Ciclul acidului citric

Decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic

Decarboxilarea oxidativ a piruvatului are loc n matricea mitocondrial sub aciunea catalitic a complexului, multi enzimatic piruvat dehidrogenaz. -E1, piruvat dehidrogenaza cu coenzima TPP ataat prin fore coulombiene, -E2, dihidrolipoil transacetilaza cu coenzima lipoamida legat covalent i coenzima A care se acetileaz -E3, dihidrolipoil dehidrogenaza cu coenzima FAD i coenzima NAD+, cea din urm se reduce iar apoi se oxideaz n LOB De remarcat faptul c structurile complexelor decarboxilrii oxidative a altor a-cetoacizi au tot 3 enzime ce conin aceleai coenzime i catalizeaz aceleai tipuri de reacii

Ciclul acidului citric

Decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic
FAD SH OH CO2 CH3 C
-

S TPP S R

NAD

SH dihidrolipoil dehidrogenaza (E3) FAD S S R O CH3 CoA C S CoA

Hidroxietil-TPP

piruvat dihidrolipoil Degradarea unor hexoze: G, F, Gal, Man dehidrogenaza transacetilaza (E1) O CH3 C C O O
-

NADH+H

(E2)

HS HS

O TPP CH3 C S HS

Piruvat

Degradarea unor aa: Ala, Cys, Ser

R Acetil-dihidrolipoamida

Acetil-CoA

Ciclul acidului citric

Decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic

TPP E1 H3C R' N + - S E1 R C

-

H3C

O C

CH 3

CO 2

N + S E1 R C C CH 3 HO hidroxietilTPP E1

R'

O O piruvat
-

H3C

N + S E1 R C O C C CH 3

R'

O OH intermediar

Ciclul acidului citric

Decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic
H3C N + S E1 R C HO C CH 3 hidroxietilTPP E1 + Reactia 1 S

R'

H3C R HO N+

C C CH 3 S

S E1

R'

HS E2

S E2 lipoamida-E2

H3C

N + - S E1 R C + O C CH 3 S acetildihidrolipoamida-E2 HS E2

R'

Sub aciunea enzimei E1 are loc oxidarea gruprii hidroxietil pn la acetat. Cei doi electroni rezultai prin oxidare reduc puntea disulfuric la dou grupri tiol una din ele fiind esterificat cu acetat. Se regenereaz astfel TPPE1, care poate relua reacia 1.

Ciclul acidului citric

Decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic
Enzima dihidrolipoil transacetilaza (E2) catalizeaz transferul gruprii acetil de la acetildihidrolipoamidE2 la CoASH rezultnd principalul produs al procesului, acetilCoA. Energia necesar formarea tioesterului macroergic, este furnizat de oxidarea hidroxietilului.

C S HS

CH 3

CoA SH dihidrolipoamida-E2 HS HS

E2 acetildihidrolipoamida-E2 O CoA S C CH 3 acetil-CoA

E2

Ciclul acidului citric

Decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic
Dihidrolipoil dehidrogenaz (E3) care conine o legtur disulfuric reductibil la dou grupri tiol ceea ce regenereaz lipoamida-E2 care apoi poate relua reacia 2. Astfel cei doi electroni i doi protoni pot trece de la E2 la E3.

HS HS + S S E3 oxidat E2

S S + SH SH E3 redus E2

FAD

FAD

Ciclul acidului citric

Decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic
FAD SH SH FADH 2 S S
+

NAD

NADH+H

FAD S S

Reacia este catalizat tot de E3, const n trecerea electronilor i protonilor de la E3 la NAD+ prin intermediul FAD, produsul net fiind NADH +H+. Astfel, E3-FAD regenerat poate relua reacia 4.

Ciclul acidului citric

Decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic
Otrvirea complexului a-cetoacid-dehidrogenaza Arsenitul este o otrav pentru complexul Pyr-DH datorit capacitii lui de a se lega covalent la dihidrolipoamid:
-

O As

OH OH

HS + HS R

S S + 2 H2O R

O As

Conform reaciei este inhibat lipoamida-E2 din compoziia piruvat dehidrogenazei i a-cetoglutarat, dehidrogenazei. Otrvirea decarboxilrilor oxidative este de fapt inhibiia unei etape, timpurii a respiraiei celulare. Compuii pe baz de arsen sunt mai toxici fa de microorganisme dect fa de oameni. Aceast diferen a fost folosit pentru terapia unor boli cum ar fi sifilisul (care acum se trateaz actualmente cu antibiotice) i tripanozomiaze (tripanozomii sunt o familie de protozoare parazite (musca ee)). Aceti compui arseno-organici au fost printre primele antibiotice, ei prezentnd ns severe efecte secundare(apariia diferitelor tipuri de cancer (cutanat))

Ciclul acidului citric

Decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic
Controlul activitii complexului Pyr-DH Inhibiia prin produi. Acetil-CoA i NADH n exces ncetinesc reaciile acionnd direct asupra procesului de decarboxilare oxidativ. Excesul de acetil-CoA blocheaz enzima E2 prin meninerea ei n form acetilat (acetil-dihidrolipoamid-E2), incapabil s accepte gruparea hidroxietil de la hidroxietil-TPPE1 care rmne blocat n aceast form. Aceasta nseamn c sunt blocate reaciile 2 i 3. NADH n exces blocheaz enzima E3 prin meninerea ei n form redus, incapabil s accepte cei doi electroni i doi protoni de la coenzima enzimei E2 care rmne blocat sub form acetilat. Aceasta nseamn c sunt blocate reaciile 2-5. ntruct cantitatea de E1 este mic se va acumula piruvatul. Reglare prin mecanism covalent. Enzima E1 se inactiveaz cnd restul de Ser se fosforileaz cu ATP n prezena unei kinaze. Fosforilarea este activat de concentraii mari de acetil-CoA i NADH. E1 se reactiveaz sub influena unei fosforilaze care, hidrolizeaz gruparea fosfat, avnd drept stimulatori ionii de Ca i Mg, care sunt i inhibitorii kinazei care inactiveaz enzima

O piruvat CoASH + NAD

+

CH3 piruvat dehidrogenaza

COO

Ciclul acidului citric

CO2+ NADH+H
+ +

Mecanismul chimic
NAD COO HO H2O
+

O acetil-CoA COO C CH2

-

NDAH+H

CH3 H2O

CoA COO
-

CoASH

O 1.Citrat sintaza

CH2 HO C CH2 *COO citrat

-

C CH2

ntregul echipament enzimatic al ciclului citric se gsete n matricea mitocondrial cu excepia succinat dehidrogenazei care este "ngropat", n membrana intern.
7.Fumaraza COO CH COO CH2 C
-

COO L-malat

8.Malat dehidrogenaza

*COO oxaloacetat

COO

2.Aconitaza H2O

HC

COO

fumarat COO FADH2

CH

6.Succinat dehidrogenaza
-

CICLUL

*COO cis-aconitat H2O

FAD

ACIDULUI CITRIC

2.Aconitaza

COO CH2 CH2

COO CH2 C C

COO

COO succinat

5.Succinil-CoA CoASH sintetaza COO CH2 CH2 C

-

HO

H
-

3.Isocitrat dehidrogenaza
-

*COO isocitrat NAD

+

GTP

ADP+Pi

GDP+Pi

4.a-Cetoglutarat dehidrogenaza *CO2

COO CH2 C C

ATP

CoASH

COO CH2 CH2

3.Isocitrat - dehidrogenaza

COO

NADH+H

S CoA succinil-CoA NADH+H

+

O
-

C NAD
+

O
-

*COO oxalsuccinat CO2

*COO a -cetoglutarat

Ciclul acidului citric

Mecanismul chimic
O acetil-CoA

Enzima aconitaza conine un complex (4Fe-4S) . Ionul de Fe2+ joac un rol CH3 C S CoA COOdeosebit n aceast reacie, el formeaz COO- H2O CoASH cu citratul un chelat (complex intern) CH2 stabil. Acest chelat este necesar pentru C O activitatea enzimei. HO C COO CH2 citrat sintaza Doze mari de fluoruri, fac ca fluorul s CH2 reacioneze cu acidul citric, implicat n *COOoxaloacetat *COO ciclul Krebs, avnd drept urmare formarea citrat acidului monofluorocitric care nemaiputnd participa la reaciile ciclului citric, ntrerupe ciclul, deci COOCOOCOOH2O H2O producerea de CH2 CH2 CH2 energie, consecina - este moartea celulei. C COO H C COO HO C COO De asemenea acidul aconitaza aconitaza monofluorocitric este CH HO C H CH2 un inhibitor puternic *COO*COO *COO al aconitazei. citrat cis-aconitat isocitrat

Ciclul acidului citric

Mecanismul chimic
NADH+H+ NAD+ COOH isocitrat dehidrogenaza H COO CH2 C C COOO
-

COO CH2 H HO C C

COOCO2 CH2 CH2 isocitrat C O dehidrogenaza *COOa-cetoglutarat

*COOisocitrat

*COOoxalsuccinat

Exist dou izoenzime ale izocitrat dehidrogenazei. Cea implicat n ciclul citric este NAD dependent i se gsete numai n matricea mitocondrial. Cealalt este NADP dependent se gsete att n matricea mitocondrial ct i n citosol, unde produce NADPH necesar proceselor anabolice.

COO CH2 CH2 C

COOCoASH * CO2 CH2 CH2 C O

a-cetoglutarat dehidrogenaza O
-

NADH+H+ S CoA *COO NAD+ a-cetoglutarat succinil-CoA

Catalizator este complexul multienzimatic a-cetoglutarat-DH, similar complexului Pyr-DH. Acest complex este format din urmtoarele subuniti enzimatice: a-cetoglutarat dehidrogenaz (E1), dihidrolipoil transsuccinaz (E2) i dihidrolipoil dehidrogenaz (E3).

Ciclul acidului citric

Mecanismul chimic
COOCH2 CH2 C S O CoA ADP+Pi ATP succinil-CoA CoASH COOsintetaza (tiokinaza) CH2 GDP+Pi GTP CH2 COOsuccinat

succinil-CoA

COOCH2 CH2
-

COOFAD FADH2 CH HC

Enzima, succinil-CoA sintetaza se mai numete succinat tiokinaz n funcie de sensul n care este citit reacia. Se tie c la animale aceast enzim folosete GDP ca substrat. Formarea cuplat a ATP pe seama energiei eliberate prin decarboxilarea oxidativ a aCG este un exemplu de fosforilare la nivel de substrat. Fosforilarea la nivel de substrat implic enzime solubile pe cnd fosforilarea oxidativ implic enzime legate de membrana intern mitocondrial.

succinat COO dehidrogenaza COO succinat fumarat

Succinat-DH la eucariote este singura enzim a ciclului citric care este asociat adnc la membrana intern mitocondrial. Enzima conine cteva complexe [Fe-S] care intermediaz trecerea electronilor de la FADH2 la transportorii de electroni ai lanului respirator.

Ciclul acidului citric

Mecanismul chimic
COOHO C CH2 COOL-malat H COOH2 O CH HC
-

fumaraza

COO fumarat

Hidratarea fumaratului cu formare de malat este catalizat de fumaraz Fumaraza care are specificitate absolut adic ea catalizeaz hidratarea fumaratului nu i a maleatului, izomerul cis al fumaratului. n sens invers fumaraza catalizeaz numai deshidratarea L-malatului nu i a D-malatului.

COOHO C CH2

NADH+H + H NAD

COOC O

CH2 malat dehidrogenaza COOCOOL-malat oxaloacetat

Oxidarea L-malatului cu refacerea oxalacetatului (OA) este catalizat de malat dehidrogenaz. Dei aceast reacie este endergonic, ea este deplasat in vivo spre dreapta datorit ndeprtrii rapide a produilor de reacie, oxalacetatul n reacia 1 i NADH oxidat n laul respirator.

Ciclul acidului citric

Reglarea ciclului citric

Reglarea ciclului citric asigur producerea de intermediari i produi astfel nct s menin starea de echilibru a celulelor i pentru a evita supraproducia neeconomic de metabolii. Enzimele cheie ale ciclului citric sunt controlate aproape exclusiv pe 3 ci simple A. disponibilitatea substratului B. inhibiia prin acumulare de produi, C. feed back negativ competitiv Cele 3 enzime cheie: (a) citrat sintaza, (b) isocitrat dehidrogenaza, (c) a-cetoglutarat dehidrogenaza.

Ciclul acidului citric

Reglarea ciclului citric
Piruvat NADH Acetil-CoA NADH Malat Citrat Oxaloacetat

citrat sintaza

Feet back Fumarat Isocitrat NADH

izocitrat DH

Succinat GTP Succinil-CoA ATP

aCG-DH

NADH

a-Cetoglutarat

NADH Feet back

Ciclul acidului citric

Caracterul amfibolic al ciclului citric.
CO2 CO2 PEP Asp Glucoz Malat Citrat Acetil-CoA Oxaloacetat Acizi grasi , Colesterol Piruvat

Fumarat Isocitrat Asp Phe Tyr Succinat

Porfirine

Succinil-CoA

a-Cetoglutarat Glu

Ile Val Met

Ac.cu nr.impar de atomi de carbon

Ciclul acidului citric

Caracterul amfibolic al ciclului citric.
Printre reaciile anabolice se numr: - sinteza glucozei n citosol pe seama malatului - biosinteza lipidelor (acizi grai, colesterol) n citosol pornind de la acetil-CoA. Aceasta din urm poate traversa membrana mitocondrial prin interMediul navetei citrat-piruvat. Citratul mitocondrial iese n citosol iar piruvatul ptrunde n mitocondrie. Sub aciunea citrat liazei citratul se transform n acetil CoA. - biosinteza aminoacizilor utilizeaz intermediarii ciclului citric pe dou ci. aminarea reductiv a aCG catalizat de glutamat dehidrogenaza NAD+ sau NADP+ dependent: aCG+NAD(P)H+NH3 Glu +NAD(P)++H2O transaminarea la care particip aCG i oxalacetatul din rndul intermediarilor ciclului citric: aCG + AlaGlu + Pyr OA +Ala Asp + Pyr - biosinteza hemului ncepe n mitocondrie utiliznd ca material de pornire succinil-CoA.

Ciclul acidului citric

Caracterul amfibolic al ciclului citric.
Reaciile anaplerotice rencarc ciclul pornind de la precursori ne-citrici. Principala reacie anaplerotic n ficat i rinichi este carboxilarea piruvatului. Pyr + CO2 + ATP + H2O OA + ADP +Pi -piruvat carboxilaz, biotindependent n miocard i muchiul scheletic are loc reacia: PEP + CO2+ GDP OA + GTP - PEP carboxikinza O seric de ci catabolice produc intermediari ai ciclului citric printre care menionm b-oxidarea acizilor cu numr impar de atomi de carbon i degradarea valinei, izoleucinei i metioninei, care dau natere propionilCoA, care n urma a dou reacii ulterioare trece n succinil-CoA. De asemenea fenilalanina, tirozina i aspartatul se degrada dnd natere la fumarat i acetoacetat n cazul Phe i Tyr i respectiv fumarat Propionic CoA+ CO2 + ATP Succinil- CoA + ADP +Pi propionil CoA carboxilaza