Curs de

Biofizică

3
Metode de studiu
în
Biofizică
 Clasificare:

I. METODE GENERALE

II. METODE SPECIFICE

I. METODE GENERALE:

A) Observaţia ştiinţifică

B) Experimentul ştiinţific

Ştiinţa este o uşă şi

cercetarea este cheia acesteia.
- Anton Pann
Observaţia ştiinţifică

Natura răspunde doar celui

pregătit să o audă.
Hippocrate: observaţia ştiinţifică

Hippocrate a fost fondatorul şcolii

medicale Kos şi numele lui este
strâns legat de prima perioadă a
medicinii ştiinţifice.
Diagnosticul lui se bazează pe
sistemul de raţionament logic, pe
observaţie clinică atentă, pe o
abordare umană a pacientului, pe
logică.
 Hippocrate:

Părintele medicinii
Jurământul lui Hippocrate
Bazele cercetării ştiinţifice:
observaţia
Fişa medicală - Foaia de
observatie, continuă să fie cel
mai important document al
pacientului (primele observaţii
clinice - Hippocrate).
 Tratamentul pe baze
ştiinţifice.
 Observaţia ştiinţifică Experimentul ştiinţific


intenţională: scop 
aceleaşi caracteristici,

metodică: metodă dar cu intervenţia

organizată, cercetare sistematică cercetătorului

valoare cognitivă

depinde de calităţile 
poate fi:
cercetătorului 1. in vivo (pe modele animale)

fără intervenţia cercetătorului 2. in vitro (pe celule, culturi de
celule)
- poate fi:
1. directă (bazată pe percepţia
senzorială)

nu poate fi aplicat pe om.
2. indirectă (intermediată de un
instrument - stetoscopul)
 II. Metodele specifice biofizicii
Clasificare bazată pe trei criterii:
I. Principiul fizic/biofizic al metodei (prezentat extensiv)
II. În relaţie cu modul de utilizare:
metode de separare
metode analitice (de analiză)
III. În relaţie cu complexitatea
biosistemului :
atomi,
molecule
celule
ţesuturi
organe, sisteme fiziologice.
 De ce ‘metode de separare’
pentru medic?
Analiza unei anumite proteine dintr-un ţesut complex
necesită separarea acesteia.
Schema unei celule animale tipice, care arată componentele subcelulare. Organite:
(1) nucleoli (2) nucleu (3) ribozom (4) veziculă (5) reticulul endoplasmatic (ER) (6)
aparatul Golgi (7) citoscheletul (8) reticulum endoplasmatic (9) mitocondrii ( 10)
vacuole (11) citoplasma (12) lizozom (13) centriol.

Proteom - ansamblul de
proteine produse de genom
(aproximativ 60.000 de
proteine la om).
 Separarea-purificarea proteinelor
Scop
Studiul proprietăţilor unei proteine
Determinarea secventei de aminoacizi
Determinarea structurii tridimensionale

Dificultate
Celulele conţin, de obicei mai mult de 1000
tipuri diferite de proteine. Fiecare proteina are
abundenţa medie mai puţin de 1 / 1000

Soluţie
Diferenţele biochimice şi ale proprietăţilor fizico-chimice
ale proteinelor:
solubilitate, dimensiuni, punct izoelectric, hidrofobicitate,
afinitate pentru anumiţi liganzi.
 I. Grupele principale de
metode în raport cu
principiul fizic/biofizic
1. Metode electrokinetice : L.P.!

Electroforeza şi immunoelectroforeza
 Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

2. Metode cromatografice: (adsorbţie,

partiţie, schimb de ioni, afinitate)
3. Centrifugare şi ultracentrifugare
L.P.!

4. Metoda de liofilizare
 Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

5. Metode kinetice:
L.P.!

Viscozimetrie

Osmometrie L.P.!


Măsurarea tensiunii superficiale L.P.!
Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

6. Metode optice:

Fotocolorimetrie L.P.!

Turbidimetrie

Nefelometrie

Fluorimetrie

Polarimetrie

Refractometrie L.P.!


Flam-fotometrie L.P.!
Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

7. Metode electrice:

Polarografie

pH-metrie

Conductometrie L.P.!

8. Difracţie cu raze X
 Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

9. Microscopia optică: L.P.!

Microscopul optic L.P.!

 Microscopul cu contrast de fază

 Microscopul cu fluorescenţă
 Ultramicroscopul
 Microscopul polarizant
L.P.!
 Microscopul cu imersie
Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

10. Microscopul electronic,

microanaliza nucleară şi alte tehnici
în relaţie.
 Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

11. Metode de spectrometrie optică :


spectrometrie ultraviolet-vizibil

spectrometrie Raman

Spectrometrie RMN L.P.!

spectrometrie de masă
14. Metode radio-izotopice
L.P.!
15. Metode pentru studiul semnalului bioelectric
(metoda patch-clamp - canale ionice şi l.p.) L.P.!