CURS VI

Oxitocina i bradikinina 9 aminoacizi diferii (aceiai) legai n secvene diferite funciile biologice sunt total diferite. Polipeptidele naturale mai mari, pot ndeplini aceeai funcie n specii diferite fr a fi identice n structura lor primar

insulina
hormonul care regleaz metabolismul hidrailor de carbon difer la diverse specii prin al 4-lea amino acid din cei 51prin structura primar a polipeptidelor se nelege secvena aminoacizilor (succesiunea lor) ex. gly-gly-ser-ala

structura secundar
Atomii de carbon chirali din poziia au substituenii H i R de o parte si de cealalt a catenei Atomii de hidrogen legai de azotul amidic pot forma legturi de hidrogen intra- sau intermoleculare Polipeptidele nu au o structur liniar ci adopt forme plisate sau spiralate n acest din urm caz catena polipeptidic este ncolcit n form de spiral sau elice, numit de Pauling i Corey elice ( helix) resturile R sunt orientate spre exteriorul elicei format din resturile polipeptidice plane astfel nct s permit formarea legturilor de hidrogen intramoleculare ntre spirale structuri teriare ntr-o elice cu caten mai lung se stabilesc i legturi slabe ntre resturile R provocnd ncolciri meninute rigid Legturile pot fi : - de tip van der Waals - de hidrogen - legturi covalente S - S - de natur electrostatic ( H3N+ i COO - ) Prin asocierea mai multor structuri teriare rezult agregate complexe formate din mai multe tipuri de helixuri uneori combinate i cu alte molecule structura cuaternar reprezint conformaiile rezultate din asocierea intermolecular a helixurilor diferite

Peptidele inferioare au :
proprieti asemntoare cu aminoacizii uor solubile n ap insolubile n alcool au caracter amfoter i au puncte izoelectrice caracteristice Proteinele pot fi : - solubile n ap sau soluii de electrolii dintre proteinele solubile menionm: - albuminele - solubile n ap - globulinele - solubile n soluii de electrolii - insolubile Proteinele insolubile sunt cele fibroase sau de schelet dintre proteinele insolubile menionm cele din organismul animal n pr (keratine) n tendoane i esuturi conjunctive colagen, elastin n mtasea natural (fibroina)
proteinele fibroase nu sunt digerate de enzimele implicate n digestie i nu au valoare nutritiv n majoritatea proteinelor fibroase exist puni S - S

Denaturarea proteinelor
Const n modificarea structurii cuaternare i teriare sub influena diverilor factori exteriori denaturrile pot fi : - reversibile (modificri de pH ) cnd schimbrile conformaionale nu sunt prea profunde i proteina denaturat poate reveni la starea iniial(renaturare) refcndu-se n acelai timp i eventuala activitate fiziologic - ireversibile sub influena pH-ului, a radiaiilor UV, a cldurii i solvenilor(transformarea albuminei din albuul de ou la nclzire, ntr-o protein insolubil) proteinele cu activitate fiziologic o pierd prin denaturare (vezi enzime, hormoni, anticorpi). Fritz Haber a luat premiul Nobel n 1918 pentru sinteza amoniacului din elemente considerat tatl armelor chimice - a fost coordonatorul programului german de producere a substanelor toxice de lupt a utilizat n premier clorul

pe front (gaz mutar) asupra proteinelor o reacie de alchilare a proteinelor

aciunea iperitei

cu ajutorul ,' - diclor-dietiltioeterului (iperit) folosit pentru prima dat de armata german n iulie (sept.?) 1917 la Ypres (Belgia)

practic inodor (slab miros de mutar sau hrean) produce efecte dup 12 ore intrat n sol, rmne activ timp de cteva sptmni aciune iritant a iperitei asupra pielii i mucoaselor cca. 400 000 de victime

spontan, are loc n tioeter o reacie SN2 intramolecular, cu formarea unei cloruri de sulfoniu deosebit de reactiv datorit activrii induse de prezena ciclului de 3 atomi clorura reacioneaz imediat cu un nucleofil care poate fi o grupare - NH2 dintr-o molecul de lizin aparinnd unei proteine proteina se alchileaz

DETERMINAREA STRUCTURII PEPTIDELOR Primii pai n determinarea structurii primare a peptidelor sunt: -hidroliza lor la aminoacizi, -estimarea lor calitativ (care aminoacizi) i cantitativ (ct %). procedura este complet automatizat nainte de hidroliz, peptida sau proteina trebuie purificattrebuiesc rupte punile disulfidice acest lucru se realizeaz prin oxidare la acizi sulfonici

R1

R2

R1

SO3H

R2

SO3H

purificarea fragmentelor se realizeaz prin tehnici cromatografice - dializ - filtrare pe gel - electroforez - cromatografie de afinitate .a.

Peptidele sunt hidrolizate cu HCl 6N la 105 - 110 oC mediul bazic nu poate fi folosit din cauza racemizrilor care pot avea loc la atomii de C amestecul de aminoacizi obinut n urma hidrolizei se separ i se analizeaz n "analizorul de aminoacizi este trecut printr-o coloan cu schimbtori de ioni acizi (pH 5,3)pentru aminoacizii bazici, amoniac i triptofan, i apoi prin alta, meninut la pH 3,25 pentru ceilali aminoacizi, o soluie tampon citrat va elua aminoacizii, soluiile eluate fiind amestecate cu ninhidrin i nclzite dup identificarea i dozarea aminoacizilor, etapa urmtoare o constituie determinarea secvenei lor de legare n peptid

determinarea aminoacizilor N - terminali poate avea loc cu Sau fr hidroliza peptidei 1. metoda Sanger reacia cu 1-fluoro-2,4-dinitrobenzenului i hidroliza ulterioar a peptidei

un procedeu alternativ pentru determinarea aminoacidului N terminal care nu are loc cu hidroliza peptidei poart numele de degradare Edmann peptida reacioneaz cu fenilizotiocianat pentru a da un N feniltiocarbamil-derivat

la tratarea acestuia cu HCl n nitrometan sau acid acetic se formeaz un derivat de tiohidantoin fr ca celelalte legturi din peptid s fie afectate

se poate apela, n prealabil, i la oscindare enzimaticare avantajul c este foarte selectiv unele enzime vor scinda, de ex. numai anumite legturi carboxilice ale unor aminoacizi
Identificarea extremitii C terminale peptida se poate nclzi cu hidrazin anhidr pentru a nlocui legturile amidice cu grupri hidrazidice

aminoacidul terminal este identificat ca acid liber, pe cnd ceilali ca hidrazide