CERCETAREA CRIMINALISTIC A MICROURMELOR

C7. 6 Asigurarea calitii i controlul de calitate n analizele chimice ............................................. 2 6.1 Pregtirea probei pentru analiz................................................................................................. 2 6.2 Metode de extracie, separare i preconcentrare a analiilor n urme/microurme ....................... 4 6.3 Extracia n faz lichid ............................................................................................................... 6 6.4 Extracia n faz solid................................................................................................................ 9

Lector Dr. Cecilia ARSENE Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 07 1

CERCETAREA CRIMINALISTIC A MICROURMELOR

6 Asigurarea calitii i controlul de calitate n analizele chimice 6.1 Pregtirea probei pentru analiz Procedeul de prelevare a unei probe supuse analizei este un pas crucial n orice procedur analitic i va cuprinde de cele mai multe ori: stabilirea locaiei de recoltare a probei; metodele de recoltare; curarea vaselor/dispozitivelor; omogenizarea; uscarea probei dac este cazul (filtrele cu materia suspendat total rezultat la filtrarea precipitaiilor); conservarea probei; transportul probei; stocarea probei. De multe ori ncrederea ntr-un rezultat analitic este condiionat de calitatea probei obinut n urma sampling-ului. De obicei se iau toate msurile de precauie n vederea prevenirii alterrii probei prelevate. Cu ct este mai mic concentraia analitului cu att va crete riscul ca n matricea probei, n reactivii de lucru sau n compoziia vasului de stocare s fie prezent un component care va interfera puternic n procesul de cuantificare, n mod direct sau indirect. Este foarte important ca blank-urile, materialele de referin i standardele s fie tratate exact n aceeai manier de separare i la aceleai intervale de timp ca i probele originale. Planul de efectuare a sampling-ului vizeaz aspecte precum pregtirea containerelor corespunztoare de efectuare a sampling-ului (curarea acestora) i chiar pregtirea reactivilor care vor fi adugai n vederea prevenirii alterrii probei n timpul stocrii i a transportului pn la laboratorul de analiz. Funcie de tipul analizei, mrimea i tipul probei ce vor fi colectate, se va alege i tipul de container necesar (de sticl, de plastic). Pentru probele lichide este necesar s se asigure un echilibru ntre pereii vasului de stocare i prob (proces numit echilibrare) prin cltiri repetate i energice ale vasului de stocare cu proba lichid prelevat. Vasele utilizate pentru stocare i transport trebuie s fie foarte curate, ca i instrumentele utilizate n timpul sampling-ului, pentru a nu contamina proba. Dup recoltare i stocare probele se eticheteaz de obicei cu informaii referitoare la sursa de prelevare a probelor, data i timpul la care s-a efectuat sampling-ul. Modul de efectuare a sampling-ului este deosebit de important mai ales cnd se are n vedere prevenirea contaminrii probelor prelevate prin intermediul instrumentului folosit la realizarea sampling-ului i a containerelor de stocare. De obicei, probele prelevate se eticheteaz n mod corespunztor cu informaii referitoare la sursa de prelevare a lor, data i timpul la care s-a efectuat sampling-ul, eventualii componeni de analizat. Dup prelevare, probele vor fi transportate la centrul de analiz n cel mai scurt timp posibil, deoarece exist riscul pierderii componenilor n urme, datorit absorbiei pe pereii containerului
Lector Dr. Cecilia ARSENE Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU Notie curs 07 2

CERCETAREA CRIMINALISTIC A MICROURMELOR

de stocare sau a contaminrii probei, datorit componenilor din care este confecionat containerul. Dac proba necesit o stocare pe o perioad mai mare de timp, este indicat ca aceasta s fie ngheat. Dup sampling urmeaz tratamentul fizico-chimic, analiza probei, calcularea i exprimarea rezultatelor. Calculul i exprimarea rezultatelor se face incluznd erorile ce survin n toate etapele analizei. Toate datele sunt convertite n concentraii cu ajutorul funciei de etalonare sau calibrare a sistemului analitic folosit. n timpul transportului compoziia probei poate fi modificat mai ales datorit unor reacii induse de perturbarea mecanic a vaselor de stocare. n cazul transportului ctre centrele de analiz a probelor gazoase cu ajutorul unor tuburi speciale exist riscul apariiei fenomenului de difuzie al gazelor prin materialul din care este confecionat tubul fapt care poate duce la distrugerea sau contaminarea probei. Timpul necesar transportului probei de la locul prelevrii acesteia pn la centrul de analiz prezint importan deosebit de asemeni. De multe ori exist riscul pierderii componenilor aflai n urme datorit absorbiei acestora pe pereii containerului de stocare sau a contaminrii probei datorit componenilor din materialul din care este confecionat containerul. Pentru probele solide cerinele majore cer ca probele s fie reprezentative dar, din motive economice, s nu fie mai mari dect strictul necesar (dei uneori probe de ordinul kg sau al sutelor de kg trebuie s fie luate pentru a se ndeplini condiia de reprezentativitate). n cazul probelor solide mrimea probei depinde de precizia cerut, omogenitatea materialului i de mrimea granulelor. La prelucrarea acestor probe este necesar parcurgerea unor etape precum mrunirea, cernerea i omogenizarea materialului. Fiecare din aceste operaii pot conduce la o serie de artefacte. De exemplu la mrunire se degaj cldur ceea ce poate duce la pierderea unor componeni volatili iar la cernere are loc expunerea granulelor nou rezultate la aciunea aerului care poate conduce la apariia procesului de oxidare care va afecta de exemplu starea de valen a unor elemente importante, Fe(II) i Fe(III). Pentru probele lichide importante sunt omogenitatea probelor i echilibrarea. Omogenitatea este uor de realizat n cazul unor probe mai mici iar echilibrarea, asigurarea unui echilibru ntre pereii vaselor de stocare i prob, se poate realiza prin cltiri repetate i energice ale vasului de stocare cu proba lichid sau gazoas care se preleveaz. Procesul de echilibrare este deosebit de important mai ales n cazul vaselor de stocare mici la care raportul suprafa volum este foarte mare i la care pierderea componenilor datorit procesului de adsorbie poate fi destul de mare. Metodele folosite n analize fac parte din categoria celor clasice sau a celor instrumentale. Selectarea procedeului adecvat de analiz depinde de urmtoarele criterii: - concentraia analitului din prob; - numrul probelor de analizat; - timpul care poate fi afectat pentru o analiz; - costul unei analize. Metodele analitice care se folosesc n analizele de mediu sunt prezentate n Tabelul 6.1. Metodele de analiz pot fi privite ca metode specifice, selective sau universale. Metodele specifice

Lector Dr. Cecilia ARSENE Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 07 3

CERCETAREA CRIMINALISTIC A MICROURMELOR

dau rspuns numai pentru un analit i rezultatul obinut prin aplicarea acestor metode nu este afectat de prezena interferenilor.
Tabelul 6.1: Metode analitice, principiile lor i aplicaii tipice pentru analizele de mediu. Metoda Titrimetrie Principiu Adugarea unei soluii standard la o prob pn cnd reacia este complet aa cum indic modificarea de culoare a indicatorului adugat. Permite determinri de concentraii >1 mg L-1. Precipitarea analitului dintr-o soluie i cntrirea reziduului dup calcinare Interacia radiaiei electromagnetice cu proba Sub-domenii Neutralizare Precipitare Complexare Reducere/oxidare Aplicaii Alcalinitate/aciditate Cloruri Duritate Oxigen dizolvat

Gravimetrie Spectroscopie

Sulfat, Cloruri UV/visible Infrarou (IR) Absorbia atomic sau emisia atomic Cromatografia de gaze (GC) Cromatografie ionic (IC) Electrozi ion selectivi Voltametrie Fe n ap, SO2 n aer, O3 n aer Oxidani din aer Metale n urme (Pb, Cu, Cd, Zn) Pesticide Hidrocarburi n aer Ioni n soluie (Cl-, SO42-, NO3-) pH, fluoruri Metale n urme (Pb, Cd, Cu)

Cromatografia

Separarea compuilor dintr-un amestec odat cu trecerea lor printr-o coloan Msurarea unor proprieti electrice

Electrochimice

6.2 Metode de extracie, separare i preconcentrare a analiilor n urme/microurme Dei multe din probele prelevate pot fi analizate direct, de multe ori se prefer ca acestea s fie preparate n mod adecvat pentru analiz. Metodele de tratament pentru probe depind de tipul de prob, analitul de determinat i metoda analitic de folosit. Scopurile pregtirii probelor includ: Trecerea probei i a analitului ntr-o form potrivit pentru metoda aleas. Eliminarea substanelor interferente. Concentrarea probei.

Metodele tipice de prelucrare a probelor includ: Dizolvare/Solubilizare/Mineralizare: metoda prin care o prob solid este adus n soluie nainte de a putea fi analizat de ctre cele mai multe metode. Ca si metode se cunosc: solubilizare n acizi pe baie de nisip, refluxarea, solubilizarea ultrasonic sau cu microunde. Filtrarea: procesul de filtrare a probelor pentru separarea fazei lichide (n care se poate face determinare pentru compuii solubili) de faza particulat aflat n suspensie. Extracia cu solvent: Analiii organici de obicei sunt extrai ntr-un solvent organic. Metoda poate fi folosit i pentru concentrarea probei. Alte metode de prelucrare pot include: uscarea, calcinarea, fierberea, precipitarea, complexarea, reducerea, oxidarea. Probele solide de obicei se usuc n cuptoare pentru ndeprtarea apei nainte de aplicarea oricror altor tratamente. Obinerea informaiilor analitice pentru orice sistem presupune detectarea, identificarea i analiza cantitativ a tuturor componenilor dintr-un amestec. Analiza unei probe complexe (produi
Lector Dr. Cecilia ARSENE Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU Notie curs 07 4

CERCETAREA CRIMINALISTIC A MICROURMELOR

naturali, biologici, industriali), aa cum se impune astzi chimiei analitice, nu se poate efectua prin analiza direct a componenilor n condiii de coprezen deoarece, practic, nu exist nici un reactiv al crui grad de selectivitate sa-l fac insensibil la interferene, i nici un aparat de msur, orict de perfecionat, care s nu conduc la erori la determinare. La analiza unor probe complexe, aa cum se ntlnesc foarte frecvent n practica analitic, nu se poate efectua prin urmare determinarea direct a componenilor nici chimic i nici instrumental n primul rnd din cauza interferenelor. Analiza corect a unei probe ce conine mai muli componeni impune ca naintea operaiei de msurare propriu-zis (clasic sau instrumental), s se realizeze separarea componenilor. Pentru sistemele cu grad de complexitate moderat se pot face determinri i n prezena unor interferene daca analitul de interes este transformat n forme care s nu denatureze rezultatul analizei. Pentru a se putea efectua analiza componenilor se introduc ageni selectivi de complexare pentru mascarea unor componeni sau se introduc reactivi, care s modifice starea de oxidare a unor ioni care interfer. Obiectivul poate fi atins dac, n mod auxiliar, n sistemul de interes se introduc de exemplu a) ageni specifici de complexare (pentru mascare analitic), b) reactivi care modific starea de oxidare a elementelor interferente (Ni2+, DMG, mediu NH3). Dac sunt prezeni n sistem i ioni de Fe2+ (are potenial de a complexa), se face trecerea Fe2+ la Fe3+ i apoi la [FeF6]3- de exemplu. Dac n sistem exist ionii de Fe3+ i Cr3+ pentru dozarea gravimetric a Fe3+ n mediu amoniacal, Cr3+ este oxidat la CrO42-.
oxidare complexare det (Ni2+, Fe2+) (Ni2+, Fe3+) sauprecipitarecuNH 3 (Ni2+, FeF63-) er min areindirecta Ni

Analiza corect a unei probe multicomponente impune ca naintea operaiei de msurare s se procedeze la separarea constituenilor probei pentru aducerea lor n gama analitic de determinare, la concentrarea acestora. Separarea i concentrarea au un rol foarte important n special n cazul analizei microcomponenilor, n majoritatea cazurilor de corectitudinea acestora depinznd corectitudinea determinrilor. Separarea are drept scop clasificarea unui sistem n prile sale individuale, cu obiectivul major de a realiza o fracionare pn la nivelul eliminrii interferenelor.
c1 S (sistem multicomponent) c1, c2, c3, ...., cn c2 cn

Din punct de vedere analitic separarea se definete ca un proces ipotetic de izolare a n fraciuni distincte macroscopic, fiecare fraciune cuprinznd unul din cei n componeni care constituie amestecul de analizat.

Lector Dr. Cecilia ARSENE Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 07 5

CERCETAREA CRIMINALISTIC A MICROURMELOR

Atunci cnd o metod prezint un grad de selectivitate mrit pentruun analit, scopul efecturii unei analize cantitative, calitative sau de caracterizare este mult simplificat. De exemplu, analiza cantitativ a glucozei din mierea de albine se poate realiza uor dacetoda este selectiventru glucoz, chiar i n prezena altor zaharuri reductoare, cum ar fi fructoza. Din pcate foarte puine metode sunt selective n raport cu o singur specie. n absena interferenilor, relaia de legtur ntre semnalul probei, Sprob i concentraia analitului, CA este Sprob = kACA Sprob = kACA + kICI (Eq. 1) (Eq. 2) unde kA reprezint sensibilitatea pentru analit. n prezena unui interferent, ecuaia devine unde kI i CI reprezint sensibilitatea i, respectiv, concentraia interferentului. Selectivitatea unei metode este determinat de diferena relativ ntfre sensibilitatea sa pentru analit i interferent. n cazul n care kA este mai mare dect kI, atunci metoda este mai selectiv pentru analit. Metoda va fi mai selectiv pentru interferent dac relaia invers este adevarat. Chiar dac o metod este mai selectiv pentru un interferent, aceasta poate fi folosit la determinarea concentraiei analitului n cazul n care contribuia interferentului la Sproba este nesemnificativ. Coeficientul de selectivitate KA,I reprezint o metod de caracterizare a selectivitii metodei.

K A,I =

kI kA

(Eq. 3)

Din ecuaia anterioar se afl kI care se nlocuiete n Eq. 2, obinndu-se n final Sproba = kA(CA + KA,ICI) (Eq. 4) Din relaie se observ c un interferent nu va reprezenta o problem atta timp ct produsul dintre concentraia sa i coeficientul de selectivitate vor fi semnificativ mai mici dect concentraia analitului. KA,ICI <<CA analitului de interferent. 6.3 Extracia n faz lichid Este o tehnic potrivit la analiza unui numr redus de probe, prezint probleme cu formarea emulsiilor i necesit consum mare de solveni organici. Se realizeaz n plnii de separare (Figura 6.1a) prin punerea n contact a celor dou faze. Se aplic speciilor chimice cu coeficieni de distribuie (D) mari i apropiai. Cele dou lichide sunt plasate n plnia de separare i, ulterior, se intervine cu agitare pentru a crete suprafaa zonei de contact dintre cele dou faze. Atunci cnd extracia este complet, lichidele sunt lsate pentru a se separa, cu faza mai dens localizat la partea inferioar a plniei. Extraciile lichid-lichid pot fi efectuate chiar i n containerul probei prin adugarea solvenilor de extracie atunci cnd probele sunt colectate. Sistemul, dup agitare,
Lector Dr. Cecilia ARSENE Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU Notie curs 07 6

(Eq. 5)

Atunci cnd un interferent nu poate fi ignorat, o analiz acurat trebuie s nceap cu separarea

CERCETAREA CRIMINALISTIC A MICROURMELOR

se las o perioad, cele dou faze se separ (analitul este partiionat n faza organic). Solventul este pstrat iar matricea probei este supus unor cicluri repetate de extracii. Extractele de solvent se combin n final pentru ali pai. Pesticidele n ap de exemplu, pot fi pstrate pentru perioade mai mari prin extragere ntr-un volum mic de hexan care se adaug la prob direct n cmp.

Figura 6.1.a: Plnie de separare pentru extraciile lichid-lichid.

Figura 6.1.b: Reprezentarea schematic a microextraciei lichid-lichid (LPME) cu o pictur de 1 L ataat la vrful acului seringii.

Microextracia n faz lichid (liquid phase microextraction, LPME) poate fi realizat prin extracie cu o singur pictur (single drop extraction (principiu prezentat n Figura 6.1.b) i LPME asistat de membrane. Microextraciile lichid-lichid presupun folosirea unei faze extractante care este o pictur de 1 L suspendat de vrful unei microseringi (Figura 6.1.b). Dezavantajele la aceste tip de microextracie sunt date de instabilitatea picturii (probleme la repetabilitatea extraciei) i alegerea solventului (solvenii prea volatili nu sunt potrivii iar solvenii cu puncte de fierbere mari au aplicabilitate limitat; se folosesc acetat de n-octil, alcool isoamilic, octan, nonan, etilen glicol) (Hyotylainen, T., Critical evaluation of sample pretreatment techniques, Anal. Bionala. Chem., 394, 743-758, 2009). Membranele fac sistemul LPME mult mai flexibil i fiabil. Extracia poate fi realizat n regim static sau dinamic n vasul probei care este echipat cu membrana (poate fi tip pung sau fibr). Poate fi utilizat n regim off-line i on-line dar la regimul on-line configuraia sistemului este mai complex. n modulul static eficiena la extracie este destul de bun dei adeseori nu este cantitativ. Deoarece volumul final al extrasului este mic, factorul de mbogire este mare de obicei (ceea ce nseamn c de multe ori extrasul obinut poate fi injectat direct n instrumentul analitic). Sistemele on-line au avantajul c pot crete foarte mult sensibilitatea la determinare. Are avantaje fa de extracia cu o singur pictur deoarece nltur dezavantajul legat de instabilitatea picturii i reduce consumul de solveni, evit formarea emulsiilor, funcioneaz ca un sistem de extra cleanup deoarece compuii cu mas molecular mare nu pot trece de bariera membranei. Dezavantajul tehnicii cu membran const n faptul c poate da efecte de memorie dac membranele nu sunt curate n mod adecvat i schimbate dup fiecare extracie.

Lector Dr. Cecilia ARSENE Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 07 7

CERCETAREA CRIMINALISTIC A MICROURMELOR

Tehnica extraciei lichidlichid n echicurent continuu este versiunea automat a tehnicii plniilor de separare pentru un spectru destul de larg de compui organici nevolatili i semivolatili. Se realizeaz prin punerea n contact a celor dou faze dar faza care conine agentul de extracie se introduce n sistem n regim continuu. Principiul de construcie este prezentat n Figura 6.2. Solventul este adugat n partea superioar a extractorului lichid-lichid, care conine proba apoas. La trecerea prin prob solventul extrage analitul de interes. Extractul se colecteaz ntr-un balon cu fund rotund, se fierbe i se distil, i solvent proaspt este transmis ulterior ctre partea superioar a extractorului pentru a continua procesul. Procesul ruleaz pentru 12-24 ore i este utilizat pentru situaii n care este necesar s se lucreze cu probe de dimensiuni mari dar concentraii foarte mici n analit. Extrasul coninut n balonul de fierbere este utilizat pentru ali pai analitici.

a b Figura 6.2: Schema pentru extracia continu lichid-lichid cu solvent mai puin dens (a) i mai dens (b) dect proba de analizat.

O alt cale o poate constitui folosirea unui regim de extracie dinamic, care este un sistem care furnizeaz continuu solvent de extracie proaspt. Sistemul dinamic prezint o serie de avantaje peste sistemul clasic cum ar fi: 1) proba este continuu expus la aciunea unor poriuni proaspete de solvent de extracie astfel nct cinetica de extracie este continuu mbuntit, 2) se folosete o unitate de filtrare instalat n sistem ceea ce va conduce la eliminarea etapelor de filtrare i splare dup extracie, 3) volumele de solveni sunt mai mici dect n regimul static unde se folosete exces pentru a garanta o extracie eficient, 4) timpul de extracie este mai mic n regimul dinamic, 5) se minimizeaz pericolul de contaminare a speciilor extrase n timpul manipulrii, 6) extracia dinamic poate fi folosit i pentru analii instabili deoarece n acest mod analiii sunt imediat nlturai din sistemul de extracie i nu mai sunt susceptibili la temperaturi sau presiuni mari sau alte condiii de extracie care pot conduce la degradarea lor. O problem important n extraciile n regim dinamic const n faptul c sistemele sunt mult mai complexe. n extraciile n regim dinamic proba este pus ntr-un vas unde este amestecat cu un suport inert precum nisip marin splat. Suportul inert este de asemenea folosit pentru a umple volumul mort al vasului. Unele matrici de probe se pot comporta neateptat n extraciile n regim dinamic i pot conduce la situaii care blocheaz n totalitate sistemul. Pot fi ntlnite situaii n care
Lector Dr. Cecilia ARSENE Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU Notie curs 07 8

CERCETAREA CRIMINALISTIC A MICROURMELOR

probe de sedimente formeaz dopuri de argil, blocnd ntreg sistemul ntr-o manier n care chiar i la presiuni foarte mari (>200 bari) apa nu pote fi trecut prin sistem (Hyotilainen, 2009). 6.4 Extracia n faz solid Extracia n faz solid (solid phase extraction, SPE) este una din cele mai utilizate tehnici de chimitii analiti pentru cleanup i concentrarea probei (Majors, R.E., New design and formats in solid-phase extraction sample preparation, LCGC, 19, 678-687). SPE este potrivit pentru analii nepolari i polari cu volatilitate diferit n probele lichide. Tehnica izoleaz analitul n baza aceluiai principiu ca la cromatografie dei cu eficien mult mai mic. ntr-o extracie n faz solid proba este trecut printr-un cartu care conine particule solide care servesc ca i sistem de adsorbie. Pentru probele lichide adsorbentul solid este izolat ntr-un cartu disc sau coloan (Figura 6.3).

Figura 6.3.a,b: Cartue de extracie n faz solid tip disc (a) i cartu (b).

La cartue se folosesc frite la ambele capete ale umpluturii n timp ce la sistemul disc acesta apare mai degrab ca un filtru membranar. O scdere a raportului discului lungime-diametru va permite o cretere a debitului i a vitezelor de extracie comparativ cu sistemele tip cartu. n Figura 6.4 este reprezentat schematic procesul de extracie n faz solid. Sunt prezentate trei particule poroase pentru SPE cu diametrul dp. La captul particulelor i a cavitilor exist o faz staionar legat cu grosimea d. Analiii reprezentai prin picturi de diferite forme se distribuie ntre fazele staionar i mobil. n faza mobil aceti analii se deplaseaz de sus n jos cu viteza v. n faza staionar analiii nu se deplaseaz pn cnd nu difuzeaz din nou n faza mobil. Analitul care se reine cel mai puin (cerc plin) se deplaseaz cel mai uor prin coloan i petrece o fracie mai mare de timp n faza mobil.

Lector Dr. Cecilia ARSENE Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 07 9

CERCETAREA CRIMINALISTIC A MICROURMELOR

Figura 6.4: Prezentarea grafic a extraciei n faz solid.

Schema prezentat n Figura 6.5 arat etapele unei extracii n faz solid. Compuii sunt reinui i eluai dup cum faza mobil i transport prin faza staionar (sorbent) care a fost condiionat n prealabil cu un solvent organic pentru a fi activat. n cele mai multe aplicaii faza mobil este proba apoas care permite reinerea analiilor pe sorbent. Etapa este urmat de folosirea unui solvent de solubilizare ca faz mobil pentru a elua analitul reinut pe sorbent i care este colectat pentru alte analize.

Figura 6.5: Etapele unei extracii n faz solid:a) condiionarea sorbentului, b) trecerea probei, c) splarea prin care analitul este reinut pe sorbent i interferenii sunt nlturai n rezervorul de colectare, d) eluaia, prin care analitul (analii) este/sunt nlturai cu un solvent puternic.

Alegerea adsorbentului este determinat de proprietile speciilor care se rein i matricea n care se afl acestea. n situaia n care produsele farmaceutice care ar ajunge n apele din mediu ar constitui analiii de interes din matricea vizat se tie c, deoarece concentraille speciilor de interes sunt mult prea mici, ar fi nevoie de parcurgerea unor etape de preconcentrare i cleanup nainte ca proba s fie injectat n sistemul gaz cromatografic. O procedur potrivit o reprezint extracia acestor produse prin intermediul sorbenilor solizi, procedura de extracie avnd la baz stabilirea unor echilibre multiple ntre faza lichid i faza solid aflat ntr-un cartu mic (SPE) sau a unui singur echilibru (extracia prin sorbie). Produsele farmaceutice de o anumit hidrofobicitate pot fi uor preconcentrate pe materiale cu faze inversate precum silice modificat cu alchil sau materiale pe baz de polimeri. Deprotonarea compuilor acizi sau protonarea celor bazici ar trebui inhibate pe ct posibil pentru a asigura hidrofobicitate suficient pentru analii. De aceea, produsele farmaceutice ar trebui preconcentrate
Lector Dr. Cecilia ARSENE Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU Notie curs 07 10

CERCETAREA CRIMINALISTIC A MICROURMELOR

n condiii acide, n timp ce analiii bazici ar trebui preconcentrai n medii bazice. Materialele mixte (prezint faz inversat dar i proprieti de schimb ionic datorit prezenei de exemplu a gruprilor acidului metan sulfonic pe suprafaa hidrofob a particulelor) ar putea fi folosite. n probe acidifiate, analiii acizi i neutri se vor extrage n baza interaciilor hidrofobe n timp ce analiii bazici vor interaciona prin mecansimul bazat pe schimbul ionic. Unele produse farmaceutice au proprieti hidrofile ceea ce face ca extracia lor dintr-un mediu s fie foarte dificil dac se folosesc materiale convenionale de silice modificat cu alchil. Procedurile de extracie a compuilor polari ridic probleme chiar i n prezent (Buchberger, 2007). S-au dezvoltat totui materiale care mbuntesc retenia analiilor polari. Aceste materiale sunt sorbeni polimerici care mbuntesc retenia compuilor polari fie prin grupri funcionale noi n structura polimerului (material cu bilan ntre hidrofilicitate i hidrofobicitate) sau prin creterea considerabil a dimensiunii materialului folosit. Exist indicaii clare c Oasis-HLB (copolimerul divinilbenzenului cu vinilpirolidon) poate fi folosit pentru extracia simultan a produselor farmaceutice acide, neutre i bazice la un pH neutru. Exist studii conform crora rinile de poli(stiren/divinilbenzen) ntlnite cu numele de H2Ophilic DVB sau H2Ophobic DVB dau rezultate bune la recuperarea antidepresivelor deversate n ape reziduale sau de suprafa. De asemenea, de exemplu, o serie de sedative precum secobarbital i fenobarbital pot fi izolate din ser prin extracie n faz solid folosind un adsorbent solid C18. Aproximativ 500 L prob de ser se trec prin cartu, iar sedativele se rein prin extracie lichid-solid. Cartuul este splat ulterior cu ap pentru a ndeprta urmele reziduale din matricea serului. n final, seativele reinute sunt eluate de pe coloan prin extracie solid-lichid folosind 500 L aceton. Pentru muli analii extraciile n faz solid nlocuiesc extraciile lichid-lichid deoarece sunt uor de folosit, timpii de extracie sunt mai scuri, scad volumul de solveni i au o capacitate mbuntit de a concentra analitul (Harvey, 2000). SPE pentru produse farmaceutice poate fi aplicat off-line (on-line sampling cu efectuarea etapei de preconcentrare n cmp i etap de eluie n laborator) dar i on-line (conectare la o valv de injecie n loc de a efectua injecia prin bucla sistemului). S-au dezvoltat i microextracii n faz solid (SPME). O fibr de silice topit este localizat n acul unei microseringi. Fibra care este acoperit cu un film organic subire (poli(dimetil siloxan)) este imersat n prob i prin aciunea asupra unui piston fibra ajunge s fie n contact cu proba pentru o perioad de timp. Fibra este apoi retras n ac i transferat de exemplu n gaz cromatograf. La SPME exist i posibilitate de automatizare cu injectare direct n GC dar apar o serie de riscuri legate de nenlturarea n totalitate a apei care poate ajunge n GC. La metodele SPME, extracia este cantitativ i deoarece volumul de eluie este mic (10 -50 L) nu este nevoie de reconcentrare prin evaporare. SPME poate fi folosit la analiza unor compui organici volatili din probe lichide i solide, incluznd ap, ser, plasm, urin, buturi. Probele de plasm pot crea probleme deoarece conduc la scderea recuperrii extraciei iar compuii cu mas molecular

Lector Dr. Cecilia ARSENE Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 07 11

CERCETAREA CRIMINALISTIC A MICROURMELOR

mare (proteine) pot fi adsorbii ireversibil n faza sorbentului, ceea ce va conduce la o modificare a proprietilor fazei staionare care va deveni de nefolosit (Hyoitilainen, 2009). SPME este mai simpl dect SBSE deoarece aceasta necesit o interfa cu o unitate de desorbie termic. SBSE este mai potrivit dect SPME pentru msurtori n cmp deoarece fibrele de la SPME sunt foarte fragile. SBSE conduce la recuperri i sensibiliti mai bune. SBSE necesit n orice caz timpi de lucru mai mari. Ambele tehnici sunt de folos acolo unde volumul de prob este limitat n extraciile gaz-solid, proba este trecut printr-un container umplut cu un adsorbent solid. Un exemplu de aplicaie pentru extraciile gaz-solid l constituie analiza compuilor organici pentru carbon i hidrogen. Proba este trecut printr-o serie de adsorbeni n faz solid pentru ndeprtarea CO2 i a H2O. SPME i SBSE au la baz procese de extracie bazate pe stabilirea unui singur echilibru de partiie ntre proba apoas i sorbentul solid (a se vedea i informaiile de la Seciunea 3.5.3). Pe lng PDMS ca materiale de sorbie se pot folosi poliacrilai, copolimeri ai PDMS cu divinilbenzen, copolimeri ai polietilenglicolului cu divinilbenzen, amestecuri de carboxen (adsorbent anorganic) cu PDMS sau divinilbenzen. Eficiena extraciei pe faz de PDMS se mbuntete odat cu creterea hidrofobicitii analitului. Pentru a extinde aplicabilitatea extraciei ctre compui mai polari poate fi avantajos ca analitul s fie derivatizat fie n soluie apoas nainte de extracie sau direct n faza sorbentului. Derivatizarea n soluii apoase ridic probleme deoarece cei mai muli reactivi de derivatizare necesit condiii neapoase. Dac se consider echilibrul de partiie dintre analitul din faza apoas i sorbent, cantitatea de analit n sorbent, n, poate fi calculat folosind legea conservrii maselor (Buchberger, 2007):

n=

K e Ve Vs 0 cs K e Ve + Vs

Unde: Ve este volumul sorbentului Vs este volumul probei, c 0 este concentraia iniial a analitului n prob i Ke este coeficientul de s partiie

Ke =

ce cs

unde ce i cs reprezint concentraiile la echilibru ale analitului n sorbent i faza apoas. A se observa c ecuaia pentru n neglijeaz posibilele echilibre suplimentare de partiie a analitului ntre fazele apoas i solid sau de material organic dizolvat.

Lector Dr. Cecilia ARSENE Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 07 12