Imunoglobulinele

Cursul 2

IMUNOGLOBULINELE = Molecule glicoproteice produse de plasmocite (limfocite B activate) ca rspuns la un imunogen = ANTICORPI

+
Amount of protein

albumin

globulins a
1

a
2

Immune serum

Ag adsorbed serum

Mobilit y
2

Funcii generale
Legare Ag

Funcii efectoare
Fixare complement Legare de celule

Caractere generale ale lanurilor imunoglobinice

1. Sunt lanuri unidirecionale

sunt aliniate);

(toate capetele aminoterminale

2. Sunt paralele ntre ele; conformaia N a ansamblului este hemihelicoidal. Lanurile uoare se nfoar n jurul celor grele. 3. Sunt alctuite din2categorii de secvene de AA: a) Secvene peptidice variabile sunt situate spre captul aminoterminal i cuprind 110160AA . Secvenele variabile ale lanurilor grele i uoare se combin i formeaz situsul combinativ pt Ag (SCAg; exist 2 SCAg pt fiecare molecul Ig). Acest situs formeaz legturi cu determinanii antigenici conformaionali prezeni la supraf. Ag native.
4

Structura generala
QuickT ime et un dcompresseur P hot o - JP EG sont requis pour visualiser cet t e im age. QuickT ime et un dcompresseur P hot o - JP EG sont requis pour visualiser cet t e im age.

Doua lanturi grele (H) si doua lanturi usoare (L)

Domeniu

Variabil

Hipervariabil

Constant

Recunoaterea

antigenic

este

funcia

domeniilor

variabile. Se pot face urmtoarele precizri:

* Oricare molec.de Ig are 2 situsuri combinative pt Ag identice. Prin urmare o molecul Ig dat poate recunoate un unic determinant antigenic conformaional. Ig sunt deci Ac monospecifici.

* Secvenele
clonele plasmocitare).

( variabile)

sunt clonotipic specifice

sunt dispuse

(relativ la

b)

Secvene nu

constante sunt

ctre dar
6

capetele carboxiterminale ale lanurilor. Aceste

secvene absolut constante, variabilitatea lor este f mic

(difer un singur AA)

Structura generala
VL Paratop Punte disulfurica VH CH1 Paratop CL

Antigene

Balama

Balama CH 2

Hidrat de carbon

CH3 Molecula imunoglobulinei reprezentata sub aspectul Y

Papaina
Pepsina

 Secvenele

constante ale lanurilor grele

(izotip)

sunt constante n cadrul unei clase

de

Ig. Dup acest criteriu distingem 5 clase

de imunogl: IgA, IgD, IgE, IgG, IgM.

Secvenele

constante nu au specificitate

clonotipic i sunt responsabile de rolurile biologice ale Ig:

+Declanarea

cascadei complementului;

+Citofilia (capacitatea Ig de a se lega de membrana celular,

mediind unele funcii (fagocitoza);

+Pasajul

transplacentar al unor Ig (IgG).

Structura generala

Structura tertiara : 2 straturi pliate b, formatiune globulara cu punte SS intra-catenara.

Structura cuaternara : monomer a Ig. Punte S-S inter-catenara. Balama et coudes. Zahar

Paratop

10 ING 2003-4-226

STRUCTURA
2 lanuri grele (Heavy) 2 lanuri uoare (Light) Puni disulfidice

ntre lanuri n cadrul lanului

11

REGIUNILE IMUNOGLOBULINELOR
Disulfide bond

Regiune Variabil
VL & VH
CL
VL CH1

Carbohydrate

Regiune Constant
CH & CL

CH2
Hinge Region

CH3

VH

Regiune balama
12

PROTEOLIZA IMUNOGLOBULINELOR

13

Fragmentele Ig: relaii structur/funcie

Fab
Legare Ag Valena = 1 Specificitate determint de VH i VL Funcii efectoare
Fc Fab
14

Papain

Fc

Fragmentele Ig: relaii structur/funcie

Legare Ag

Legare receptori Fc

Legare complement Transfer placentar

15

Organizarea conformaional a moleculelor Ig

16

IZOTIPURILE IMUNOGLOBULINELOR
= Determinani antigenici ce caracterizeaz clasele i subclasele de lanuri grele i tipurile i subtipurile de lanuri uoare

17

CLASELE DE IMUNOGLOBULINE
DUP TIPUL LANURILOR GRELE:

IgG - g IgM - m IgA - a IgD - d IgE - e

18

Subclase imunoglobuline

Subclase IgG
IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 g1 g2 g3 g4

Subclase IgA
IgA1 - a1 IgA2 - a2

19

Tipuri lanuri uoare

Kappa (k) Lambda (l)

20

Subtipuri lanuri uoare

Lanurile lambda
Lambda Lambda Lambda Lambda 1 2 3 4 (l1) (l2) (l3) (l4)

21

Caracteristici generale ale IgG IgG sunt prezente n concentraii f. mari

fa de alte izotipuri (1012 mg/ml) i reprezint 75 % din Ac circulani;
Durata

Izotipul IgG

de via a IgG este lung

(34 spt)

, cu

excepiaIgG3 care au via scurt(57 zile)

IgG

sunt distribuite n cote egale ntre

sectorul
Sunt

intravascular

cel

extravasc.
n
22

bine

reprezentate

intratisular,

lichidul interstiial

Structura IgG IgG sunt monomeri (afirmaia se refer la capacitatea unor

izotipuri de Ig de a forma complexe care conin mai multe macromolecule de Ig; luat ca atare, macromolecula Ig este evident un tetramer).

LANURILE GRELE ale IgG au urmtoarele propr. fizico-chimice: -conin 450 aminoacizi n secven; -lungimea lanurilor este de circa 130
(1 10-10 m);

-masa molecular are o valoare cuprins ntre 4550 kDa De la aceste caracteristici face excepie subclasa IgG3 ale crei lanuri grele (H) sunt mult mai lungi. Caracteristica fundamental a lan grele este organizarea multidomenial (neliniar) impus de prezena unor puni disulfurice intracatenare (4 domenii; 4 puni disulfurice).
23

IgG

Structur
Monomer

IgG1, IgG2 i IgG4

IgG3
24

IgG
Structur Proprieti

Concentraie plasmatic: cea mai mare Principala Ig n spaiul extravascular Transfer placentar nu necesit legare Ag (IgG2) Fixeaz complement (IgG4) Se leag de receptori Fc ai celulelor imune (IgG2, IgG4)

25

aminoterminale sunt constituite din secvene peptidice variabile i hipervariabile. Celelalte 3 domenii sunt constante i se noteaz CH1CH3 (Constant Heavy). ntre CH1 i CH3 exist zona-balama(engl. hinge) notat ZB. ZB este poriunea din lanurile H(grele)dotat cu maximum de flexibilitate, ceea ce favorizeaz contactul cu determinanii antigenici (favorizeaz recunoaterea antigenic). ZB mai este important i datorit faptului c la nivelul ei cele 2 lanuri grele se asociaz prin puni disulfurice intermoleculare. n funcie de nr. i poziia acestor puni disulfurice, IgG se pot diferenia n subclase (subizotipuri) IgG:

(buclele)
26

Domeniile

 IgG1,

cu 2 puni disulfurice localizate ntre punctul de intersecie i domeniul CH2; IgG2, cu 4 puni situate 2 cte 2 de o parte i de alta a punctului de intersecie IgG3, cu 15 puni disulfurice situate ntre punctul de intersecie i domeniul CH2; lanurile grele ale acestui subizotip au mas molecular > i sunt mai lungi; IgG4 are 2 puni disulfurice, fiecare dintre ele fiind situat de cte o parte a punctului de intersecie.
27

 Exist

o relaie de proporionalitate invers ntre nr. de puni disulfurice ale unui subizotip i durata de via a subizotipului respectiv: IgG3 are viaa cea mai scurt. Pe msur ce nr de puni i susceptibilitatea IgG de a fi alterate sub aciunea enzimelor i a radicalilor liberi de oxigen eliberai n cursul reaciilor inflamatorii acute ce nsoesc RIU
(Rspuns Imun Umoral).
28

LANURILE UOAREau urmt.caracteristici fizicochim: 210 AA;lungime de 60 ;mas molec. de 22 kDa Particulariti ale lan uoare L: sunt organizate multidomenial, cu cte 2 bucle pe fiecare lan uor. Domeniile aminoterminale sunt variabile sau hipervariabile. n funcie de structura domeniilor CL (Constant Light), lanurile uoare prezint 2 varieti: CL k cu o frecven de 2/3 din totalul IgG;CL l. Diferenele de structur primar ntre cele 2 varieti sunt minime (23 AA). Din p.v. funcional IgG prezint 2 fragmente: Fab (Fragment antigen-binding) responsabil de legarea Ag Fc(Fragm. constant) responsabil de func. biologice ale Ig
29

 Fab

are ca funcie recunoaterea Ag. Aceste fragmente recunosc: -Ag corpusculate (bacterii, virui, parazii de mici dimensiuni) prin contact cu determinanii antigenici conformaionali -Ag solubile (peptide); -Ag membranare. SCAg (situsul combinativ pt.Ag) este o cavitate de 30x10x6 rezultat din plicaturarea VHVL (Variable Heavy -Variable Light; domeniile variabile i hipervariabile aminoterminale ale lanurilor Ig). SCAg permite att acomodarea Ag ct i angajarea de legturi prin complementaritate ( stereochimic) cu acesta. Plicaturarea este realizat prin puni disulfurice intradomeniale ale VH i VL (3 puni disulfurice ale VH i 3 ale VL), rezultnd cte 3 plicaturi pe domeniu.
30

Variabilitate izotipica
IgA (H : a1 ou a2)

IgG (H : g1, g2, g3, g4)

S IgD (H : d)

IgE (H : e)

IgM (H : m1, m2)

31

Lant usor (L : k

l)

Situs anticorpi: paratopi

Situsul anticorpilor Ig (paratopi) : VH + VL. Comporta sub-regiuni numite hipervariabile incluzand partile numite CDR (complemantary-determining site). Contactele importante intre antigene si anticorpi se realizeaza la nivelul CDR. Intre CDR, portiunile conservate reprezentand balamaua (framework) formate de straturi pliate b.

Lant L
Variabilitate

Amino acid

Lant H
32 ING 2003-4-228 Amino acid

Variabilitate

n VH i VL distingem 2 categorii de secvene: 1. Secvene care particip la stabilirea unor legt cu Ag. Acestea sunt alctuite din 815AA; sunt situate n vrful buclelor, fiind astfel aduse mult spre interiorul cavitii SCAg(situsul combinativ pt.Ag). Aceste secvene se noteaz CDR (regiuni determinante ale complementaritii). Secvenele CDR se noteaz pt fiecare lan (VH i VL) cu CDR1CDR3 (cu CDR1 situat la
captul aminoterminal).

2. Secvene care nu particip la realizarea de legturi cu Ag. n limba englez aceste segmente se numesc
<framework regions> (romn <osatur>).

Struct CDR: cele 6 secvene CDR constituie paratopul, adic substructura SCAg direct implicat n recunoaterea antigenic (<Paratopul recunoate epitopul> )
33

Functii biologice a imunoglobulinelor

Fonctii efectoare (partea C)

Functiile efectoare dependente de antigen

Activarea complementului Opsonizare

Functii efectoare independente de antigen Citotropism (citofilie) Trecere transplacentara Catabolism Asocierea proteinei A cu stafilococul

34 ING 2003-4-240

Functii biologice a imunoglobulinelor

Recunoastere (paratop) Recunoasterea antigenului

Poche de lpitope

35 ING 2003-4-238

Functii biologice a imunoglobulinelor

Recunoastere (paratop) Recunoasterea antigenului

Fab

Lant L CDR1 CDR2 CDR3

Lant H CDR1 CDR2

V (%) CDR3 VL

VH

A B C D E F

+ + + + -

+ +

+ + + + + +

+ + + + +

+ + + + + +

+ + + + + +

47 35 26 22 43 46

53 65 74 78 57 54

36 ING 2003-4-237

Paratopul are ca particularitate funcional specificitatea legturilor Ag-Ac, care ine de 3 parametri mai importani: -natura AA din CDR (regiuni determinante ale
complementaritii) (i ordinea n care acetia sunt aranjai);

-numrul de AA prezeni n fiecare CDR; -poziia n spaiu a celor 6 CDR Specificitatea legturilor Ag-Ac este absolut. Un singur determinant antigenic conformaional (notat DAgC) poate fi recunoscut de un singur SCAg (situs combinativ pt.Ag) care face parte dintr-o singur clas de Ig secretat de o singur clon de Ly B Gradul de diversitate al DAgC este f mare (106109) i implic existena unui nr la fel de mare de clone (diferite) de Ly B. Nr de celule per clon este f mic, de la cteva zeci pn la cteva sute. RI este posibil ca urmare a faptului c n cursul RI fiecare 37 clon activat se multiplic (fenomenul de expansiune clonal).

Plicaturarea VH-VL favorizeaz net recunoaterea antigenic i poate s transforme buclele VH i VL n DAgC (determinant antigenic conformaional), deoarece prin vrful buclelor pot fi aduse n continuitate,diverse secvene polipeptidice,care fie variaz f.puin, fie sunt unice. Aceste structuri poart denumirea de idiotopi i reprez partea antigenic a oricrui situs combinativ pt Ag. Ansamblul (suma) idiotopilor reprezint IDIOTIPUL situsului combinativ pt Ag,adic partea care confer SCAg (situs combinativ pt.Ag) specificitate antigenic. SCAg are 2 proprieti diferite: -este o structur de recunoatere a DAgC; -este o structur antigenic n sine. Aceast proprietate face ca rspunsurile declanate ca urmare a unei stimulri antigenice s fie repetate
(n cascad).
38

Cascada se (auto)ntreine pn cnd se genereaz imaginea intern (copia intern) a Ag. Copia intern blocheaz repetarea rspunsului. Copia intern: -poate avea un efect favorabil, jucnd un rol important n retrocontrolul RI -poate avea un efect defavorabil n patologia autoimun, cnd mimeaz aciunea autoAg. Fc este rspunztor de func. biologice ale Ig: 1. Prin partea constant IgG pot activa pe cale clasic complementul. Astfel, domeniul CH2 activeaz C1q, dar numai dup ce a avut loc recunoaterea antigenic.n urma recunoaterii antigenice au loc modificri conformaionale care duc la exteriorizarea unei secvene de 60 AA de la nivelul CH2.

39

2.Fixarea IgG de suprafaa unor cel se realizeaz prin domeniul CH3, indirect, cu ajutorul receptorilor FcgR . Exist 3 categorii de FcgR: a) CD 64 sunt receptori de nalt afinitate pt. IgG. Preferenial fixeaz IgG1, IgG3, mai puin IgG4 i deloc IgG2. Ca distribuie, CD 64 este prezent pe monocite, macrofage i PMN neutrofile Natural Killer (NK). - Pe suprafaa macrofagelor joac un rol important n captarea Ag opsonizate de IgG

(care vor fi distruse prin citotoxicitate intracelular).

- n cazul neutrofilelor, CD64 joac un rol important n captarea Ag.opsonizate de IgG, dar neutrofilele nu pot endocita Ag corpusculate
40

Aceste Ag sunt distruse prin citotoxicitate extracelular ADCC (citotoxicitate celular anticorp-dependent). Ag este distrus prin activarea celulelor NK cu eliberare de enzime, radicali liberi de oxigen i perforin. Aceti factori altereaz f grav membr Ag corpuscular, avnd drept consecin liza osmotic a Ag respectiv. b) CD 32 sunt receptori de joas afinitate pt IgG, dar fixeaz toate izotipurile deIgG. Distribuia CD 32 in: -monocite i macrofage; -granulocite de toate tipurile(PMN neutro-, bazo- i eozinofile); -sinciiotrofoblast.

41

Funciile CD 32:

-capteaz Ag corpusculate (opsonizate de IgG); -au rol important n epurarea complex imune care apar n oricare RIU; -n granulocite au rol n ADCG; -n placent: transfer transplacentar al IgG1. c) CD 16 sunt receptori de joas afinitate pt IgG (toate izotipurile), cu o distribuie restrns la celulele NK. Particip la ADCG (citotoxicitatea extracelular) exercitat de celulele NK.
42

Particulariti funcionale ale subizotipurilor IgG

IgG1

reprezint 65 % din totalul IgG: - activeaz intens cascada complementului pe calea clasic; - este fixat de toate tipurile de FcgR
(CD 64, CD 32 i CD 16).

- traverseaz placenta i contribuie la imunizarea pasiv a NN ; IgG2 reprezint 25 % din totalul IgG: -activeaz f slab complementul C; -nu sunt fixai de FcgR (CD 64); -nu traverseaz placenta.
43

Structura clasei imunoglobulinelor:

Variabilitate izotipica

IgA (H : a1 ou a2) IgG (H : g1, g2, g3, g4)

J IgD (H : d)

IgE (H : e) IgM (H : m1, m2)

44 ING 2003-4-231

IgG3 reprezint circa 10 % din totalul IgG:

-sunt Ac IgG cu cea > putere de activare a C;

-sunt fixai de oricare tip de FcgR; -nu traverseaz placenta.

IgG4 reprezint circa 5 % din totalul IgG: -nu activeaz sub nici o form complementul C; -sunt fixai slab de FcgR; -nu traverseaz placenta.

Anticorpii IgG sunt caracteristici RIU secundar.

Secreia de IgG este stimulat de IL4 produs de limfocitele T-helper 2 (Th2).
45

Izotipul IgM

IgM sunt prezente n concentraii mici comparativ cu IgG (1,52 mg/ml). Sunt Ac cu via scurt (710 zile).Sunt distribuii predominant intravascular i mai puin extravascular. Sunt pentameri Structura IgM este pentameric; fiecare monomermacromolecul IgM se asociaz la o glicoprotein (pies de jonciune) cu masa molecular de circa 960 kDa. Lanurile H ale IgM sunt mult mai lungi dect cele ale IgG; au cte un domeniu variabil i 4 domenii constante. Funciile IgM: IgM sunt importante n aprarea antibact i antiviral,realiznd o aglutinare bacteriilor i a virionilor Sunt Ac cei mai activatori de C (n aceast privin ordinea descendent este IgM> IgG3> IgG1), deoarece sunt pentameri i n plus n fiecare lan H exist cte2 domenii activatoare de C (CH2 i CH3; n cazul IgG, numai CH2 este activator de C). IgM sunt Ac. caracteristici RIU primare.
46

IgM

Structur
Pentamer Extra domeniu (CH4) Lan J

Lan J

CH4

47

IgM
Structur Proprieti

Concentraie plasmatic: imediat dup IgG Prima Ig produs de fetus i de ctre celulele B Fixeaz complement

48

Fixarea C1 de ctre IgG i IgM

49

IgA

Structur
n plasm - monomer n secreii (sIgA)
Dimer Lan J Component secretorie

Component secretorie

Lan J

50

IgA
Structur Proprieti

Concentraie plasmatic: dup IgG Principala Ig n secreii (imunitatea mucoaselor)

lacrimi, saliva, suc gastric, surfactant pulmonar

Nu fixeaz complement Se leag de receptorul Fc al unor celule imune

51

IgD

Structur
Monomer Pies coad (tail piece)
Tail Piece

52

IgD
Structur Proprieti

Concentraie plasmatic: pe locul trei Ig prezent pe suprafaa celulelor B Nu fixeaz complement

53

IgE

Structur
Monomer Extra domeniu (CH4)

CH4

54

IgE
Structur Proprieti

Concentraie plasmatic: cea mai redus

Se leag de bazofile i mastocite (nu necesit legare Ag)

Reacii alergice Parazitoze (Helmini)

Se leag de receptorul Fc al eozinofilelor

Nu fixeaz complementul

55

IMUNOGLOBULINELE

genetic, diversitatea Ig
56

Genele imunoglobulinelor
Localizarea cromozomial a genelor pentru imunoglobuline: lanuri grele: cromozom 14q32 lan uor k: cromozom 2p11-12 lan uor : cromozom 22q11-12

57

Genele imunoglobulinelor

Fiecare limfocit exprim pe suprafa un receptor de Ag specific. Genele sun rearanjate din repertoriul de segmente genice:

58

Segmente genice

Regiunile variabile ale lanurilor grele i uoare au trei regiuni hipervariabile fiecare (complementaritydetermining regions, CDRs) Regiunea variabil a lanului greu este codificat de ctre trei segmente genice: V (variabil): codific reg variabila a lant greu D (diversitate): segment de diversitate. J (joining): segment de legtura al lantului greu

59

Mecanism de rearanjare

Rearanjarea = un segm de gena dintr-o regiune se disloca in alta regiune

un nr de secvente se pierd intr-o regiune dar se reutilizeara in alta structura unei noi gene functionale lant nou ARN o noua Ig

60

Rearanjamentul genelor Ig:

(n timpul dezvoltrii limfocitelor B)

61

Clasificarea RIU
I.RIU primare au 3 caracteristici mai importante: 1.Se produc numai IgM deoarece la cooperarea cu APC primele celule care vin sunt Th tip p, care produc IL2, care nu stimuleaz comutarea izotipic de la IgM la IgG (IgM este <default>). 2. Concentraiile IgM sunt moderat deoarece clonele limfocitare B i T care particip la RIU primar sunt imature i neexpansionate. 3. Durata este limitat deoarece rspunsurile se realiz. pe clone imature, fr memorie imunologic. Deasemenea Ac IgM au via scurt deoarece conin un numr f. mare de puni disulfurice.

62

 II.RIU

secundare apar la al 2-lea contact cuAg (n2): 1. La contacte repetitive cu acelaiAg, la cooperarea cu APC particip Th2 care produc cantiti mari de IL-4 care activeaz comutarea izotipic. 2. Titrurile sunt mari deoarece la cooperarea cu APC particip clone mature, expansionate, cu memorie imunologic. 3. Durata este crescut deoarece: -Ac. IgG au via lung (excepie IgG3); -Clonele T i B secretante au memorie imunologic
63

64