agenților patogeni dintr-un amestec.
 De exemplu: bulion de nutrienți

Mediu semi solid - 0,5% agar.

 De exemplu: mediu de motilitate
 MEDII SPECIALE

• MEDII ÎMBOGĂȚITE
MEDII DE ÎMBOGĂȚIRE
• MEDII SELECTIVE
• MEDII DIFERENȚIALE
• MEDIA INDICATOR
• MEDII DE TRANSPORT
• ZAHĂR MASS-MEDIA
Medii simple / medii bazale
- De exemplu: NB, NA
- NB constă din peptonă, extract de carne,
NaCI,
- NB + 2% agar = Agar nutritiv
 MEDII SIMPLE
Mediile simple sau bazale sunt medii de cultură care conțin
nutriția minimă adecvată pentru organismele nedorite

Exemplu:- Bulion / agar nutritiv

Apă peptonică
Compoziţie:-
Lab-Lemco -10gm
peptonă-10gm
NaCI-5gm
Apă distilată-1000ml
- Când se adaugă 2-3% agar, atunci îl avem ca agar nutritiv.
- Pentru medii semisolide - concentrația de agar este de 0,2-
0,4%
Utilizări: -
1. Aceasta este baza majorității mediilor utilizate în studiu la
bacteriile patogene comune.
2. Este folosit pentru subculturile anumitor organisme.
 NUTRIENT AGAR

FRATURA NUTRIENTA
Medii complexe
 Medii altele decât mediile bazale.
 Au adăugat ingrediente.
 Furnizați nutrienți speciali

Medii sintetice sau definite

 Mediile preparate din substanțe chimice
pure și compoziția sa exactă sunt
cunoscute
 De exemplu: apă peptonică - 1% peptonă +
0,5% NaCI în apă
Mass-media îmbogățită
 Substanțele precum sângele, serul, ouul
sunt adăugate la mediul bazal.
 Folosit pentru a crește bacterii care sunt
exigențe în ceea ce privește nevoile lor
nutriționale.
 De exemplu: agar de sânge, agar de
ciocolată
Agar de sânge Agar de ciocolată
Medii de îmbogățire
 Medii lichide utilizate pentru
izolarea agenților patogeni
dintr-o cultură mixtă.
 Media este încorporată cu
substanțe inhibitoare pentru
suprimarea organismului
nedorit.
 De exemplu:
– Bulion Selenit F - pentru izolarea
Salmonella, Shigella
– Apă alcalină cu peptone - pentru
Vibrio cholerae
CARACTERISTICILE MEDIULUI DE TRANSPORT:
 Ar trebui să fie netoxic
 Nu ar trebui să promoveze sau să inhibe creșterea bacteriană
 Ar trebui să fie ușor de transportat și transportat

Exemple:
1. Venkatraman Ramakrishnan medium
2. Mediu de transport al serului salin glicerol tamponat
3. Cary și Blair medium

Cary și Blair medium

Medii selective
 Substanța inhibitoare este adăugată la un
mediu solid.
De exemplu:
 Mediul lui Mac Conkey pentru bacteriile
gram negative
 TCBS - pentru V.cholerae
 Mediu LJ - M.tuberculoza
 Wilson și Blair medium - S.typhi
 Mediu de telurit de potasiu - Bacili difterici
Mediul lui Mac Conkey TCBS
Medii de telurit de potasiu Mass-media LJ
Medii indicatoare
 Aceste medii conțin un indicator care își
schimbă culoarea atunci când o bacterie
crește în ele.
 De exemplu:
– Agar de sânge
– Mediul lui Mac Conkey
– Mediul ureatic al lui Christensen
– Agar de sare de manitol - mediu Chapman
Ureaza mediu
 Fermentatori pentru lactoză - Roz colonii
 Fermentatori fără lactoză - colonii incolore
MacConkey agar
care prezintă atât
colonii de
fermentare lactoză,
cât și non-lactoză.

Coloniile de
fermentare a
lactozei sunt roz, în
timp ce cele care
nu fermentează
lactoza sunt
incolore sau apar la
fel ca mediul.
 Descriere:
Fermentatori
pentru lactoză și
non-lactoză pe
mediu CLED.
Mijloace de transport
 Medii utilizate pentru transportul
probelor.
 Este posibil ca organismele
delicate să nu supraviețuiască
timpului necesar transportării
specimenului fără un mediu de
transport.
 De exemplu:
– Mijlocul lui Stuart - gel agar moale
non-nutritiv care conține un agent
reducător
– Soluție salină glicerol tamponată -
Medii pentru anaerobi
 Aceste medii sunt utilizate pentru a crește
organisme anaerobe.
 De exemplu: mediu de carne gătit de Robertson,
mediu de tioglicolat.
 MEDIU ANAEROB
Aceste medii sunt utilizate pentru a crește organisme anaerobe.
Exemple: -
 Bulion de tioglicolat
 Robertsons Cooked Meat Medium
 METODE DE CULTURĂ
 Metodele de cultură utilizate depind de scopul
pentru care sunt destinate.
 Indicațiile pentru cultură sunt:
– Pentru a izola bacteriile în culturi pure.
– Pentru a demonstra proprietățile lor.
– Pentru a obține o creștere suficientă pentru
prepararea antigenelor și pentru alte teste.
– Pentru susceptibilitatea la bacteriofag și
bacteriocină.
– Pentru a determina sensibilitatea la antibiotice.
– Pentru a estima numărările viabile.
– Mențineți culturi de stoc.
Metode de cultură include:
 Cultura striurilor
 Cultura gazonului
 Cultura accidentului vascular cerebral
 Cultura înjunghierii
 Se toarnă metoda plăcii
 Cultura lichidă
 Metode de cultură anaerobă
CULTURA STREAK
 Folosit pentru izolarea bacteriilor în cultură pură
de specimene clinice.
 Se utilizează sârmă de platină sau sârmă
Nichrome.
 O buclă de specimenul este transferat pe
suprafața unei plăci bine uscate.
 Răspândiți pe o zonă mică la periferie.
 Inoculul este apoi distribuit subțire peste placă
prin strângerea acestuia cu o buclă într-o serie de
linii paralele pe diferite segmente ale plăcii.
 La incubație, coloniile separate sunt obținute pe
ultima serie de dungi.
INOCULAREA ÎN PENTAGON
CULTURA uniforma
 Oferă o creștere uniformă a suprafeței bacteriei.
 Utilizări
– Pentru tastarea bacteriofagilor.
– Testarea sensibilității la antibiotice.
– La prepararea antigenelor bacteriene și a
vaccinurilor.
 Culturile uniforme sunt preparate prin inundarea
suprafeței plăcii cu o suspensie lichidă a
bacteriei.
 Agar Mueller-Hinton este un mediu de
creștere microbiologic care este frecvent
utilizat pentru testarea sensibilității la
antibiotice.

 Formular inițial pentru izolarea Neisseria

specii.

 Este, de asemenea, utilizat pentru a izola

și întreține Neisseria și Moraxella specii.
CULTURA IN STRIU
 Cultura in striu se face în
tuburi care conțin panta /
înclinarea agarului.

 Utilizări
– Furnizați o creștere pură a
bacteriei pentru aglutinarea
diapozitivelor și alte teste
de diagnostic.
CULTURA STAB
 Preparat prin perforarea unui mediu
adecvat - gelatină sau agar de glucoză cu
un fir lung, drept, încărcat.
 Utilizări
– Demonstrarea lichefierii gelatinei.
– Cerințele de oxigen ale bacteriei în
studiu.
– Întreținerea culturilor de stoke.
Lichefierea gelatinei Oxidare - mediu de
fermentare
CULTURA PLĂCII VOASE
 Mediul de agar este topit (15 ml) și răcit la 45 oC.
 La agar topit se adaugă 1 ml de inocul.
 Se amestecă bine și se toarnă într-un vas Petri
steril.
 Permiteți-i setarea.
 Incubați la 37oC, coloniile vor fi distribuite pe
toată adâncimea mediului.
 Utilizări
– Oferă o estimare a numărului de bacterii viabile într-o
suspendare.
– Pentru uroculturi cantitative.
CULTURI LICHIDE
 Culturile lichide sunt inoculate prin atingere cu o
buclă încărcată sau prin adăugarea inoculului cu
pipete sau seringi.
 Utilizări
– Hemocultură
– Testele de sterilitate
– Metode de cultură continuă
 Dezavantaj
– Nu oferă o cultură pură din inoculele mixte.
Sticle pentru culturi de sânge
CULTURI BACTERIENE IN MEDIU
LICHID
CARACTERE DE CULTURA PE MEDII
SOLIDE
CARACTERE DE CULTURA PE MEDII
SOLIDE
 CARACTERE DE CULTURA PE MEDII
SOLIDE

Pneumococ
Mediul geloză-sânge Bacilul Koch Mediul geloza-sange
Colonii hemolitice de stafilococ aureu Mediul Lowenstein-Jensen

Mediul geloză-sânge Pseudomonas aeruginosa

Mediul geloză-sânge
Colonii de Proteus cu invazie Mediul Mc Conkey
Colonii de Streptococ beta hemolitic