Ciclul Krebs (ciclul acizilor tricarboxilici, ciclul acidului citric) Ciclul acizilor tricarboxilici reprezint o succesiune de reacii prin

parcurgerea creia fragmentul acetil CoA este oxidat pn la dioxid de carbon. Etapele ciclului au fost postulate i demonstrate ulterior de ctre Hans Krebs care, cu civa ani nainte, elucidase etapele procesului de ureogenez. Cele dou molecule de dioxid de carbon care se formeaz la fiecare tur al ciclului rezult prin scindarea restului acetil din acetil CoA. Funcionarea continu a ciclului Krebs este condiionat de reoxidarea celor trei molecule de NADH i FADH2 n lanul respirator, cu producerea de ATP. La nivelul mitocondriilor, pentru fiecare molecul de NADH se formeaz trei molecule de ATP, iar un mol de FADH2 genereaz doi moli de ATP. Ciclul acizilor tricarboxilici este strict aerob, n timp ce glicoliza se poate desfura att n condiii aerobe ct i anaerobe. Bilanul energetic al ciclului Krebs arat c prin degradarea restului acetil pe aceast cale se formeaz 12 moli de ATP.

Fig. 12. Schema general a ciclului acizilor tricarboxilici

Catena respiratorie Oxidarea substanelor organice n celula vie se realizeaz prin dehidrogenare.. Procesul de transfer al protonilor i electronilor de la substratele supuse oxidrii spre O2 se

numete respiraie i este catalizat de o serie de oxidoreductaze (dehidrogenaze nicotinamiddinucleotidice, dehidrogenaze flavinice i citocromi - proteine transportoare de electroni -). Totalitatea acestor enzime formeaz aa numita caten respiratorie care are structur de tip cascad ce permite eliberarea treptat a energiei libere. Aceast energie liber se acumuleaz parial n legturile chimice macroergice ale ATP. Transferul protonilor i electronilor prin catena respiratorie spre O2 are loc cu o scdere mare a energiei libere, care parial se pierde sub form de cldur, parial se acumuleaz n legturile chimice macroergice ale ATP. Sinteza ATP din ADP i acid fosforic cu ajutorul energiei procesului de oxidare biologic se numete fosforilare oxidativ. II.2. Metabolismul lipidelor Lipidele se disting prin eterogenitate structural i funcional ceea ce determin o mare diversitate de ci metabolice de degradare i biosintez. II.2.1. Metabolismul triacilglicerolilor Biosinteza triacilglicerolilor Acest proces biosintetic poate utiliza n calitate de precursori glicerolul i acizii grai preexisteni, adic rezultai n urma hidrolizei lipidelor sau se poate realiza de novo prin utilizarea unor produi intermediari ai metabolismului glucidic.

Atunci cnd acizii grai rezultai prin hidroliza lipidelor sunt insuficieni, ei se sintetizeaz prin utilizarea n calitate de precursori a acetil CoA.

Catabolismul triacilglicerolilor Triacilglicerolii (trigliceridele) ca form de depozitare a excesului caloric al organismului se gsesc n cantiti apreciabile n esutul adipos. Un adult normal (brbat de 40 de ani i 70 de kg) cuprinde 15 kg esut adipos (135 kilocalorii). Energia potenial a acilglicerolilor este cuprins n catenele bogate n hidrogen ale resturilor acil. n esuturi catabolismul triacilglicerolilor are loc n etape, pn la formarea de glicerol i acizi grai corespunztori care se absorb la nivelul peretelui intestinal. Procesul este catalizat de ctre lipaz, enzim ntlnit att la plante, microorganisme ct i n esuturile animale. La animale lipidele sunt mai nti emulsionate sub aciunea srurilor biliare din bil ceea ce determin creterea suprafeei de contact dintre cele dou faze.

II.2.2. Metabolismul glicerolului Glicerolul este component al gliceridelor i fosfogliceridelor. Liber se formeaz prin hidroliza tisular a trigliceridelor. Pentru ca glicerolul s reintre n fluxul metabolic el este mai nti fosforilat la glicerol fosfat sub aciunea glicerol kinazei.

Aceast enzim este foarte activ n ficat, dar este practic absent n adipocite. Glicerolul format n esutul adipos difuzeaz n plasm de unde este captat de ficat care l utilizeaz dup conversie n glicerol fosfat. Glicerol fosfatul mai poate fi obinut din glucoz, din intermediarul glicolitic dihidroxiaceton fosfat, prin reacia reversibil:

Dup condiiile specifice fiecrui esut, glicerol fosfatul poate evalua pe urmtoarele ci metabolice: poate fi transformat n trigliceride sau fosfogliceride;

 dup conversia sa ntr-un triozofosfat (dihidroxiaceton fosfat i 3 gliceraldehid fosfatul) poate urma calea glicolitic degradativ i apoi oxidare complet la dioxid de carbon i ap; ca triozofosfat poate fi substrat gluconeogenetic. II.2.3. Metabolismul acizilor grai Degradarea acizilor grai se face pe mai multe ci. Cea mai important este -oxidarea care reprezint procesul de degradare complet cu formare de dioxid de carbon, ap i energie. Aceast cale de degradare a fost postulat prima dat n 1904 de ctre Franz Knopp. Hrnind animalele de experien cu fenil derivai ai acizilor carboxilici cu pn la cinci atomi de carbon n molecul, autorul studiaz metabolismul acestor substane urmrind produii ce apar n urin. El constat c derivaii cu numr impar de atomi de carbon au fost oxidai la acid benzoic, iar cei cu numr par de atomi de carbon dau acid fenil acetic. Din aceste experimente Knopp trage concluzia c degradarea acizilor grai are loc cu desprinderea treptat a unor fragmente cu doi atomi de carbon. Mecanismul -oxidrii a fost clarificat cu aproape jumtate de secol mai trziu cnd Lynen reuete s izoleze din drojdii acetil CoA. El conchide c degradarea acizilor grai prin -oxidare se realizeaz prin clivarea unor fragmente cu doi atomi de carbon sub form de acetil CoA. Procesul -oxidrii acizilor grai se realizeaz n mai multe etape. Prima etap o reprezint activarea acizilor grai prin formarea unor compleci cu CoA. Reacia de activare este catalizat de enzime specifice numite tiokinaze sau acil CoA sintetaze. La rndul ei, etapa de activare cuprinde dou faze: mai nti acidul gras interacioneaz cu ATP ul formnd un produs intermediar acil - adenilatul. Dup etapa de activare, complecii acil CoA astfel formai ptrund n mitocondrii unde se realizeaz degradarea propriu-zis. Transformrile ce urmeaz sunt ciclice, la fiecare ciclu desprinzndu-se cte doi atomi de carbon sub form de acetil CoA, iar noul acil CoA ce este mai scurt deci cu doi atomi de carbon, reia un nou ciclu de transformri.

Fig. 13. Schema general a -oxidrii acizilor grai II.3. Metabolismul aminoacizilor II.3.1. Ci comune de degradare a aminoacizilor Aminoacizii sintetizai n celulele vii sunt folosii pentru biosinteza de proteine specifice organismelor respective, de enzime i de hormoni de natur polipeptidic i proteic sau pot fi metabolizai cu formarea unor compui intermediari utilizai la rndul lor n sinteza bazelor azotate sau a altor compui.

Alanin Cistein Cistin Glicocol Serin Treonin Hidroxiprolin Leucin Lizin Triptofan Acetoacetil-CoA Fenilalanin Tirozin Izoleucin Arginin Citrulin Histidin Ornitin Prolin Izoleucin Metionin Valin GABA Asparagin Acid aspartic

Piruvat

Acetil-CoA Citrat -Cetoglutarat Ciclul Succinil-CoA Succinat Fumarat Oxaloacetat Krebs

Acid glutamic

Fig.14. Reprezentarea schematic a cilor de degradare ale scheletelor hidrocarbonate ale aminoacizilor (Lentner, C. 1986) Ei pot suferi de asemenea o degradare oxidativ complet i n acest caz servesc ca surs energetic. O serie de reacii de degradare sunt comune tuturor aminoacizilor, iar restul hidrocarbonat se degradeaz apoi pe ci diferite, specifice fiecrui aminoacid. Principalele ci comune de degradare a aminoacizilor sunt dezaminarea, decarboxilarea i transaminarea, iar pentru unii dintre ei transmetilarea i transamidinarea.

II.3.1.1. Dezaminarea aminoacizilor Procesul de dezaminare reprezint procesul de eliminare a gruprii aminice sub form de amoniac cu formarea acizilor corespunztori, adic a -cetoacizilor, -hidroxiacizilor,

acizilor carboxilici saturai i nesaturai etc. Produii rezultai n urma dezaminrii aminoacizilor sunt apoi metabolizai n celul, fiind utilizai, fie n procese de biosintez a altor constitueni celulari, fie c sunt degradai n scopul formrii energiei necesare ntreinerii proceselor biochimice n funcie de natura enzimelor ce catalizeaz aceste procese i de structura chimic a produilor formai, dezaminarea aminoacizilor poate fi reductiv, hidrolitic, oxidativ sau desaturant. a) Dezaminarea reductiv are loc atunci cnd aminoacidul este transformat n acidul carboxilic corespunztor cu eliberare de amoniac, donorul hidrogenului necesar reducerii fiind NADH-ul. Aminoacizii se dezamineaz reductiv sub aciunea aminoacid-reductazelor specifice NADH-dependente:

R CH COOH I NH 2 Aminoacid

NADH+H

NAD

R CH 2 COOH Acid carboxilic

NH

Aminoacid-reductaza

b) Dezaminarea hidrolitic realizeaz nlturarea azotului aminic sub form de amoniac cu formarea -hidroxiacidului corespunztor:

H2O R CH COOH I NH2 Aminoacid-hidrolaza Aminoacid

R CH COOH I OH Hidroxiacid

NH 3

c) Dezaminarea oxidativ a aminoacizilor const n eliminarea azotului aminic sub form de amoniac cu formarea -cetoacidului corespunztor, sub aciunea aminoacidoxidazelor specifice:

R CH COOH I NH2 Aminoacid

1/2O2 Aminoacid-oxidaza

R C COOH II O Cetoacid

NH 3

La animalele superioare i n organismul uman predomin dezaminarea aminoacizilor pe cale oxidativ. Acest lucru a fost demonstrat prin cercetrile efectuate de Krebs, Green i alii care au stabilit c n aceste organisme (n special n ficat, rinichi, creier etc.), dar i n

plantele superioare, unele bacterii, veninul de arpe etc., se ntlnesc aminoacid-oxidazele ce catalizeaz dezaminarea oxidativ att a L-aminoacizilor ct i a D-aminoacizilor. Enzimele ce acioneaz asupra aminoacizilor din seria L se mai numesc i aminoacid-dehidrogenazedezaminante i sunt NAD+ sau NADP+dependente. Ele sunt incluse n subclasa E.C.1.4. care cuprinde dehidrogenazele aminoacizilor i aminooxidazele. mprirea n subsubclase se face n funcie de natura acceptorului: NAD+ pentru E.C.1.4.1., NADP+ pentru E.C.1.4.2., oxigenul pentru E.C.1.4.3., diferii compui disulfidici pentru E.C.1.4.4. etc. n organismele animale este foarte activ glutamat-dehidrogenaza pentru care acceptorul echivalenilor reductori este NAD+-ul:

COOH I CH 2 I CH 2 I CH NH 2 I COOH Acid glutamic

H2O

NAD

NADH+H

Glutamat-dehidrogenaza

COOH I CH 2 I CH 2 I C=O I COOH

NH 3

Acid -ceto-glutaric

Reacia de dezaminare oxidativ decurge n dou etape. n prima faz are loc un proces de dehidrogenare a aminoacidului cu formarea -iminoacidului corespunztor. n aceast etap acceptorul de hidrogen este FAD-ul n calitatea sa de coenzim a aminoacidoxidazei, dar care joac n aceast reacie i rol de cosubstrat. n etapa a II-a are loc adiionarea elementelor apei cu formarea -cetoacidului corespunztor i eliminarea amoniacului:
FAD R CH COOH I NH2 -Aminoacid FADH 2 H2O R C COOH II NH -Iminoacid NH3 R C COOH II O -Cetoacid

n numeroase organisme s-a pus n eviden faptul c n realitate exist dou categorii de flavoenzime ce catalizeaz acest proces care se deosebesc ntre ele prin natura cofactorului. Unele din ele sunt specifice L-aminoacizilor, poart numele de L-aminoacid-oxidaze, au FMN-ul drept cofactor i sunt localizate n reticulul endoplasmatic:

R CH COOH I NH 2 -Aminoacid

E-FMN

E-FMNH 2

L-aminoacid-oxidaza

R C COOH II + O -Cetoacid

NH 3

Enzimele din cealalt categorie sunt specifice D-aminoacizilor, se numesc Daminoacid-oxidaze, au drept cofactor FAD-ul i sunt localizate n microsomii hepatocitelor:

R CH COOH I NH 2 -Aminoacid

EFAD

EFADH

D-aminoacid-oxidaza

R C COOH II O -Cetoacid

NH 3

Flavin-nucleotidele reduse ale acestor oxidaze (FMNH2 i FADH2) reacioneaz direct cu oxigenul molecular cu formarea peroxidului de hidrogen care, la rndul su, este descompus de ctre catalaz n ap i oxigen. Acest proces conjugat se realizeaz n peroxisomii hepatocitelor. d) Dezaminarea desaturant este procesul prin care aminoacizii elibereaz azotul aminic sub form de amoniac cu formarea acizilor nesaturai corespunztori:

NH 3 R CH 2 CH COOH I NH 2 Aminoacid R CH = CH COOH

Acid , -nesaturat

II.3.1.2. Decarboxilarea aminoacizilor Procesul de eliminare a grupelor COOH din moleculele aminoacizilor este catalizat de enzime specifice numite aminoacid-decarboxilaze care conin n calitate de cofactor piridoxal-fosfatul. Prin decarboxilare, aminoacizii proteinogeni formeaz monoamine, diamine, - i -aminoacizi etc., n funcie de structura chimic a aminoacidului supus decarboxilrii. Reacia general de decarboxilare a aminoacizilor poate fi reprezentat astfel:

R CH COOH I NH2 -Aminoacid

CO2 Aminoacid-decarboxilaza R CH2 NH2 Amin

Aminoacizii

diaminomonocarboxilici

formeaz

prin

decarboxilare

diaminele

corespunztoare. Astfel, prin decarbo-xilarea lizinei se formeaz cadaverina, iar ornitina trece n putrescein. Aceste diamine au un miros specific, iar procesul de decarboxilare este deosebit de intens n cadavre unde se realizeaz sub aciunea decarboxilazelor din microflora de putrefacie. Mirosul specific de cadavru este datorat diaminelor care se formeaz n cantiti crescute:
CO 2 H2N (CH 2)4 CH COOH I NH 2 Lezin-decarboxilaza Lizin

H2N (CH 2)5 NH 2 Cadaverin

CO2 H2N (CH 2)3 CH COOH I NH2 Ornitin-decarboxilaza Ornitin

H2N (CH 2)4 NH 2 Putrescein

Putresceina se mai formeaz i prin decarboxilarea argininei. n acest caz se formeaz mai nti agmatina n calitate de compus intermediar, iar aceasta se descompune prin hidroliz n uree i putrescein:
CO2 H2N C NH (CH 2)3 CH COOH II I ArgininNH NH2 decarboxilaza Arginin

H2N C NH (CH 2)3 CH 2 NH 2 II NH

H2O Agmatin-ureohidrolaza

Agmatin

H2N (CH 2)4 NH 2

H2N C NH II O

Putrescein

Uree

Decarboxilarea lizinei, argininei i ornitinei se realizeaz i in vivo. Diaminele rezultate nu se acumuleaz ns ci sunt utilizate de organism n calitate de precursori n biosinteza unor poliamine biologic active cum ar fi spermina i spermidina. Acestea se ntlnesc n cantiti apreciabile n unele esuturi (ficat, pancreas, plmni etc.) i n unele microorganisme (Escherichia coli, Aspergillus nidulans etc.). Biosinteza poliaminelor mai utilizeaz n calitate de precursor, alturi de diamine i propilamina. Aceasta din urm se formeaz n organism sub form de S-adenozil-metilmercapto-propilamin prin decarboxilarea S-adenozil-metioniei:

N N

N N O + CH 2 S CH 3 I (CH 2)2 I CH NH 2 I COOH CO 2 S-Adenozil-metionindecarboxilaza

S-Adenozil-metionin
N N N O + CH2 S CH3 I (CH2)2 I CH2 NH2

S-(3'-Adenozil)-5'-metilmercaptopropilamin

Restul propilamin din S-(3-adenozil)-5-metilmercapto-propilamin se condenseaz apoi cu o molecul de putrescein cu formare de metiltioadenozin i spermidin:

N N

N N O

N + CH2 S CH 3 N I H2N(CH2)4NH2 (CH2)2 I CH2 NH2

N N O + CH2 S CH 3

S-(3'-Adenozil)-5'-metilmercaptopropilamin

Metiltioadenozin

H2N (CH2)4 NH (CH2)3 NH2

Spermidin
Pentru biosinteza sperminei se repet procesul de decarboxilare a S-

adenozilmetioninei, iar restul propilamin din S-adenozilmetil-mercapto-propilamina format se transfer pe o molecul de spermidin:

H2N (CH2)4 NH (CH2)3 NH2 Spermidin

CH2CH2CH2NH2

H2N (CH 2)3 HN (CH 2)4 NH (CH 2)3 NH 2 Spermin

Poliaminele joac roluri diverse, nc incomplet elucidate, n organismele vii. Nu este exclus ca ele s joace un rol de stabilizare a structurilor membranare i ribozomale, s ndeplineasc un rol de factor de cretere pentru unele microorganisme etc. Ele mai joac un rol important n reglarea biosintezei acizilor nucleici i proteinelor. Ali aminoacizi formeaz prin decarboxilare unele amine biologic active sau care servesc drept precursori n biosinteza unor compui biologic activi. Astfel, fenilalanina i tirozina formeaz prin decarboxilare feniletilamina i respectiv tiramina, iar histidina i acidul glutamic formeaz histamina i respectiv acidul -aminobutiric (GABA):
CO2 CH 2 CH COOH I NH 2 Fenilalanin Fenilalanindecarboxilaza CH 2 CH 2 NH 2 Feniletilamin

CO2 HO CH 2 CH COOH TirozinI NH2 decarboxilaza Tirozin HO CH 2 CH 2 NH 2 Tiramin

N N H

CH 2 CH COOH CO2 I NH 2 Histidin-decarboxilaza Histidin

N N H

CH 2 CH 2 NH 2

Histamin

CO2 HOOC CH 2 CH2 CH COOH HOOC CH 2 CH2 CH2 NH2 I NH2 Glutamat-decarboxilaza Acid glutamic Acid -aminobutiric

Majoritatea aminelor biogene ndeplinesc funcii biochimice i fiziologice bine determinate n organismele vii. Unele dintre ele se utilizeaz n practica medical datorit aciunii lor farmacodinamice deosebite. Tiramina format prin decarboxilarea tirozinei este o substan biologic activ ce manifest o aciune vasoconstrictoare, ca i triptamina rezultat prin decarboxilarea triptofanului. Tot din triptofan se formeaz i serotonina care particip la fenomenul de transmitere a fluxului nervos, la reglarea presiunii sanguine, a respiraiei, temperaturii corpului etc. Din histidin se formeaz histamina, o amin biogen cu aciune vasodilatatoare. Ea se formeaz n cantiti mari n zonele inflamate i este implicat n transmiterea senzaiei dureroase. Un neurotransmitor cu rol de inhibiie n sistemul nervos central este acidul -aminobutiric (GABA) care rezult prin decarboxilarea acidului glutamic. Tioetanolamina format prin decarboxilarea cisteinei intr n structura coenzimei A. De asemenea, ea este utilizat n practica medical n tratamentul bolii de iradiere. Cadaverina, putresceina i poliaminele (spermina i spermidina) interacioneaz n mod specific cu catenele polinucleotidice influennd conformaia spaial a acizilor nucleici. Triptofan-decarboxilaza nu prezint o specificitate strict de substrat. S-a demonstrat c aceast enzim catalizeaz att decarboxilarea triptofanului cu formare de triptamin, ct i a unor derivai ai acestuia cum ar fi 5-hidroxitriptofanul (cnd se formeaz serotonina) i 3,4dihidroxi-fenilalanina (DOPA) cu formare de DOP-amin. Aceste reacii prezint o

importan biochimic i fiziologic deosebit. Astfel, serotonina rezultat prin decarboxilarea hidroxitriptofanului este un intermediar n calea de biosintez a melatoninei n pinealocite, iar DOP-amina este un hormon din clasa catecolaminelor i servete n acelai timp drept precursor n biosinteza noradrenalinei i adrenalinei:

N H Triptofan

CO2 CH2 CH COOH I NH2 Triptofan-decarboxilaza

CH2 CH2 NH2 N H Triptamin

HO N H

HO CO2 CH2 CH COOH I NH2 Triptofan-decarboxilaza

CH2 CH2 NH2 N H 5-Hidroxitriptamin (Serotonin)

5-Hidroxitriptofan

HO

HO

CO2 CH2 CH COOH I NH2 Triptofan-decarboxilaza

HO HO

CH2 CH2 NH2

3,4-Dihidroxifenilalanin (DOPA)

Dihidroxifeniletilamin (DOP-amin)

Melatonina este sintetizat n pinealocite prin utilizarea serotoninei n calitate de precursor. Principala sa funcie biologic o constituie inhibarea activitii gonadale la mamifere:
H3C O N H Melatonin CH2 CH2 NH CO CH3

Un alt derivat rezultat prin decarboxilarea tirozinei este octopamina (4-hidroxifeniletanolamina):

HO

CH CH2 NH2 I OH Octopamin

Acest produs al degradrii pariale a tirozinei a fost identificat n glandele salivare ale octapodelor i joac un rol de pseudo-neurotransmitor. Prin decarboxilarea cisteinei sub aciunea cistein-decarboxilazei se formeaz cisteamina (tioetanolamina) care reprezint grupa funcional a coenzimei A:
CO2 CH2 CH COOH I I NH2 SH Cistein-decarboxilaza Cistein HS CH2 CH2 NH2 Tioetanolamin

Doi derivai ai cisteinei acidul cisteinic i acidul cistein-sulfinic se decarboxileaz cu o vitez relativ crescut formnd taurina i respectiv hipotaurina, acestea din urm reprezentnd precursori eseniali n biosinteza acizilor biliari:
CH 2 SO 2H I CH NH 2 I COOH Acid cistein sulfinic CO 2 CH 2 SO 2H I CH 2 NH 2

Hipotaurina

CH2 SO 3H I CH NH 2 I COOH Acid cisteinic

CO 2

CH2 SO 3H I CH2 NH 2

Taurina

Deoarece aminele rezultate prin decarboxilarea aminoacizilor manifest o aciune fiziologic important, ele au primit numele de amine biogene. Unele dintre ele prezint importante proprieti farmacodinamice (n special histamina i tiramina). Alte amine biogene ndeplinesc un important rol de precursori n biosinteza unor hormoni derivai de la aminoacizi (triptamina, serotonina, DOP-amina etc.), iar la unele plante muli alcaloizi se sintetizeaz prin utilizarea n calitate de precursori a aminelor biogene. Multe amine biogene sunt deosebit de toxice pentru organismul uman i animal, din care cauz, excesul lor n organism poate fi letal. O cantitate relativ crescut de amine biogene se poate forma prin

alterarea alimentelor de origine animal bogate n proteine, sub aciunea decarboxilazelor microorganismelor. Acest fenomen explic toxiinfeciile alimentare cauzate de consumul de preparate din carne alterat, mai ales cele din ficat i pete care sunt alimentele cele mai uor alterabile. La consumuri exagerate de proteine de origine animal, procesul de decarboxilare a aminoacizilor este deosebit de intens datorit necesitii degradrii rapide a excesului de aminoacizi. Aminele biogene formate n acest caz sub aciunea decarboxilazelor endogene pot determina apariia gutei. Formarea aminelor biogene toxice poate avea loc i n organismele vegetale. n anumite condiii nefavorabile de dezvoltare, n esuturile plantelor se acumuleaz cantiti mari de amine biogene care provoac intoxicaii. De exemplu, insuficiena potasiului n sol determin intensificarea formrii putresceinei care influeneaz nefavorabil frunzele. n condiiile unui metabolism echilibrat, organismele vii au capacitatea de a metaboliza n continuare aminele biogene toxice prin oxidarea lor sub aciunea unor enzime specifice. De exemplu, monoaminoxidazele (MAO) catalizeaz dezaminarea oxidativ a monoaminelor cu formarea aldehidelor corespunztoare, amoniacului i apei oxigenate:

R CH 2 NH 2+ O2 + H2O

Monoaminoxidaza

R C = O + NH 3 + H2O2 I H

Aceste reacii sunt cuplate de regul cu aciunea catalazei sau peroxidazei deoarece unul din produii de reacie (H2O2) este, de asemenea, toxic pentru celula vie. Oxidarea diaminelor are loc sub aciunea diaminoxidazelor specifice (DAO) i conduce la formarea amino-aldehidelor corespunztoare, amoniacului i apei oxigenate:

O2 H2O H2N (CH 2)n NH2 DAO H2N CH 2)n-1 C = O + H2O2 + NH 3 I H

Aldehidele rezultate se pot oxida n continuare cu formarea acizilor corespunztori. Datorit aciunii lor de degradare a aminelor biogene toxice, monoaminoxidazele i diaminoxidazele ndeplinesc n organismul viu o funcie extrem de important i anume cea

de detoxifiere, aceste enzime fiind la fel de rspndite ca i decarboxilazele aminoacizilor deoarece aciunea lor este conjugat. Decarboxilarea aminoacizilor poate conduce i la formarea altor compui. Astfel, prin decarboxilarea acidului glutamic sub aciunea glutamat-decarboxilazei se formeaz acidul aminobutiric (GABA) care este un important mediator al inhibiiei n sistemul nervos central. n mod similar, aspartat-decarboxilaza catalizeaz conversia acidului aspartic n -alanin, aceasta fiind o component a coenzimei A i a altor substane biologic active:

CO2 HOOC CH2 CH2 CH COOH I Glutamat-decarboxilaza NH2 Acid glutamic HOOC (CH 2)3 NH2 Acid -amino-butiric

CO2 HOOC CH 2 CH COOH I NH2 Acid aspartic HOOC (CH 2)2 NH 2 Aspartat-decarboxilaza Alanin

Prin decarboxilarea serinei sub aciunea serin-decarboxilazei se formeaz etanolamina ce poate juca rol de precursor n biosinteza fosfolipidelor (cefalinelor i lecitinelor) cnd esterific acidul L--fostadidic, fie sub form de etanolamin (colamin), fie sub form de colin. Aceasta din urm se formeaz din etanolamin prin metilare treptat, donorul de grupri metil fiind S-adenozil-metionina:

CO2 CH2 CH COOH I I OH NH2 Serin-decarboxilaza Serin

HO CH 2 CH 2 NH 2 Etanolamin (colamin)

CH3 HO CH 2 CH2 NH CH 3 Metiletanolamin

CH3

CH3 HO CH 2 CH2 N Dimetiletanolamin CH3 CH3 + HO CH 2 CH2 N Colin

CH3 CH3 CH3

n afar de rolul de neurotransmitor, n organismele animale, acetilcolina mai este implicat n procesul de dilatare a vaselor sanguine cu diminuarea corespunztoare a tensiunii arteriale. Ea mai determin totodat i peristaltismul intestinal. Colina se ntlnete att n organismele vegetale, ct i n cele animale unde intr n structura fosforil-colinei, glicerolfosforil-colinei, fosfatidil-colinei (lecitinei), plasmalogenelor i sfingomielinei. Un alt compus biologic activ, sintetizat n organismele animale prin utilizarea serinei n calitate de precursor, este carnitina (acidul 4-trimetil-3-hidroxi-butanoic):
CH3 + HOOC CH 2 CH CH 2 N CH3 I CH3 OH Carnitin

Carnitina se ntlnete n toate esuturile animale unde este implicat n metabolismul lipidelor sub forma derivailor de tip acil-carnitin. Mai exact, carnitina realizeaz transportul transmembranar al acizilor grai. II.3.1.3. Transaminarea aminoacizilor Reacia de transaminare a aminoacizilor are loc sub aciunea catalitic a aminotransferazelor (transaminazelor) i const n transferul grupei NH2 de la un aminoacid la un -cetoacid cu formarea unui nou aminoacid i a unui nou cetoacid.

NH3 NAD(P)H

-Cetoglutarat

Aspartat

H2O NAD(P)
+

Glutamat

Oxaloacetat

1 glutamat-dehidrogenaza 2 aspartat-aminotransferaza

Fig. 15. Reprezentarea schematic a cuplrii reaciilor de transaminare i dezaminare Reacia de transaminare mai poate fi considerat ca un tip special de dezaminare a aminoacizilor, ns fr formare de amoniac:

COOH COOH I I CH NH 2 + C = O I I R1 R2

Aminotransferaz

COOH I C=O + I R1

COOH I CH NH 2 I R2

Reacia de transaminare a fost pus n eviden prima dat n 1938 de ctre Braunstein i Kritzman. Ulterior s-a demonstrat c ea este larg rspndit, att n lumea vegetal ct i n cea animal. Din cei 22 aminoacizi proteinogeni, un numr de 11 sufer n mod obinuit reacii de transaminare: alanina, fenilalanina, triptofanul, tirozina, valina, arginina, acidul aspartic, asparagina, izoleucina, cisteina i lizina. Aminotransferazele ce catalizeaz aceste reacii conin n calitate de cofactor enzimatic piridoxal-fosfatul. Reaciile de transaminare sunt reacii reversibile, iar n condiii normale constanta de echilibru are o valoare apropiat de unitate. Aminotransferazele sunt localizate att intramitocondrial ct i n faza solubil a citoplasmei celulelor eucariote, iar rolul este extrem de diferit. Pe parcursul reaciei de transaminare, piridoxal 5 fosfatul (PALP) trece reversibil n pirodixamin-5-fosfat (PAMP):

HO

HC=O I CH 2 O P N

HO

CH2 NH 2 I CH 2 O P N

H3C

H3C

Piridoxal-5-fosfat (PALP)

Piridoxamin-5-fosfat (PAMP)

n lipsa substratului, gruparea aldehidic a piridoxal-fosfatului formeaz o legtur aldiminic cu grupa -amino a unui rest de lizin localizat n centrul activ al enzimei (cu care formeaz o baz Schiff). Aceasta este forma activ a aminotransferazelor ce poate lega aminoacidul care urmeaz a fi transaminat. Reacia de transaminare este alctuit din dou procese complexe diferite. n prima etap a transaminrii, gruparea aminic a aminoacidului reactant (substratul S1) sufer o reacie de condensare cu grupa aldehidic a cofactorului enzimatic, deplasnd grupa -amino a restului de lizin din centrul activ al enzimei:

HO E N = CH

CH 3 N + R1 CH COOH I NH 2 S1

CH 2 O P E

HO

CH 3 E NH 2

R1 CH N = CH N I COOH CH 2 O P ES 1 (aldimin)

Se formeaz o nou baz Schiff ntre aminoacid i piridoxal-fosfat care este o aldimin i care rmne legat de apoenzim prin legturi slabe, necovalente (ceea ce nseamn c n acest caz cofactorul enzimatic este coenzim). n etapa urmtoare are loc o izomerizare cnd legtura dubl i schimb poziia, aldimina trecnd n cetimin. Aceasta din urm, sufer apoi o reacie de hidroliz cu formarea -cetoacidului i eliberarea cofactorului sub form de piridoxamin-5-fosfat:

HO

CH3 E NH 2

R1 CH N = CH N I COOH CH2 O P ES1 (aldimin)

HO

CH3 E NH 2

R1 C = N CH 2 N I COOH CH2 O P EP1 (cetimin)

H2O R1 C COOH + II O Cetoacid

HO H2N CH 2

CH3 N E NH 2

CH2 O P E

Cealalt component a procesului de transaminare o constituie formarea noului aminoacid. n urma acestor reacii are loc totodat i regenerarea enzimei, mai exact refacerea formei aldehidice a cofactorului enzimatic. Aceast serie de transformri debuteaz prin interaciunea complexului enzimatic (apoenzim piridoxamin-5-fosfat) cu -cetoacidul reactant, care este acceptorul gruprii aminice. Se formeaz complexul ES2 sub form de cetimin, aceasta trece apoi prin izomerizare n aldimin i, n final acest complex sufer o reacie de hidroliz cu formarea aminoacidului i regenerarea enzimei active, adic a complexului apoenzim piridoxal-5fosfat (PALP). Cu alte cuvinte, succesiunea reaciilor ce au loc este invers cu cea a componentei care realizeaz conversia aminoacidului n cetoacid:

HO E NH 2 H2N CH 2

CH 3 N + R2 C COOH II O -Cetoacid

H2O

CH 2 O P E

HO R2 C = N CH I COOH
2

CH 3 N E NH 2

CH 2 O P ES 2 (Cetimin)

HO

CH3 E NH2

H2O

R2 CH N = CH N I COOH CH2 O P ES2 (Aldimin)

HO R2 CH NH I COOH -Aminoacid
2

CH 3 N

E N = CH

CH 2 O P E

Aminoacid-aminotransferazele sunt larg rspndite n esuturile vegetale i animale, precum i n microorganisme, n prezent cunoscndu-se peste 30 de aminotransferaze specifice. Unele dintre ele sunt mai intens studiate, datorit importanei lor practice. Printre acestea se numr alanin-aminotransferaza i respectiv aspartat-aminotransferaza, enzime ce catalizeaz urmtoarele reacii:

COOH COOH COOH COOH I I I I CH2 CH2 CH2 CH2 I I I I PALP CH NH2 + CH2 C = O + CH2 Aspartat-aminotransferaza I I I I COOH COOH (TGO) C=O CH NH 2 I I COOH COOH Acid aspartic Acid Acid glutamic Acid oxalilacetic -cetoglutaric

COOH I CH NH 2 + I CH 3

Alanin

COOH I PALP CH 2 I Alanin-aminotransferaza CH 2 (TGP) I C=O I COOH Acid -cetoglutaric

COOH I C=O + I CH 3

Acid piruvic

COOH I CH 2 I CH 2 I CH NH 2 I COOH Acid glutamic

Determinarea activitii acestor dou enzime n serul sanguin se efectueaz n mod curent n laboratoarele clinice pentru diagnosticul unor maladii ale ficatului i inimii. n general, aminotransferazele prezint o nalt specificitate fa de ambele substrate, avnd ns o mai mare afinitate fa de cetoacid dect fa de aminoacid (K M
aminoacid cetoacid

< KM

). Pentru metabolismul proteic, transaminarea aminoacizilor prezint o importan

deosebit deoarece aceste reacii fac parte din cile de degradare a unor aminoacizi i, n acelai timp, de biosintez a altora. Pe de alt parte, participarea -cetoacizilor face ca aceste reacii s reprezinte puncte de ntretiere ale cilor metabolismului proteic, glucidic i lipidic. n urma acestor reacii, alturi de cetoacid, se formeaz acidul glutamic care, la rndul su se poate dezamina oxidativ sau poate intra n alte ci de degradare sau biosintez. Fiind reversibil, reacia de transaminare servete la biosinteza aminoacizilor neeseniali prin utilizarea n calitate de precursori a acidului glutamic i a -cetoacizilor corespunztori. Reaciile de transaminare mai fac parte din unele secvene metabolice cum ar fi cele de biosintez a ureei, acidului -aminobutiric etc. Transamidinarea i transmetilarea aminoacizilor Spre deosebire de decarboxilare, dezaminare i transaminare care se ntlnesc la toi aminoacizii, reaciile de transamidinare i transmetilare sunt procese enzimatice pe care le sufer doar unii aminoacizi, n urma lor formndu-se o serie de compui cum ar fi creatina,

carnitina, ornitina, canavalina, canavanina i altele. Enzimele ce catalizeaz aceste reacii se numesc transamidinaze i respectiv transmetilaze (sau metiltransferaze). Enzimele din prima categorie au fost evideniate n rinichi, ficat i pancreas, sunt nalt specifice i folosesc arginina n calitate de donor de grupri amidinice. Metiltransferazele se ntlnesc n majoritatea esuturilor i utilizeaz S-adenozilmetionina n calitate de donor de radicali metil. II.3.2. Ciclul ureogenetic Amoniacul rezultat n urma proceselor de dezaminare a aminoacizilor, precum i din alte procese metabolice ale acestor biomolecule este un produs toxic pentru celula vie, chiar i n concentraii relativ mici. La mamifere, acest produs final de metabolism este convertit n uree, fiind apoi eliminat pe cale renal. Primele observaii asupra acestei ci metabolice au fost fcute de ctre Krebs care a observat c ornitina, citrulina i arginina accelereaz producerea de uree n prezena amoniacului, fr ca ele nsele s se consume. Clarificarea complet ns a mecanismului prin care amoniacul este convertit in vivo n uree a fost realizat mult mai trziu. Aceast cale metabolic debuteaz prin mobilizarea amoniacului sub aciunea carbamilfosfat-sintetazei care, n prezen de ATP ca surs de energie i radicali ortofosfat, catalizeaz reacia de condensare a amoniacului cu dioxidul de carbon cu formare de carbamil-fosfat:

2ATP HCO 3
-

+ NH 4

Mg Carbamilfosfatsintetaza

2+

2ADP + P i H

O O II II 2N C O P OH I OH

n hepatocite au fost descoperite dou enzime ce catalizeaz acest proces i anume carbamilfosfat-sintetaza I localizat n mitocondriile celulelor hepatice i carbamilfosfatsintetaza II, prezent n citoplasm. Reacia de formare a carbamil-fosfatului este accelerat de N-acetil-glutamat sau de ali derivai acil-glutamici identificai n esutul hepatic. Mecanismul de participare a N-acetil-glutamatului este deocamdat incomplet elucidat. Se pare c el acioneaz asupra enzimei ca un modulator alosteric. Viteza de formare a carbamil-fosfatului se afl sub controlul argininei care inhib printr-un mecanism de tip feed back viteza de formare a N-acetil-glutamatului care, la rndul

su, stimuleaz biosinteza carbamil-fosfatului. Carbamilfosfat-sintetaza II prezent n citosol a fost identificat i la bacterii unde catalizeaz reacia de biosintez a carbamil-fosfatului prin utilizarea glutaminei n calitate de donor de grupri aminice:

CH2 CH2 CH COOH I I + HCO3- + H2O C=O NH2 I NH2 Glutamin

ATP
2+

Mg K Carbamilfosfat sintetaza II

ADP + Pi

O O II II H2N C O P OH + CH 2 CH 2 CH COOH I I I OH COOH NH 2 Acid glutamic Carbamil-fosfat

La bacterii, formarea carbamil-fosfatului are loc n absena N-acetil-glutamatului, iar consumul de energie este mult mai mic, fiind necesar o singur molecul de ATP. n etapa urmtoare a procesului acioneaz enzima numit ornitin-transcarbamilaz ce catalizeaz reacia de condensare a carbamil-fosfatului cu ornitina, cu formare de citrulin:

O O H3PO 4 II II H2N C O P OH + H2N (CH 2)3 CH COOH OrnitinI I OH transcarbamilaza NH 2 Carbamil-fosfat Ornitin

O II H2N C NH (CH 2)3 CH COOH I NH 2 Citrulin

n prezena arginino-succinat-sintetazei, a ATP-ului i a ionilor de magneziu, citrulina astfel format d o reacie de condensare cu acidul aspartic genernd acidul argininosuccinic:

COOH O I II H2N C NH (CH 2)3 CH COOH + CH 2 I I NH 2 CH NH 2 I COOH Citrulin Acid aspartic

ATP

AMP + PP i Mg2+ Argininosuccinatsintetaza HN

CH 2 COOH I NH CH COOH C I NH (CH 2)3 CH COOH I NH 2 Acid arginino-succinic

Reacia de mai sus este, n principiu, reversibil ns, n condiii fiziologic normale, pirofosfatul rezultat este hidrolizat rapid sub aciunea pirofosfatazei, ceea ce face ca echilibrul reaciei s se deplaseze spre dreapta. n etapa urmtoare acioneaz arginino-succinat liaza care scindeaz acidul arginino-succinic cu formare de arginin i acid fumaric:

HN

CH 2 COOH I NH CH COOH

Argininosuccinat liaza H C COOH II HOOC C H +

C I NH (CH 2)3 CH COOH I NH 2 Acid arginino-succinic

Acid fumaric

H2N C NH (CH2)3 CH COOH II I NH NH2 Arginin

Arginino-succinat liaza este o enzim larg rspndit n organismul mamiferelor, fiind prezent preponderent n ficat, rinichi i creier, iar reacia catalizat de ea are lor n citosol, spre deosebire de reaciile precedente care se realizeaz n mitocondrii. Ultima etap a ciclului ureogenetic const n scindarea argininei n ornitin i uree, proces ce are loc exclusiv n ficat. Acest lucru este argumentat de faptul c enzima ce catalizeaz aceast reacie arginaza este localizat exclusiv n hepatocite. Molecula sa este alctuit din dou subuniti identice legate ntre ele prin intermediul ionilor de Mg2+ i are o mas molecular de 120.000 Da. Scindarea argininei se face pe cale hidrolitic, iar ornitina rezultat poate relua un nou ciclu de transformare a carbamil-fosfatului. Aceast cale metabolic este cunoscut sub numele de ciclu ureogenetic sau ciclul Krebs Henseleit:

NH2 I HN = C I NH I (CH2)3 I CH NH2 I COOH Arginin

H2O Arginaza

NH2 HN I NH2 (CH2)3 + C I I CH NH2 OH I COOH Ornitin

H2N C II O

NH2

Uree

Ureea format n aceast cale metabolic este transportat pe cale sanguin la rinichi, fiind eliminat apoi prin urin. Pentru fiecare molecul de uree format se consum o molecul de dioxid de carbon i o molecul de amoniac care reprezint precursorii atomului de carbon i respectiv a unuia din atomii de azot ai ureei. Cellalt atom de azot este cedat de acidul aspartic care, la rndul su, este regenerat continuu n cursul proceselor de transaminare ce au loc ntre glutamat i oxaloacetat.