Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mure LP7

Diagnosticul de laborator al holerei

Vibrio cholerae produs patologic este considerat potenial periculos i letal msuri de protecia muncii riguros respectate o materii fecale, lichid de vrstur o probe de ap, alimente 1. Examen direct macroscopic: scaun cu coninut fecaloid minim, aspect riziform microscopic o coloraia Gram bacil Gram negativ, subire, ncurbat, sub form de virgul, prezint un cil la un capt, necapsulat, nesporulat o examen microscopic pe fond ntunecat germeni foarte mobili testul de imobilizare cu ser imun antiO1, antiO139. Imobilizarea germenilor din preparat ridic suspiciunea prezenei vibrionului n preparat. 2. Izolarea pe ap peptonat alcalin pe mediul BSA (bile, salt, agar ) pe mediul TCBS (tiosulfat, citrat, bil, sucroz) pe geloz snge 3. Identificare - caractere morfotinctoriale (vezi examenul direct) - caractere de cultur o n mediu lichid crete foarte rapid i formeaz un vl la suprafa, mediul rmne clar o pe geloz snge colonii de tip S, mici, mate, alb-cenuii, nehemolitice - caractere biochimice o oxidaz pozitiv o pe mediul SIM mobilitate pozitiv indol pozitiv o ureaz negativ identificare antigenic o pe baza antigenului O (O1, O139) diagnosticul definitiv se confirm n laboratoare de referin

-1-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP7

Diagnosticul de laborator n infecii cu Helicobacter

H. pylori Bacterie spiralat, G-, prezint 2-6 flageli la un capt Produse patologice biopsie gastric snge pentru serologie 1. Metodele invazive gastroscopie cu recoltarea mai multor fragmente de mucoas gastric. o Conservarea probelor recoltate se face la 4C pentru maximum 4 ore sau se folosesc medii de transport n care proba poate fi meninut maximum 24 de ore. o Din fragmentul recoltat se efectueaz testul ureazei plasarea fragmentului bioptic ntr-un mediu cu uree i rou fenol. Ionii de amoniu rezultai din hidroliza ureei alcalinizeaz mediul i determin virarea culorii indicatorului se citete la 30 minute, o or, 3 ore i 24 de ore Specificitatea testului este de aproape 100% la 4 ore microscopie direct frotiu efectuat din fragmentul bioptic colorat Gram sau seciune histologic colorat Giemsa o bacterii Gram negative o ncurbate sau spiralate o prezint 4-6 flageli localizai la un pol ! atenie la Campylobacter cu morfologie asemntoare IF cultivarea bacteriei Fragmentul bioptic recoltat se omogenizeaz cu ser fiziologic Dou picturi din omogenizat se nsmneaz pe medii de cultur o suplimentate cu snge 10% o conin ageni antimicrobieni pentru a preveni contaminarea fungic i bacterian. incubare la 37C, n microaerofilie (CO2 10%, N 85%, O2 5%), peste 7 zile, cu prima citire la 3 zile. H. pylori produce colonii de tip S, translucide, de 1-2 mm cultivarea permite testarea sensibilitii la antibiotice o nu exist metod standardizat
-2-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP7

o determinarea CMI utiliznd Etest sau metoda microdiluiei) se continu identificarea prin studierea caracterelor biochimice o oxidazo pozitive o nu descompun zaharurile. o produce ureaz n cantiti mari 2. Metodele neinvazive testul respirator cu uree marcat o administrarea unei soluii de uree marcat cu 13C (neradioactiv) sau 14C (radioactiv) o sub aciunea ureazei se va elibera CO2 marcat ce se va absorbi n circulaie o CO2 va fi eliminat prin plmni, putnd fi astfel detectat i cuantificat n aerul expirat o Sensibilitatea testului variaz ntre 90-98%, iar specificitatea ajunge la 99% o Este indicat ca metod de apreciere a eficacitii tratamentului diagnosticul serologic o evideniaz prezena anticorpilor specifici, de tip IgG o se folosete testul ELISA, latexaglutinare o specificitatea este de 85-95%, i sensibilitatea de 80-95% alte metode o Western-Blot o Detectarea antigenelor H. pylori n materiile fecale test rapid imunocromatografic folosind anticorpi monoclonali

-3-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP7

Diagnosticul de laborator n infecii cu Campylobacter

C. jejuni C. coli 1. Produs patologic Materii fecale Lichid de vrstur Probe de alimente 2. Cultivare Pe medii selective cu snge, pe membrane filtrante n condiii de microaerofilie, la 42oC (nu crete sub 37oC) Izolare pe medii selective; ex: mediul MacConkey, CAMPY, Skirrow, CSM (charcoal-based selective medium agar) 3. Identificare - Cmt o Bacterii spiralate, G- Caractere de cultur o Colonii S, translucide, tendin de curgere (pictur de miere) - Caractere biochimice o NU produc ureaz o Oxidaz + o Catalaz + o Mobile (preparat nativ) o C. coli produce H2S 4. Testarea susceptibilitii fa de antibiotice - metoda difuzimetric lipsa standardizrii - determinare CMI (E-test, microdiluii)

-4-