08.11.

2010

GENERALITI
Ereditatea

Genetica bacterian

nsuirea general biologic a tuturor vieuitoarelor de a transmite caracterele specifice speciei la urmai

Variabilitatea
apariia unor caractere diferite de cele ale genitorilor intereseaz medicina n mod deosebit
d natere unor tulpini bacteriene noi:
virulente rezistente la chimioterapice se adapteaz mai bine condiiilor de mediu nlocuiesc bacteriile mai puin adaptabile.

SUPORTUL EREDITII
reprezentat de ADN se transmite la descendeni prin replicare i diviziune fr modificri genetice toi descendenii bacteriei vor fi identici ntre ei i cu bacteria mam modificarea materialului genetic prin
ncorporarea unui fragment de material genetic exogen (recombinare genetic) mutaie spontan sau indus adugarea, pierderea, substituirea sau inversarea ordinii unor baze

ADN
macromolecul format din 2 catene polinucleotidice antiparalele i complementare, rsucite n dublu helix catenele unite prin puni de hidrogen ntre bazele azotate opuse

funciile ADN ca material genetic:

depozitarea informaiei genetice replicarea transcrierea i traducerea genetic protejarea materialului genetic propriu reglarea activitii celulare controlul activitii celulare

replicarea ADN
sinteza unor noi molecule, identice necesar unitatea de replicare independent REPLICON

08.11.2010

REPLICON
molecul de ADN bicatenar, circular caracterizat prin:
o secven nucleotidic specific marcnd nceperea replicrii gene care codific sinteza unor proteine specifice o secven nucleotidic semnal pentru terminarea replicrii exemple de repliconi: cromozomul i plasmidele bacteriene, genomul bacteriofagilor etc.

GENOM suma genelor unui organism GENOTIP totalitatea informaiei genetice a unui organism FENOTIP suma caracterelor observabile, specifice unui organism, produse de genotip n interaciune cu mediul ambiant

ORGANIZAREA GENOMULUI BACTERIAN

2 categorii de determinani genetici:
genele eseniale localizate n structura cromozomului bacterian genele accesorii extracromozomiale prezente n structura
plasmidelor elementelor genetice transpozabile

PLASMIDELE
elemente genetice extracromozomiale capabile de replicare independent de cromozom (replicon) conin informaie genetic neesenial pentru viaa bacteriei pot exista:
indefinit numai n stare autonom (libere n citoplasm) factor R, Col alternativ n stare autonom sau integrate n cromozomul celulei gazd

PLASMIDELE
clasificare dup caracterele exprimate fenotipic plasmide care codific:
rezistena la ageni antibacterieni sinteza unor ageni antimicrobieni sinteza de hemolizine, enterotoxine, factori de colonizare etc. (patogenitate) enzime ale unor ci metabolice particulare plasmide criptice nu se cunosc caracterele somatice exprimate

FACTORUL F (factorul de sex, factorul de fertilitate)

controleaz capacitatea unor bacterii de a fi donatoare de material genetic codific structurile (pilul F) i enzimele necesare transferului de ADN au caracter de mascul donatoare de material genetic (factorul F)

08.11.2010

FACTORUL F (factorul de sex, factorul de fertilitate)

fr factor F bacterii celule femele receptoare de material genetic bacterii F+ - cu factor F autonom n citoplasm celule mascule donatoare de material genetic F- -

FACTORUL F (factorul de sex, factorul de fertilitate)

bacterii Hfr
(high frequency of recombination) au factor F integrat n cromozomul bacterian donatoare de material genetic cu mare frecven de conjugare i recombinare; transferul unui numr variabil de gene cromozomale mai rar chiar transferul factorului F

Celul mascul factor F autonom n citoplasm

F+

FACTORUL F (factorul de sex, factorul de fertilitate)

bacterii F
au o structur plasmidic de tip special = factor de fertilitate recombinant a fost anterior integrat ntr-un cromozom, s-a desprins ncorpornd unele gene cromozomale caracterul ncrucirii F cu F F- devine F F rmne F

Mecanismul de transfer al materialului genetic ntre bacterii F+ i F realizarea de puni de conjugare transferul ADN caracterul ncrucirii F+ cu F F- devine F+ F+ rmne F+

Transfer sczut al genelor cromozomale ale donorului

Mecanismul de transfer al materialului genetic ntre bacterii Hfr i F realizarea de puni de conjugare transferul ADN recombinare homolog caracterul ncrucirii Hfr cu F F- rar devine Hfr Hfr rmne Hfr
Transfer crescut al unor gene cromozomale ale donorului

PLASMIDELE R (de rezisten la antibiotice)

confer rezisten simultan la 1-8 antibiotice alctuite din:
gene de rezisten determinant de rezisten = r gene care formeaz factor de transfer al rezistenei RTF

RTF plasmid de conjugare

transfer de gene
- cele 2 tipuri de elemente pot exista independent sau se pot asocia

- transferul plasmidelor R prin conjugare - prin transducie mediat de fagi

08.11.2010

PLASMIDELE Col
codific proprietatea unor bacterii de a sintetiza bacteriocine sunt transferabile de la tulpinile Col+ la cele Col- prin:
transformare genetic transducie fagic conjugare

ELEMENTE GENETICE TRANSPOZABILE

secven specific de ADN care i menine integritatea fizic, structural, genetic, funcional n cursul translocaiei de la o poziie la alta pe acelai genom sau pe genomuri diferite 3 categorii:
secvene de inserie IS transpozoni Tn bacteriofagi

Secvenele de inserie
nu au nici o gen i nici o alt funcie n afar de cea de inserie dup inseria lor pot apare :
modificri n expresia unor gene modificri n rata incidenei deleiilor n zonele adiacente situsului lor de inserie

Transpozoni
poart gene care confer bacteriei funcii noi:
rezistena la antibiotice capacitatea de sintez a unor enzime producere de enterotoxine sinteza antigenelor bacteriene de suprafa etc.

Bacteriofagi
virusuri care paraziteaz bacteriile se cunosc 6 grupe morfologice de bacteriofagi cei mai bine studiai bacteriofagii T ai bacilului coli.

bacteriofag dup injectarea ADN n celula gazd; capsida goal; coada contractat

Bacteriofagi
formai din cap hexagonal
alctuit dintr-un nvelis proteic adposteste acidul nucleic

caracteristic virusurilor (capsida)

un gt
prelungire numit picior (coad) cilindru rigid nvelit ntr-un

bacteriofag T normal

manson proteic asemntor miozinei se termin cu o plac hexagonal ce conine o enzim de tipul lizozimului. de placa bazal se prind 6 fibre cu rol n fixarea bacteriofagului pe suprafaa bacteriei.

08.11.2010

Replicarea bacteriofagului
CICLUL LITIC al bacteriofagilor fagi viruleni
ataare contracie manon ptrundere acid nucleic n celul sinteza componeni fagici asamblare ieire din celul

Ciclul replicativ al bacteriofagului

Atasarea bacteriofagului pe suprafaa peretelui bacterian
prin receptori de perete, specifici. Aceast specificitate este de tip enzimatic st la baza lizotipiei

Ciclul replicativ al bacteriofagului

Contracia mansonului proteic
bacteriofagul si injecteaz numai ADN n celula bacterian

Ciclul replicativ al bacteriofagului

genomul fagic va determina sinteza de noi bacteriofagi identici cu cel de la care a provenit ADN
ADN se replic prin replicare semiconservativ ribozomii bacterieni vor sintetiza proteinele capsidale si ale cozii.

Ciclul replicativ al bacteriofagului

Asamblarea noilor bacteriofagi

Ciclul replicativ al bacteriofagului

Ieirea
vor prsi celula bacterian care se lizeaz

08.11.2010

Lizogenie

Replicarea bacteriofagului
CICLUL LIZOGEN al bacteriofagilor fagi temperai
uneori genomul bacteriofagului se va integra n cromozomul bacterian ncadrndu-se si funcional n acesta. el nu se mai replic dect n acelai timp cu cromozomul bacterian, deci n timpul diviziunii bacteriene si se numeste profag

consecinele lizogeniei pentru bacterie

bacteria lizogenizat este imun la infecia cu acelai bacteriofag, dar nu pentru ali bacteriofagi profagul codific el nsui unele caractere pe care le dobndete astfel bacteria lizogen.
exemplu clasic n acest sens este toxigeneza la bacilul difteric care este codificat de un profag ce se afl n cromozomul bacterian. Tulpinile de bacili difterici care nu sunt lizogenizate de acest profag, nu sunt capabile s secrete toxina si sunt, deci nepatogene,

transducia, mecanism de transfer genetic de la o bacterie la alta, mediat de bacteriofagi

Importana practic a bacteriofagilor

Cercetri biologice
utilizai ca model n studiul proceselor biologice fundamentale:
replicarea ADN funciile genelor morfogeneza viral

Importana practic a bacteriofagilor

Terapie i prevenie
administrarea unei mixturi de bacteriofagi pentru tratarea i prevenirea infeciilor intestinale
concept vechi, azi studiat cu atenie animale fagi care atac doar EHEC

Studii de inginerie genetic

vectori pentru clonare genetic adjuvani n procesele de secvenare

08.11.2010

Importana practic a bacteriofagilor

Epidemiologie
tipizare bacterian LIZOTIPIE
LIZOTIP = FAGOVAR n epidemii identificarea sursei de infecie, cii de transmitere pentru
Salmonella Typhi Salmonella Paratyphi Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa etc.

Recombinarea secvenelor de ADN

Indiferent care este mecanismul prin care are loc transferul sau transpoziia de material genetic inserarea ADN la noul sediu are loc prin recombinare recombinare = formarea de noi combinaii genetice ntr-un genom
se poate petrece prin
schimb de segmente homologe integrare suplimentar de ADN

Recombinarea secvenelor de ADN

Recombinarea legitim sau homolog
are loc atunci cnd un fragment de ADN provenit de la celula donoare, sau chiar din alt molecul de ADN se inser ntr-o regiune a ADN receptor ce se aseamn din punct de vedere chimic cu cea a ADN-ului donor, deci prezint o homologie de baze este ntlnit n transformare n unele forme de transducie i conjugare implicate mai multe enzime dintre care recA-proteina si recBC nucleaza recombinarea legitim se mai numeste recA-dependent

Recombinarea secvenelor de ADN

form deosebit de recombinare nelegitim genetic in vitro CLONAREA GENELOR
plasmidele uor transmisibile de la o bacterie la alta sunt folosite frecvent ca vectori pentru transferul si clonarea de material genetic
de la o bacterie la alta ntre organisme foarte ndeprtate din punct de vedere filogenetic

Recombinarea nelegitim sau heterolog

const n integrarea de ADN suplimentar ntr-un replicon este recA-independent exemple de recombinare heterolog sunt
integrarea plasmidului F integrarea unor profagi n cromozom transpoziia elementelor genetice mobile

Prin aceast tehnic se introduc n genomul bacterian gene care codific sinteza unor substane a cror obinere pe cale chimic ar fi fie imposibil, fie foarte costisitoare: interferoni, insulin, STH etc. Bacteria preferat a ingineriei genetice - Escherichia coli

VARIABILITATEA BACTERIAN
modificarea comportamentului celulei bacteriene sau a descendenilor ei variante:
VARIABILITATE FENOTIPIC modificri morfologice sau fiziologice de tip adaptativ; nu se transmit ereditar; genomul nu este afectat VARIABILITATE GENOTIPIC modificri definitive ale materialului genetic se transmit descendenilor

MECANISMELE VARIAIEI GENOTIPICE

mutaie transfer genetic + recombinare genetic

08.11.2010

MUTAIA
modificare accidental n secvena nucleotidic a unei gene modificri ale mesajului genetic apar prin:
substituii la nivelul materialului genetic inversii inserii deleii

MUTAIA

MUTAIA
mutaia spontan:
apare n condiii de mediu obinuite, fr intervenia unui factor decelabil mutaia extins:

MUTAIA
afecteaz secvene mai mari ale uneia sau mai multor gene, alterrile depind limitele unui codon

mutaia indus:
se produce sub aciunea unor factori fizici sau chimici = factori mutageni

mutaia regresiv (retromutaie):

afecteaz celule mutante; determin revenirea acestora la tipul iniial restabilind secvena nucleotidic originar

mutaia punctiform:
alterarea unui singur nucleotid, a unui singur codon

mutaii supresoare:
permit exprimarea funciei anterioare a genei dei persist o modificare a secvenei bazelor nucleotidice

MECANISME DE TRANSFER ALE MATERIALULUI GENETIC

transformare transfer mediat de bacteriofagi (transducia, conversia lizogenic) conjugare

TRANSFORMAREA
bacteria accept ADN liber de la o alt bacterie donor sau din alte surse 1928 Griffith experiene referitoare la virulena pneumococilor fa de oarecele alb ADN ptrunde n celul Recombinare genetic nlocuirea unei secvene nucleotidice omologe Dobndirea unui caracter genetic nou

08.11.2010

TRANSDUCIA
transferul unui fragment genetic cromozomal sau extracromozomal prin intermediul unui bacteriofag
bacteriofagul = transductor bacteria receptoare = transductant

TRANSDUCIA
infecia donorului replicarea fagului i degradarea ADN-ului celulei gazd asamblarea particulelor fagice eliberarea fagilor infecia receptorului recombinare

TRANSDUCIA

Conjugarea
transferul de material genetic de la o bacterie donoare la una receptoare printr-un proces de mperechere, ce se realizeaz prin contactul direct dintre cele dou celule. se pot transmite
plasmide gene cromozomiale (prin intermediul factorului F+)

Transducia specializat (restrictiv) - transfer al unui numr restrns de gene din vecintatea situsului de legare a profagului n cromozomul bacterian

Transducia generalizat (nerestrictiv) - transfer a oricrei gene indiferent de poziia ei n genom, ncorporate accidental n fag - realizat de un nr. mare de fagi neintegrai

CONJUGAREA
legarea a 2 celule prin pili de sex conjugare efectiv:
punte specific de conjugare donor - acceptor

transfer:
endonucleaza cliveaz o caten a ADN circular d.c. ntr-un punct specific transferul catenei n celula receptor

sinteza:
pe ambele catene de ADN (rmas i transferat) se sintetizeaz prin complementaritate structura dublucatenar

- celula receptor = transconjugant