CULTIVAREA ALGEI ANABAENOPSIS SP.

PE MEDIUL DE CULTUR GROMOV-6 Sergiu DOBROJAN, Natalia DONU, Galina DOBROJAN, Alina TROFIM, Irina STRATULAT, Tudor POPESCU, Eugen SEMENIUC, Corina NEGARA Rezumat Mediul de cultur Gromov-6 poate fi utilizat la cultivarea periodic a algei Anabaenopsis sp., care asigur obinerea a circa 5,52 g/l biomas algal timp de 15 zile. Constatm c pH-ul mediului de cultur se modific odat cu creterea biomasei, majorndu-se pn la a 10-a zi atingnd, 11,120,02, dup care ncepnd cu a 12-a zi se reduce la 10,340,28, iar la a 15-a zi diminueaz pn la 9,080,03. Faza de cretere lag s-a desfurat de la 1-a la a 2-a zi de cultivare, cea logaritmal s-a manifestat de la a 2-a pn la a 3-a zi, iar cea exponenial - de la a 3-a la a 15-a zi. Viteza specific de cretere a fazei logaritmale atingea 0,4080,015 zile -1, iar la cea exponenial se reduce odat cu creterea productivitii. Cele mai mici valori ale productivitii maxime sau observat la a 3-a zi (0,1750,007), iar cele mai nalte - la a 15-a zi de cultivare, fiind de 0,3650,012.

Introducere Una dintre cele mai importante etape ale procesului tehnologic de cultivare a algelor este obinerea, prepararea i cultivarea algelor pe mediile de cultur. Componena i calitatea mediilor de cultur influeneaz direct asupra intensitii creterii microalgelor [6]. Mediile de cultur difer n funcie de nivelul taxonomic de clasificare a algelor, fiind ntlnite medii de cultur caracteristice unei specii, de exemplu, sau unor ncrengturi. Printre mediile generale, caracteristice unitii taxonomice la nivelul filumului algal, se numr i mediul Gromov-6, utilizat mai frecvent la cultivarea algelor din ncrengturile Cyanophyta i Chlorophyta [4]. Experienele efectuate de .. Urmci, H.. Berdculov, .B. pulatova [8] au demonstrat nc odat posibilitatea utilizrii mediului Gromov-6 la cultivarea intensiv a algelor din ncrengturile Chlorophyta cu reprezentaii speciilor Chlorella vulgaris Beijer YA-1-10, Chlorella pyrenoidosa Chick YA-1-1, Chlamydomonas reinhardii 449, Chlamydomonas globosa Snow. YA-5-20, Dictyococcus pseudovarians Korsch. Str. Gromov, Bracteacoccus minor Tereg Str. Gromov, Scenedesmus acuminatus (Lagerh.) Chodat YA-2-8, Scenedesmus quadricauda (Turp.) Brb. YA-2-7, Scenedesmus obliquus (Turp.) Ktz. YA-2-6 i Cyanophyta cu speciile: Synechococcus elongates (Naeg.) S-2. Astfel, n urma experimentelor s-a stabilit c cele mai productive s-au dovedit a fi unele specii din ncrengtura Chlorophyta (Chlamydomonas reinhardii 449 i Chlamydomonas globosa Snow. YA-5-20), avnd o cretere medie zilnic de 1,110,04 i 0,830,03 g/l biomas absolut uscat. Unii reprezentani ai aceleai ncrengturi, cum ar fi de exemplu Scenedesmus quadricauda (Turp.) Brb. YA-2-7 i Scenedesmus obliquus (Turp.) Ktz., YA-2-6 au reacionat diferit, manifestndu-se prin

obinerea celei mai mici cantiti de biomas (0,280,01 g/l biomas absolut uscat timp de 24 ore), specia Synechococcus elongates (Naeg.) S-2 a avut o cretere medie a biomasei de 0,490,03 g/l biomas absolut uscat n decursul a 24 ore. Rezultatele acestor experimente arat c acest mediu, totui, nu este unul universal, dar poate fi utilizat la cultivarea algelor din ncrengturile Cyanophyta i Chlorophyta. Pornind de la faptul c alga Anabaenopsis sp. face parte din ncrengtura Cyanophyta, neam propus drept scop s analizm procesul de cretere a algei cultivat pe mediul de cultur Gromov-6.

Materiale i metode n experimente a fost antrenat tulpina algei Anabaenopsis sp., care se depoziteaz n cultur pur, n colecia LC Algologie. Alga Anabaenopsis sp. a fost cultivat, dup metoda de cultivare periodic [7], pe mediul de cultur Gromov -6, preparat pe baza apei distilate, cu urmtoarea componen (g/l): KNO3 1,0; K2HPO4 0,2; MgSO47H2O 0,2; CaCl2 0,15; NaHCO3 0,2 i soluia de microelemente (g/l): CaCl2 1,2; ZnSO47H2O 0,22; MnSO4 1,81; CuSO45H2O 0,079; NaBO34H2O 2,63; (NH4)6Mo7O244H2O 1,0; FeSO47H2O 9,3; Co(NO3)2H2O 0,02; EDTA (Trilon ) 10,0. Mediul de cultur obinut a fost sterilizat prin metoda fizic. Cultivarea s-a efectuat n baloane Erlenmeyer cu volum de 250 ml. n calitate de inocul sa utilizat alga Anabaenopsis sp., cultivat pe mediul lichid ce se afla n faza exponenial de cretere, obinut conform metodologiei [3], densitatea culturii inoculate era de 0,4 g/l. Experienele au demarat n condiii de laborator la temperatura de 28 - 30 C i intensitatea luminii - 4000 luci. Creterea biomasei a fost determinat dup formula: (An A0)/n, unde An cantitatea de biomas obinut peste n zile, A0 cantitatea iniial de biomas, n perioada analizat (zile). Productivitatea algal a fost stabilit conform procedeelor propuse n literatura de specialitate [6]. Indicele pH ului a fost stabilit cu ajutorul aparatului multifuncional Consort C 944. Calculul statistic al rezultatelor a fost efectuat utiliznd programa Statistica 6, cu determinarea mediei aritmetice (M) i erorii standarde (m). Experimentele au fost efectuate n 6 repetri. Rezultate i discuii Alga cianofit Anabaenopsis sp. posed un potenial nalt de fixare a azotului n diferite tipuri de sol [1, 2], fapt ce sporete necesitatea selectrii unor medii de cultur care ar contribui la obinerea biomasei de biofertilizant. Dup cum am menionat, alga cianofit Anabaenopsis sp. poate fi cultivat pe mediul de cultur Gromov-6, caracteristic algelor din aceast

ncrengtur. Cultivarea algei Anabaenopsis sp. pe acest mediu a fost efectuat pn la finele fazei exponeniale de cretere a culturii, datele fiind prezentate n figura 1.

Figura 1. Productivitatea algei Anabaenopsis sp. cultivat pe mediul de cultur Gromov-6. Dup cum observm, biomasa algal crete semnificativ. Dac n 1-a zi inoculul constituia 0,4 g/l (sau 0,07 g/l BAU), atunci la cea dea 12-a zi biomasa a crescut de 5,68 ori, atingnd valoarea de 3,498 g/l sau 0,57 g/l BAU, iar la finele experimentelor se observ o majorare a biomasei de 13,8 ori cea ce constituia 5,52 g/l sau 0,9 g/l BAU (fig. 1). Acest lucru ne indic c mediul de cultur Gromov-6 este favorabil pentru creterea algei Anabaenopsis sp. Tabelul 1. Creterea biomasei algei Anabaenopsis sp. n funcie de pH-ul i temperatura mediului de cultur Indicii examinai temperatura mediului pH-ul mediului de Creterea biomasei, de cultur, C cultur g/l/zi Mm Mm Mm 1 18,000,11 7,710,01 0 3 33,930,48 8,260,03 0,1160,005 6 34,200,40 9,850,06 0,1750,006 9 31,730,18 11,120,02 0,2050,011 12 30,600,25 10,340,28 0,2580,010 15 31,530,39 9,080,03 0,3400,010 Datele prezentate n tabelul 1 indic c temperatura mediului de cultur crete. Dac iniial avea valoarea de 18,000,11C atunci pe parcursul experimentelor ea s-a majorat de 1,7-1,9 ori, lucru datorat temperaturii aerului i iluminrii. Concentraia ionilor de hidroniu din mediul de cultur are tendina de alcalinizare puternic, pn la a 9-a zi de cultivare atingnd valoarea de 11,120,02, dup care ncepnd cu a 12-a zi se reduce la 10,340,28, iar la a 15-a zi diminueaz pn la 9,080,03. Creterea medie zilnic a biomasei poate fi considerat liniar, observndu-se o majorare de la o msurare la alta. Cele mai mari valori au fost nregistrate la a Perioada analizat, zile

15-a zi de cultivare (0,3400,010). Astfel putem constat c nu exist un raport direct proporional ntre pH i creterea biomasei algale. O caracteristic mai vdit a culturii, obinute n condiii specifice, este reprezentat de productivitatea maxim i viteza specific de cretere, stabilirea crora reprezint momentul cheie n formularea oricror pronosticuri calitative [5]. Tabelul 2. Indicatorii de cretere a algei Anabaenopsis sp. la cultivarea periodic Perioada analizat, zile 3 6 9 12 15 Analiznd Productivitatea maxim Viteza specific de cretere, zile-1 0,1750,007 0,1500,006 0,1780,006 0,0580,002 0,2330,011 0,0450,002 0,2660,010 0,0340,001 0,3650,012 0,0330,001 fazele de cretere a algei Anabaenopsis sp. putem spune c perioada lag-fazei

a fost una scurt, care s-a desfurat de la 1-a la a 2-a zi de cultivare, observndu-se o reducere a biomasei algale ca rezultat al adaptrii celulelor la noile condiii ale mediului de cultur. Faza logaritmal de cretere a algei Anabaenopsis sp. s-a manifestat de la a 2-a pn la a 3-a zi de cultivare i se caracterizeaz prin valori nalte ale vitezei specifice de cretere, care atingeau 0,4080,015 zile-1. ncepnd cu a 3-a zi de analiz se desfoar faza de cretere liniar, sau exponenial, care decurge pn la a 15-a zi. Pentru aceast faz, viteza specific de cretere se determin dup o modalitate diferit (comparativ cu cea a fazei logaritmale) i diminueaz de la o analiz la alta, astfel c la a 15-a zi se atest valorile de0,0330,001 zile-1. Acest indicator se afl n raport invers proporional cu productivitatea maxim. Productivitatea maxim este n continu cretere (lucru specific pentru aceast faz), cea mai mare cretere se observ la a 15- a zi, atingnd 0,3650,012, iar cea mai mic - la a 3-a zi -0,1750,007 (tabelul 2). Concluzii 1. Alga cianofit Anabaenopsis sp. poate fi cultivat pe mediul de cultur Gromov-6. 2. Productivitatea algei are o tendin de cretere pn la a 15-a zi, atingnd 5,52 g/l sau 0,9 g/l BAU, ceea ce constituia o cretere de 13,8 ori fa de cantitatea biomasei iniiale. 3. Creterea medie zilnic a biomasei nu este n raport direct dependent de pH-ul mediului de cultur, observndu-se o majorare a nivelului de cretere a tulpinii, iar valorile pH-ului diminueaz ncepnd cu a 12-a zi. 4. Indicatorii fiziologici denot c cea mai intens dividere a algei a avut loc de la a 12-a pn la a 15-a zi.

Bibliografie:

1.

DOBROJAN S., ALARU V. V., ALARU V. M., NEGARA C., DOBROJAN G.,

TROFIM A. - Alga cianofit Anabaenopsis sp. - surs de nbogire a solului n azot // Simpozionul tiinific internaional Conservarea diversitii plantelor, consacrat aniversrii a 60-a de la fondarea Grdinii Botanice (Institut) a AM. Chiinu, 2010. - P. 182-186.
2.

DOBROJAN S., DOBROJAN G., ALARU V.V., ALARU V.M., NEGARA C.,

TROFIM A. - Fixarea biologic a azotului n nisip la administrarea algelor Anabaenopsis sp. i Cylindrospermum licheniforme (Bory) Ktz f. alatosporum Kondrat. n diferite doze // Buletin tiinific. Revist de Etnografie, tiinele Naturii i Muzeologie, Vol. 12 (25), 2010. - P. 111116. 3. M.
4.

., . . -

. Moc, . , 1962. C. 1-58. . , -. , 1983. - C 1-152. 5. . . - . Moc, , 1978. - C 1-33.

6.

. ., . .,. . , . .,

. ., . ., . ., . ., . ., . ., . . - - . , , 1975. - C 1-241. 7. . . - . // . . 67, 2005. - C 89-97. 8. . ., . ., . . - // . . 18. 3, 2008. - C. 347-352. Abstract Cultivation of the algae Anabaenopsis sp. on Gromov-6 culture medium. Gromov -6, culture medium can be used in regular cultivation of the algae Anabaenopsis sp. which approximately ensures the 5,52 g/l of algal biomass for 15 days. pH of the culture medium is changing with the growth of algal biomass increasing to the 10 day and reaching 11,120,02, after that from 12th day is reduced to 10,340,28 and the 15-day decreases to 9,080,03. Phase of growth is widely seen from the 1st and 2nd day of cultivation, the logarithm growth was manifested in the 2nd to 3rd day, and the expositional from 3rd to 15th day. Specific speed of growth logarithmic phase

reached 0,4080,015 day-1, and at the expositional is reduced with increasing algal productivity. The lowers values of maximum productivity was observed in a 3rd day 0,1750,007 and highest on the 15th day being 0,3650,012. Keywords: culture medium, cultivation, productivity, specific growth rate, growth phase, maximum productivity.

Proiect 12.819.18.11A Universitatea de Stat din Moldova, Chiinu