Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
VARIABILITATEA GENETIC probleme: 1. Variabilitatea: definiie i surse 2. Mutaiile genice: 2.1. Substituiile nucleotidice 2.2. Deleiile si inseriile nucleotidice mici 2.3. Recombinri omoloage nealelice 2.4. Expansiunea instabil a repetiiilor trinucleotidice 2.5. Corelaii dintre genotip i fenotip 3. Mutaiile cromosomice i genomice
1. VARIABILITATEA GENETIC: definiie i surse Variabilitatea genetic = ansamblul de fenomene care produc diferenele genetice - ntre indivizii unei populaii, - ntre populaii diferite Sursele de variabilitate:
1.1. Recombinrile genetice, 1.2. Mutaiile, 1.3. Migraiile.
3
DIVERSITATE
EVOLUIE
(recombinani), prin rearanjarea materialului genetic cuprins n dou uniti genetice diferite.
RG presupune: asociere intim + interaciune / schimb egal RG = proces natural (normal) * cea mai mare surs de variabilitate.
R. genomic:
1. 2. Mutaiile
Mutaiile: modificri n secvena sau aranjarea nucleotidelor (secvenelor) din ADN Nenaturale, permanente ( ), ereditare
Consecine:
fr efect, variaii fenotipice normale, boal.
COMENTARII:
(1). Mutaiile n special cele genomice sunt frecvente. M. germinale = 3% nn Mutaiile sunt o cauz major de boal sau de predispoziie la mbolnvire
COMENTARII:
(2). M. somatice, produse prin erori de replicare, se acumuleaz cu vrsta efecte la vrsta a III-a (50.000/genom/zi corecie erori una la fiecare replicare genom x 1015 diviziuni cteva mii) (3). Mutaiile spontane = mai frecvente ca cele induse.
1.3. Migraiile
Migraii = transferul de gene prin deplasarea i ncruciarea unui grup de indivizi dintr-o populaie n alt populaie genetic diferit.
2. MUTAIILE GENICE
gena N
12
dup mecanism:
modificarea secvenei N: substituii = nlocuirea unei perechi de baze (pb). deleii = pierderea unei/unor pb inserii= introducerea unei/unor pb
modificarea aranjrii N: recombinri omoloage nealelice deleie / duplicaie segmente ADN amplificarea repetiiilor trinucleotidice
A T
13
dup dinamica:
M. stabile / fixe M. instabile / dinamice!
Substituie = nlocuirea unui singur nucleotid (i deci a unei pb) = mutaie punctiform. S = cel mai frecvent tip de mutaie ntlnit la om.
15
ADN
n INTRONI: Anulare situsuri de decupare: (splice site mutations) 5GT---------AG3 absena matisrii includerea intron n ARNm instabil
ADN
matisare
Pr
---------------------
17
GC
AG
GT
AG
Intron 2
Exon 3
GT
AT
GT
AG
Exon 1
Exon 3
18
n SECVENELE DE REGLARE
reg 5 - promotor
modificri cantitative ale sintezei proteinelor reg 3 anomalii de poliadenilare ARNm instabil
19
20
A G
T C
A MPERECEHERE GREIT G
T
T
A G
T C
A G
T C
A A
T A T G
T C
A G
T C
MUTAIE
21
(2). leziuni provocate n ADN de factori mutageni, exogeni sau endogeni, (fizici sau chimici ) - dezaminare,
- depurinare, - demetilare
Eroare recunoscut
Eroare nerecunoscut
corecie
22
NU au o eficien absolut; n final, se produce o mutaie nou la fiecare replicare / diviziune celular. 23
24
Mecanismele de reparare (MMR, BER, NER) difer prin inta lor dar modul de aciune este asemntor (implicnd multiple gene i enzime mutator); Etape:
recunoaterea leziunii ADN, excizia fragmentului de ADNmodificat (endonucleaz) ndeprtarea i degradarea fragmentului (exonucleaz) refacerea secvenei normale (ADNpolimeraza)=reparare legarea ei la caten (ligaza)
25
Mutaiile genelor ce codific enzime de reparare acumulare rapid mutaii creterea susceptibilitii la cancer
Ex.1, mutaiile genelor implicate n calea MMR cancerul colorectal non-polipozic ereditar (HNPCC) = 5% din cancere de colon
Caracteristici: apar sub 45-50 ani; localizare proximal de unghiul splenic; cancere mucinoase; instabilitatea microsateliilor
Ex.2., mutaiile genelor implicat n calea HR cancerul de sn ereditar (genele BRCA1, BRCA2); Ataxia telangiectazia
26
1-n aminoacizi 27
Mecanismul de producere a deleii /inserii: glisare / derapare replicativ determinat de mperecherea decalat a unor secvene repetate
Acest mecanism explic polimorfismul minisateliilor i expansiunea repetiiilor trinucleotidice
Secvenele repetate din catena nousintetizat se aliniaz greit (gliseaz nainte sau napoi) fa de secvenele complementare ale catenei matri
duplicaie
deleie
28
Are loc n profaza meiozei I: - mperecherea (sinapsa) greit ntre regiuni omoloage (secvene de ADN identice sau cvasiidentice; ex., R1 ~ R2) dar nealelice;
- CO schimb inegal ntre crz. omologi deleii, duplicaii, inversii a unor segmente mari
Duplicaie
29
mperechere corect
Deleia genei
mperechere greit
RON se produce datorit arhitecturii genomului uman Conine numeroase regiunile omoloage (~identice):
duplicaii segmentare (5-10% din genom); secvene repetitive mici (numr mic de repetiii identice)
situate n anumite segmente ale cromozomilor (la/lng centromer sau telomere); RON determin deleii, duplicaii, inversii ADN BOLI GENOMICE (deosebite de bolile cauzate de alterarea secvenei genice)
31
Bolile genomice Descrise recent (Lupski, 2002) Frecvente (10-4) n funcie de mrimea segmentului implicat (si deci nr de gene) : boli mendeliene (NF1) sdr. cu microdeleii (sdr. VCF) rearanjamente cromozomiale mari (inversii,
izocromozomi).
32
Tip nou de mutaii instabile sau dinamice diferit de mutaiile clasice= permanente i stabile Se produc n genomul uman n regiuni cu repetiii trinucleotidice:
dispuse n tandem: CGG CGG CGG polimorfice (ntr-un numr diferit la persoanele normale); ex CGG = 6-50 repetiii. situate n diferite segmente ale genei (promotor; exoni; introni); ex. CGG n regiune promotor a genei FMR1 (Xq27.3 n situsul fragil FRAXA) inerte funcional (CGG=6-50 fenotip normal) instabilitate intergeneraional (meiotic)
33
Cnd se ajunge la un prag critic (ex. pt CGG = 230 repetiii) blocarea expresiei genei mutaie boal boli prin mutaii dinamice (expansiunea trinucleotidelor):
Sdr. X fragil (prin expansiunea CGG) retard mintal legat de X Boala Huntington (prin expansiunea CAG) boal neurologic degenetaiv Distrofia miotonic (prin expansiunea CTG) afeciune neuromuscular
34
Sindromul X fragil: RM, dismorfie facial evocatoare, macroorhidism (1:4000 brbai; 1:7000 femei)
35
36
37
expansiune
expansiune
38
Sindromul X fragil Inciden 1/4.000 de nou-nscui de sex masculin. Tip de transmitere recesiv legat de cromosomul X. Genetic mutaia genei FMR1, localizat Xq27.3, se caracterizeaz prin amplificarea unei secvene trinucleotidice CGG, existent n regiunea netranslat 5 a genei. n mod normal exist mai puin de 60 de repetiii CGG; n cursul ovogenezei printr-o aliniere eronat a secvenelor CGG se poate produce creterea numrului de repetiii la mai mult de 200 de secvene, cu apariia bolii la descendeni. Patogenie: n cazul prezenei unei amplificri trinucleotidice de 60-200, persoana are o premutaie, existnd un risc crescut de a avea descendeni anormali; prezena a mai mult de 200 de repetiii trinucleotidice determin hipermetilarea citozinei la nivelul regiunii promotor a genei, ceea ce duce la pierderea funciei genei; hipermetilarea citozinei modific replicarea regiunii respective i condensarea cromatinei ceea ce este corelat cu apariia situsului fragil caracteristic (figura), evideniat prin cultivarea limfocitelor n mediu srac n acid folic sau prin introducerea n mediu de cultur a metotrexatului este prezent fenomenul de anticipaie, corelat cu creterea numrului de repetiii CGG n cursul ovogenezei; Diagnostic clinic fenotipul caracteristic sindromului X-fragil apare la brbaii aduli i const n dismorfie facial (fa alungit, cu prognatism i urechi mari, proeminete) macroorhidie i retard mental moderat cu tulburri de comportament. La copil afeciunea este sugerat de ntrzierea apariiei limbajului, hiperactivitate cu deficit de atenie sau comportament de tip autist. Diagnostic paraclinic evidenierea prin PCR a numrului de repetiii CAG la descendenii unui individ afectat; evidenierea situsului X fragil prin tehnici citogenetice clasice. Prognostic retard mental mediu. Tratament nu exist tratament specific.
39
Expansiunea crete n succesiunea generaiilor boala apare mai precoce i este mai grav (anticipaie) Intensitatea /gravitatea manifestrii bolii depinde uneori de sexul printelui; mama n sdr. X fragil; tatl n boala Huntington
40
3.
4.
MUTAIE GENIC
Protein anormal
Scderea cantitii de protein dac aceasta este instabil
Protein normal
Cantitate sczut
MECANISM PATOGENIC
Cantitate crescut
Pierdere de funcie (cel mai frecvent)
44
BOLILE GENETICE
45
45
U.M.F IAI
boli genetice
boli multifactoriale boli ecologice (negenetice)
f.g.
f.g + f.m. f.m.
46
46
U.M.F IAI
Mutaiile reprezint o cauz major de boal sau predispoziie la boal. n bolile ecologice - efectele agresiunilor exogene sunt influenate de GENOTIP, ce determin:
un mod specific de rspuns la agresiuni (vulnerabilitate / rezisten) manifestarea i gravitatea a mbolnvirilor.
Aproape toate bolile umane au o component genetic, mai mare sau mai mic. BOLILE GENETICE = boli determinate sau condiionate de mutaii
47
47
U.M.F IAI
2) BG sunt diverse pot afecta orice organ, la orice vrst: - se regsesc n toate specialitile !!!. 3) BG sunt, n ansamblul lor, frecvente: 5-8% nn ! n Iai: n fiecare zi se nate un copil afectat; n Romania: 7200 nn/ an;
48
48
U.M.F IAI
Argumente:
4) BG sunt boli cronice produc frecvent un handicap fizic, mental, senzorial, motor cheltuieli importante 5) BG sunt o cauz major de morbiditate i mortalitate (infantil)
30-50% 10% 10-30% ~50% din internrile n spitalele de pediatrie; din internrile n spitalele de aduli; din tulburrile de reproducere; din mortalitatea infantil (n rile dezvoltate).
49
U.M.F IAI
50
50
U.M.F IAI
c). Clasificarea bolilor genetice n funcie de tipul de mutaii, de localizarea i aciunea lor cinci categorii :
boli cromozomiale, boli monogenice (mendeliene sau moleculare), boli mitocondriale, boli multifactoriale, boli prin mutaii somatice.
Un tip particular: bolile genomice (ce pot fi monogenice sau cromozomiale) determinate de rearanjarea genomului prin recombinare omoloag nealelic (v. capitolul 6)
51
51
U.M.F IAI
NU sunt ereditare (rare excepii). Frecvena anomaliilor cromozomiale: gamei (brbai/femei normale i fertile): 10 % (spermatozoizi) 25 % (ovule) embrioni (std. preimplantator) 25 % embrioni 5-8 spt (avorturi spontane) 50 60 % nou-nscui mori 10% nou-nscui vii 0,7 1 % (>1:140)
52
52
U.M.F IAI
U.M.F IAI
Indexate i descrise m catalogul Mendelian Inheritance of Man edt. Victor McKusick (ed.12, 1998; versiunea online = OMIM, actualizat permanent)
www.ncbi.nlm.nih.gov/omim
National Center for Biotechnology Information ; National Library of Medecine ; National Institut of Health
54
54
U.M.F IAI
Cystic fibrosis
55
55
U.M.F IAI
56
56
U.M.F IAI
57
57
U.M.F IAI
n ~ 40% b. MG. gena a fost localizat clonat i se cunoate defectul primar = proteina anormal BOLI MOLECULARE. Numeroase (~ 10.000 dar nr. va crete) i diverse
Sursa
Frecven %o
AD %o
AR %o
LX %o
Nr. entiti
10
2,5
0,5
2500
Frecven global: 2%
unele sunt frecvente:
HF (2), ADPKD (1) sdr. cancer de sn ereditar (0,5), HNPCC (0,5), mucoviscidoza (0,2)
20,0
10,9
4,2
2,5
8544
527
9158
24,0
58
58
U.M.F IAI
Produse prin mutaii germinale n genomul mitocondrial Afecteaz producerea de energie, n muchi i nervi. 60 de boli neuro-musculare Transmisie maternal *:
mam B toi copiii B tat B toi copiii S
59
59
U.M.F IAI
Mutaiile mitocondriale
Explicaie: rata mutaiilor n ADNmit de 10-20 ori mai mare ca n ADN nuclear:
n mitocondrii se produc cantiti mari de radicali liberi de oxigen mutaii; ADN mit nu are histone i nici mecanisme de reparare.
60
U.M.F IAI
PREDISPOZIIA GENETIC:
determinat poligenic sau oligogenic (1-2 gene majore+gene modificatoare); se distribuie n populaie sub forma curbei Gauss. Cnd se depete un prag boal (Modelul distribuiei continue cu PRAG)
boal 61
61
U.M.F IAI
62
U.M.F IAI
63
63
U.M.F IAI
64
U.M.F IAI
65
U.M.F IAI
Permit medicului practician s-i orienteze diagnosticul etiologic, s rspund la ntrebarea: boala pacientului este determinat genetic ?
66
66
U.M.F IAI
a). BG sunt determinate de mutaii germinale sau somatice Metode de identificare a mutaiilor :
directe (DIAGNOSTIC GENOTIPIC)
prin analiza ADN, prin analiza cromozomilor; prin studiul efectelor primare (protein anormal) sau efectelor secundare (la nivel celular)
indirecte
67
67
U.M.F IAI
(semne i simptome)
anemie
Hemoliz splenomegalie
Ocluzie capilar
microinfarcte Hb S
68
68
U.M.F IAI
b)
BG sunt congenitale = determinate prenatal i prezente / existente la natere dar manifeste clinic n diferite perioade de via.
Congenital nu nseamn obligatoriu genetic (ex. malformaii congenitale produse de ageni externi); Bolile prin mutaii somatice nu sunt congenitale
c)
69
U.M.F IAI
d)
Genetic ereditar (exist BG care NU se transmit la descendeni, fiind letale sau afectnd reproducerea) Exist boli negenetice prezente la bolnavi din generaii diferite (ex., tuberculoza sau sifilisul ereditar- greit numite n acest caz ereditare).
e)
70
70
U.M.F IAI
ANAMNEZA FAMILIAL
AF = informaii despre: relaiile biologice i social/legale, starea fizic i mental sau funcia reproductiv a indivizilor unei familii Informaiile se nregistreaz ntr-o form standardizat = arbore genealogic (v. LP !!!)
71
71
U.M.F IAI
ANAMNEZA FAMILIAL
72
72
BOLILE CROMOSOMICE
73
U.M.F IAI
1. DEFINIIA, FRECVENA, ETIO-PATOGENIA BOLILOR CROMOZOMIALE a). Definiie: Bolile cromozomiale (B.crz.) sunt produse de anomalii cromozomiale de numr sau structur vizibile (!) la microscop (inclusiv prin FISH), deci 4 Mb.
Ex. sdr. Down (trisomia 21); sdr. Turner (monosomia X); sdr. Velo-Cardio-Facial (del 22q11).
Bolile cromozomiale sunt boli genetice dar (cu rare excepii) NU sunt ereditare.
74
U.M.F IAI
gamei (brbai/femei normale i fertile): 10 % (spermatozoizi) 25 % (ovule) embrioni (std. preimplantator) 25 % embrioni 5-8 spt. (avorturi spontane) 50 60 % nou-nscui mori 10%
TOTAL: 8 10% din toate sarcinile recunoscute clinic**
75
U.M.F IAI
structurale:
del, r, dup, i, dic, der inv, t (TRE; rob), ins.
76
U.M.F IAI
alte cauze: doar 25% din copiii cu trisomie 21 au mame peste 35 ani;
NU intervin factori externi (!); gene de nedisjuncie (?); accidente meiotice !?!
77
U.M.F IAI
del
r inv
ins
iso dic
78
Boli cromosomice - date generale Anomaliile de numr sau structur neechilibrate fenotip anormal cel mai frecvent letal avort spontan sau nou nscut mort. Incidena anomaliilor cromosomice neechilibrate la n.n. = 1/250 sindroame cromosomice
Trisomii complete Monosomie X Trisomii pariale Monosomii pariale.
79
Boli cromosomice - date generale Indiferent de cromosomul afectat, toate anomaliile cromosomice neechilibrate viabile prezint o serie de trsturi comune: tulburri de cretere i dezvoltare pre- i postnatal; retard psiho-motor; tulburri de reproducere, manifestate prin: sterilitate i/sau infertilitate (avorturi repetate sau natere de copii plurimalformai mori sau vii); sindrom plurimalformativ specific fiecrei anomalii n parte. 80
Consecinele anomaliilor cromosomice neechilibrate numerice i structurale depind de mai muli factori:
tipul anomaliei, cantitatea de material genetic activ prezent pe cromosomul implicat mrimea dezechilibrului genic; tipul cromosomului afectat (autosom sau gonosom) numrul de celule afectate; 81
Trisomii autosomale
82
SINDROMUL DOWN Determinat de trisomia 21 Incidena trisomiei 21 este de 1:650 nou-nscui vii (1,5). La nou-nscut i copil: lungime i greutate mic, hipotonie muscular, dismorfie facial - fante palpebrale mongoloide, nas mic cu narine anteversate, protruzie lingual, gt scurt, cu exces de piele pe ceaf, mini scurte i late, cu brahidactilie, pliu palmar transvers unic (pliu simian) malformaii viscerale (atrezie duodenal, imperforaie anal, defecte cardiace); retard mental i de dezvoltare (copil)
83
Hipotonie muscular
Profil facial plat Fante palpebrale oblice n sus i n afar
80
90 80
60
80 45 80 70
60
84
SINDROMUL DOWN
85
SINDROMUL DOWN
La adult: retard mental sever, hipostatur, obezitate, fante palpebrale mongoloide, pete Brushfield (pete de culoare maronie localizate pe iris) buze groase i eversate, brahicefalie, microtie, gt scurt
86
SINDROMUL DOWN
87
SINDROMUL DOWN
Etiopatogenie: trisomie 21 liber omogen (47,XX,+21 sau 47,XY,+21) 92% dintre pacieni; translocaie Robertsonian neechilibrat ntre cromosomi 21 [46,XY,-21,rob(21q21q)] sau neomologi [46,XX,14,rob(14q21q)]; 5% din cazuri; mozaic cromosomic de tip 47/46 (47,XY,+21 /46,XY) 3% din pacieni. trisomie 21 parial <0,1%.
88
Sindromul Down
Sindromul Down
Riscul de recuren al sdr. Down la urmtoarele sarcini a unei femei care are un copil cu sdr. Down este dependent de tipul de trisomie 21:
fiind nesemnificativ n trisomii prin mozaic (<0,1%) redus n trisomia 21 liber omogen (aproximativ 1%) dac unul din prini are o translocaie Robertsonian echilibrat:
moderat n trisomia 21 prin translocaie Robertsonian ntre cromosomi neomologi (10%) total n trisomia 21 prin translocaie Robertsonian ntre cromosomi omologi (100%)
dac copilul are translocaie Robertsonian, iar prinii au formul cromosomic normal risc redus ~1%
93
Prevalena sindromului Down la natere 1/ nn 1560 1350 890 545 355 280 220 170 130 97 73 55 41 30 23
20 25 30 33 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45
0,65 0,74 1,12 1,83 2,81 3,57 4,59 5,98 7,84 10,4 13,8 18,3 24,5 32,8 44,1
Sindromul Down
n absena altor cazuri de sdr. Down n familie - riscul de apariie al sindromului Down este dependent de vrsta matern
46
47 48 49 50
59,1
79,7 107 145 195
17
13 9 7 5
94
SINDROMUL PATAU
Determinat de trisomia 13; Inciden 1/5000-10.000 de nateri; Mortalitate crescut 98% mor n primul an de via; Fenotip: holoprozencefalie - defect al liniei mediene (emisfer cerebral unic, agenezie de corp calos, ventricul cerebral unic, microftalmie/anoftalmie, ciclopie/proboscis, despictur velo-palatin median) ntrziere de dezvoltare intrauterin (L, G ) defect de scalp, polidactilie, unghii nguste i convexe. malformaii cardiace i cerebrale Screening i diagnostic prenatal citogenetic triplu test + 95 ecografie fetal + amniocentez
SINDROMUL PATAU
96
SINDROMUL PATAU
97
SINDROMUL EDWARD Determinat de trisomia 18; Inciden 1/5000-8000 de nateri; Mortalitate crescut 98% mor n primul an de via; Fenotip: dolicocefalie cu occiput proeminent, dismorfie facial cu frunte teit, microretrognatism, implantare joas a urechilor, cu hipoplazia prii anterioare ("urechi de faun") mini cu degete flectate, nclecate, picioare deformate n piolet. malformaii cardiace i cerebrale, Screening i diagnostic prenatal citogenetic triplu test + ecografie fetal + amniocentez
98
SINDROMUL EDWARD
99
SINDROMUL EDWARD
100