ORGANIZAREA MOLECULAR A GENOMULUI NUCLEAR LA EUCARIOTE

Prof. Dr. Vlaic Augustin

Dimensiunea ADN cromozomial

La eucariote, fiecare cromozom conine o singur molecul de ADN, de lungime enorm cel mai lung cromozom - la Drosophila 18 mm i este alctuit din 65 milioane de perechi de baze, n timp ce o celul uman diploid cu 46 de cromozomi conine circa 2 m de ADN i circa 6 miliarde de perechi de baze. prin electroforeza n cmp pulsatil, la organismele cu cromozomi mici, (Neurospora crasa) s-a demonstrat c fiecare cromozom conine o sg molecul de ADN (n gel se obine un numr de benzi egal cu numrul de cromozomi, adic 7)

Structura molecular a cromozomului eucariot

Sunt alctuii din cromatin Cromatina este format din ADN i un agregat complex de proteine: histonice i nonhistonice Cea mai simpl form de organizare a cromatinei este n interfaza mitozei

Histonele

Exist 5 tipuri de histone: H1, H2A, H2B, H3, H4. Histonele sunt proteine bazice bogate n lizin i arginin i conin 100 200 aminoacizi prezente la majoritatea eucariotelor ntr-o cantitate egal cu masa ADN. Rspund de meninerea structurii cromozomilor sau cromatinei i de modificrile care apar n aceste structuri n timpul diviziunii celulare.

Conservarea domeniului histonelor

Histonele pot fi disociate de ADN cu ajutorul unei soluii saline Sunt foarte asemntoare structural, excepie fcnd histona H1. Secvena aminoacizilor din histona H3 din cromatina de taurine i cea de mazre difer doar prin 4 aminoacizi din 135, n timp ce secvena aminoacizilor din histona H4 de la cele dou specii difer doar prin 2 aminoacizi din cei 102 (nalt conservare evolutiv)

Proteinele nonhistonice

un grup eterogen de polipeptide, cum sunt: enzime implicate n sinteza ADN i ARN, enzime implicate n procesul de biosintez reparatorie a ADN (ADN polimerazele, ARN polimerazele, ligazele, topoizomerazele,helicazele)

proteine reglatoare, de tipul factorilor de transcripie, intensificatorilor sau atenuatorilor; proteine structurale: actina, tubulina (protein ce intr n structura microtubilor ce se afl n celule).

Organizarea fibrelor de cromatin n cromozomi

Nucleozomii sunt unitile de baz structural a cromatinei. La microscopul electronic cromatina arat ca un irag de perle, fiecare perl reprezint un nucleozom. Unitatea organizatoric a firului de cromatin nucleozomul: miez, ADN internucleozomic sau linker, care leag nucleozomii ntre ei i o molecul din histona H1.

Structura numit miez const dintr-un octomer ce conine cte dou molecule din histonele H2A, H2B, H3, H4 nconjurat de ADN nucleozomic, ce este alctuit din 145 perechi de nucleotide. ADN-ul nucleozomic nconjoar octomerul din histone de aproximativ 1 ori.

Niveluri de organizare sau condensare a fibrei de cromatin

1. fibra nucleozomal 2. fibra solenoidal (al doilea nivel) 3. Cromatida (al treilea nivel)

Nivelul 1 fibra nucleozomal

diametrul de 11 nm (110 ). Aceast fibr rezult din alturarea nucleozomilor unul dup altul.

Niveul 2 solenoidul diametru de 30 nm

Pentru a forma aceast structur, fibra de 11 nm se nfoar n jurul ei nsi, rezultnd un super helix orientat spre stnga sau un solenoid supernfurat cu 6 nucleozomi pe rnd.

Niveul III - cromatida

fibra de 30 nm se condenseaz ntr-o cromatid a cromozomului metafazic cu diametrul de 700 nm.

Nucleozom

Solenoid

Cromatida cromozom

ORGANIZAREA SECVENELOR DE NUCLEOTIDE N ADN-UL CROMOZOMAL

AL EUCARIOTELOR

60% din ADN eucariot este reprezentat de genele structurale, adic este alctuit din secvene nucleotidice informaionale. Restul de circa 40% este reprezentat de secvene nucleotidice noninformaionale

Fraciunile ADN eucariot

ADN-ul din genomul eucariot este alctuit din 3 fraciuni: ADN cu secvene unice; ADN cu secvene nalt repetitive; ADN cu secvene mediu repetitive.

1. ADN-ul cu secvene unice

include secvenele genelor structurale i secvenele cu rol de reglaj (promotor, operator, terminator). Este reprezentat de ADN ce renatureaz cel mai ncet aceste secvene compun n ntregime genoamele virusurilor i ale procariotelor, n timp ce la alte specii ele reprezint diferite procente din genomul total: 50% - om; 38% - arici de mare; 70% - Drosophila melanogaster.

2. ADN-ul cu secvene nalt repetitive

Secvenele sunt foarte scurte, aezate n blocuri care se repet n tandem sau grupuri, de la 100.000 la 1.000.000. reprezint 5 - 45% din genomul eucariotelor: ADN satelit (din regiunile telomerice i a centromerului)

Dup numrul perechilor de baze care compun monomerii, putem avea urmtoarele trei categorii de ADN: ADN satelit, cuprinznd monomerii alctuii din mii de perechi de baze; minisateliii, cuprinznd monomerii formai din cteva sute de perechi de baze; microsateliii, al cror monomer este alctuit din 1- 6 perechi de baze, nalt repetate n tandem.

Microsateliii i minisateliii - utilizare

stabilirea amprentei genetice, Amprenta genetic sau modelul benzilor minisatelitice sau microsatelitice specific fiecrui individ din cadrul unei specii, cu excepia gemenilor monoovulari. se transmite la descendeni dup legile mendeliene. Fiecare descendent primete 1/2 din benzile de migrare de la un printe i cealalt jumtate de la cellalt printe.

3. ADN cu secvene mediu repetate

reprezint 40% din genomul eucariotelor: 12% la Drosophila melanogaster, 40% n genomul uman. ADN mediu repetat este reprezentat de uniti de baz care nu sunt asociate n tandemuri, ci sunt dispersate n ntreg genomul, n timp ce ADN nalt repetat este total tandemizat.

grupe de gene din categoria ADN mediu repetat

genele care controleaz sinteza ARNr genele care controleaz sinteza ARNt genele care controleaz sinteza histonelor. Aceste gene se gsesc ntr-un numr de 500 2000 copii/celul. elementele genetice mobile sau transpozomii, descoperii de Barbara McClintoch,n studiile provind modificrile de pigmentare a boabelor de porumb

Secvenele de inserie i transpozomii se pot insera n mijlocul unei gene pe care o inactiveaz, prin dezinserie gena i recapt activitatea. Transozomii pot determina ruperea i rearanjarea cromozomului, mutaii stabile, expresie modificat a genelor etc.