Celulele prezentatoare de antigen -APC

CURSUL -VII

Antigen Presenting Cells (APC; celulele prezentatoare de Ag.) sunt celule cu rol esenial n generarea unor RI umorale i celul. fa de Ag. timodependente. Au 3 funcii importante dpv imunologic: sunt responsabile direct de declanarea RI

au rol esenial n ntreinerea (n timp) a RI;

particip la controlul rspunsului imun.

APC sunt implicate ntr-un fenomen de cooperare celular cu 2 categorii de limfocite:

2

1.Limfocite cu rol imunoreglator, clasificate

n dou subvarieti:
T-helper cu rol n amplificarea RI;

T-supressor cu rol n inhibare RI.

2.Limfocite cu rol efector (care particip la realizarea efectiv a RI): Limfocite B pentru RI umoral;

Limfocite T citotoxice pentru RI celular.

3

Ag timodependente sunt preluate de APC, apoi internalizate i prelucrate. n urma acestei prelucrri rezult fragmente antigenice (epitopi) care vor fi expuse pe membrana APC n complex cu molecule MHC
(MHC tip II; Major Histocompatibility Complex type II).

Sub aceast form epitopii sunt <prezentai> ambelor subvarieti de limfocite cu rol imunoreglator (Th, Ts), apoi epitopii sunt prezentai unei singure subvarieti de limfocite cu rol efector, fie B, fie T (nu sunt prezentai ambelor subvarieti).
4

Celulele APC au urmtoarele caracteristici: dintre toate celulele participante la cooperare, APC sunt primele i singurele celule ce vin n contact cu antigenele (Ag) native; sunt singurele capabile s prelucreze Ag native genernd fragmente antigenice (epitopi); doar aceste fragmente sunt recunoscute de limfocite (i n special de limfocitele T);

APC sunt substratul morfologic al cooperrii celulare.

5

Clasificarea APC: APC profesionale: macrofage;

celule dendritice;
limfocite B (n anumite condiii pot funciona ca APC). APC ocazionale: PMN (dintre acestea sunt mai importante neutrofilele);

Celulele endoteliale;
Celulele epiteliale.
6

1. APC profesionale macrofagele Macrofagele sunt celule de origine medular; mduva (osoas hematopoietic) elimin continuu n circula. periferic elemente tinere, nematurizate Dup un scurt tranzit acestea trec n esuturi, fiind atrase de anumii factori n esuturi se vor maturiza sub influena unor factori cum ar fi IFN (gamainterferon), transformnduse treptat n macrofage. Macrofagele pot ndeplini funcia de APC (trecnd prin anumite transformri) Transformarea macrofagelor n APC a fost mprit n 5 etape ( notate AE n curs).
(figurate sanguine) (monocite). (2436 h), (chemotactici). 7

A. Captarea antigenelor: macrof capteaz Ag. corpusculate (e. g. bacterii, virui, parazii de dimensiuni mici); macrof nu capteaz niciodat Ag solubile captarea este un proces imunologic nespecific;
captarea este un proces imunologic mediat receptorial

A.1 Ag. corpusculare captate de macrofage pot fi mprite n 2 categorii: a) Ag. corpusculare opsonizate (adic <nvelite> de factori imunologici solubili); opsonizarea favorizeaz net captarea Ag i endocitarea lor. Opsoninele sunt reprezentate de: I) C3b - prezent n mod continuu n lichidul interstiial, n cantitate mic;generarea C3b se face prin funcie continu a cii alternative de activare a C; C3b are o f pronunat tendin de fixare a oricror suprafee membranare non-self (adic C3b, considerat nespecific, se leag specific i
preferenial de structuri non-self). 8

Macrofagele au receptori capabili s lege C3b; aceti receptori se vor nota cu CR (Complement Receptor). II) Ig (mai ales IgG) prezente n lichidul interstiial n concentraii >. Ig se ataeaz pe membr. bacterian datorit recunoaterii unor Ag de supraf exprimate pe respectiva membran. Poriunea Ig care se leag la determinantul antigenic a fost notat Fab (Fragment antigen-binding). Fragmentul Fc (Fragment constant) al Ig astfel legate este liber n lichidul interstiial. Captarea are loc rapid prin legarea Fc la receptorii FcR ai macrofagelor (spre deosebire de C, Ig sunt specifice n ceea ce privete Ag legat prin
structura Fab, care este complementar cu struct. antigenic recunoscut; pt 2 Ag. diferite, Fab corespunztor nu poate fi acelai; Fc este acelai indiferent de Ag recunoscut de Fab). 9

A.2 Captarea este nespecific pt c macrofagele nu au contact direct cu determinanii antigenici de suprafa, contactul fcndu-se (exclusiv) prin C3b, Fc i radicali F/M (care sunt structuri constante); B. Endocitarea Ag corpusculare captate este un proces energodependent (<activ>); endocitarea presupune modificarea conformaiei membranare cu formare de pseudopode i vezicule de endocitare. C. Prelucrarea/procesarea Ag endocitate. n lizozomi, sub ac. proteazelor i hidrolazelor are loc o proteoliz parial n urma creia rezult fragmente (epitopi). Ulterior sunt selectai epitopii imunodominani (cei mai imunogeni). D. O parte din epitopii selecionai sunt conservai n macrofag i servesc la ntreinerea n timp a RI. Cantiti mici sunt eliberate i menin stimularea antigenic.
10

E. Cea > parte din epitopii selectai se cupleaz n macrofag cu molecule MHC I sau MHC II, rezultnd complexe MHC I (sau II) epitop care vor fi expuse pe membrana macrofagului. Primele celule care vin la cooperare sunt limfocitele T (mai exact subsetul Th). Limfocitele Th pot recunoate epitopii doar n complexe MHC II epitop.Capacitatea de prezentare este condiionat de capacitatea macrofagelor de a sintetiza molecule de tip MHC II. De ex: 70 % din macrofagele peritoneale sunt capabile s sintetizeze MHC II; 50 % din macrof splenice sunt capabile s elaboreze MHC II maxim 25 % din macrofagele hepatice sunt 11 capabile s exprime MHC II.

Macrofagele care elaboreaz MHC II sunt implicate n generarea unor RI. Cele care nu au aceast capacitate nu particip la generarea unor RI dar sunt implicate doar n reaciile inflamatorii locale. Etapele limitante ale procesului de transformare macrofag-APC sunt A i E:
rata captrii depinde de nr de receptori CR, FcR funcionali;

prezentarea depinde de capacit. de sintez a MHC II.

Funcia de ansamblu a macrof n RI: capteaz Ag i le transport ctre gangl locoregionali unde le prezint limfocit Th aflate n aria timodependent a ganglionilor
(paracortexul ganglionar). 12

I.2 APC Profesionale- Cel dendritice ( n cadrul seciunii I.2 notaia va fi CD) sunt cel. de origine medular care n condiii de repaus emit prelungiri citoplasmatice (pseudopode). Ansamblul pseudopodelor are urmtoarele caracteristici: pseudopodele sunt foarte numeroase; sunt foarte fine, subiri, efilate; sunt f. lungi (lungimea min. este de 56 ori diametrul cel). Aceste caracteristici dau celulei un aspect similar celor dendritice din SNC. n ceea ce privete funcia APC, despre celulele dendritice se poate afirma c: n general exprim receptori pt opsonine,deci pot capta Ag n general pot sintetiza MHC II. Celulele dendritice (CD) sunt o clas foarte heterogen, cu 6 subtipuri, grupate n 3 subuniti mai importante (notate
IIII n tabelul de mai jos). 13

CR

FcR + + -

MHC II +++++

I.

CD intratisulare (nelimfoide) + 1. cel. Langerhans

2. CD interstiiale II. CD limfoide 3. IDC 4. CD foliculare*
Grup/Subtip CD

+ -

+++

+++

III. CD intracirculatorii 5. CD sanguine

6. CD vluroase

14

* CD foliculare funcioneaz ca filtre locale pentru antigene.

Grupa I 1. CD din subtipul 1 se gsesc: n submucoasa bucal; tractul digestiv; colul uterin. Funcia lor de ansamblu este de a capta Ag i a le transporta n gangl locoregionali, n paracortexul acestora prezentndu-le limfocitelor Th. 2. CD interstiiale au morfologie similar celulelor Langerhans. Sunt foarte larg distribuite (se gsesc n toate spaiile interstiiale) Grupa II este format din celule localizate n organele limfoide secundare. 3. CD interdigitate (engl. IDC) au aspect tipic dendritic i sunt distribuite n ariile timodependente din gangl. limfatici i splin: paracortex ganglionar; pars interna a splinei (strat limfoid periarteriolar intern). 15

4. CD foliculare au aspect tipic dendritic i sunt distribuite n foliculii limfoizi din organele limfoide sec (foliculi limfoizi= aglomerri de limfocite B), adic n ariile bursodependente din organele limfoide: cortexul ganglionar; pars externa a splinei. CD intracirculatorii

5. CD sanguine ca morfologie sunt ovalare (n circulaie). Sunt ntlnite rar.

6. CD vluroase (engl. veiled) sunt aplatizate i ovalare. Pe lateral prezint f multe franjuri i ondulaii. Sunt prezente numai n circulaia limfatic, mai ales n limfaticele aferente. Fenotipic sunt CR (-), FcR (-), 16 MHC II (-).

Se consider c toate aceste cel. dendritice (16) nu reprezint entiti morfologice distincte, ci sunt principalele etape ale traficului celulelor dendritice n organism. Toate CD au aceeai origine (mduva osoas hematogen) i n funcie de esutul pe care l parcurg i modific caracterele morfologice i fenotipice. Traficul i filiaia celulelor dendritice n organism se desfoar n patru sectoare: mduva, sectorul tisular, sectorul limfoid i sectorul vascular.
17

CDS I. Calea intratisular: a. n esutul cutanat devin cel Langerhans: CR(+), FcR(+); se pot activa, caz n care transport Ag spre gangl locoregionali prin limfaticele aferente, unde devin CD vluroase (CDV); n paracortexul ganglionar aceste CDV devin IDC, care sintetizeaz n cantiti mari MHC II prin care prezint Ag ctre limfocitele T helper (30004000 Th: 1 IDC) inclavate printre prelungirile IDC. b. n spaiile interstiiale din organele limfatice devin CD interstiiale, care exprim CR i FcR; prin activare migreaz i vor transporta Ag pe 2 ci: 1. Ctre gangl locoregionali CDV- IDC (n maniera descris
mai sus la litera a.);

2. Migreaz antidromic - n circulaie redevin CDS, trec n splin devenind IDC n PALS interna; IDC coopereaz cu limfocite T.
18

II. Traficul limfoid presupune trecerea direct: n ganglioni apoi n cortexul ganglionar, unde are loc transformarea n CDF; prin artera lienal n PALS externa cu transformare n CDF.

I.3 APC Profesionale-Limfocitele B pot funciona ca APC deoarece exprim receptori de captare a antigenelor (CR, FcR, BCR) Limfocitele B capteaz doar Ag solubile. n stadiul de limfoblast, ele elaboreaz cantiti crescute de molecule MHC II.
19

Moleculele prezentatoare de antigen (MHC)

MHC I sunt distribuite ubicuitar, cu excepia hematiilor. Ca structur sunt heterodimeri . Lanul are o poriune transmembranar pe cnd este strict extracel. Aceste lanuri prezint organizare multidomenial datorit unor legturi disulfurice intracatenare. Lanul
are 3 domenii 13 iar lanul are o singur bucl:

domeniile 1, 2 sunt constituite din secvene hipervariabile (difer de la un tip celular la altul) i de aceea sunt numite domenii polimorfe ale MHC I; domeniul 3 are o structur primar constant fa de tipul celulei (independent de tipul celulei pe a crei membran este exprimat molecula
MHC I analizat);

domeniul are o structur primar constant la toi indivizii unei specii date. 20

(fig. 4)

21

Funcii: Domeniile 1, 2 sunt situate simetric i se asociaz formnd o cavitate de dimensiuni reduse n care este inclavat un Ag (= antigen endogen) = situs combinativ pt Ag. Domeniul 3 se comport ca un Ag self f imunogen, fiind implicat n declanarea unor reacii de respingere a grefelor de organ/ esut. Gena MHC I este situat pe autozomii 6. MHC II sunt distribuite doar pe membranele celulelor ce particip la realizarea RI: APC, limfocite B i limfocite T. Ca structur sunt heterodimeri , ambele lanuri fiind transmembranare. Fiecare lan prezint cte 2 domenii (<bucle>) iar poziionarea lor simetric fa n fa d moleculei un aspect Ig-like.22

Domeniile aminoterminale 1,1 sunt domeniile polimorfe ale moleculei MHC II (variaz mult de la o clon celular la alta). Domeniile carboxiterminale 2,2 au structuri primare constante (mai ales 2) i n consecin se numesc domenii monomorfe. Domeniile polimorfe se asociaz formnd caviti n care este inclavat pt prezentare un Ag exogen= situs prezentator pt Ag. Domeniile monomorfe (mai ales 2) au rol n declanarea unor reacii de respingere a grefelor i n cooperarea APC-Th genele MHC II sunt situate pe perechea 6 de autozomi. Mecanismele prezentrii selective a Ag pe moleculele MHC: dei ambele categorii de molecule MHC sunt sintetizate n acelai subsector celular (RER), ele prezint difereniat Ag pt c se cupleaz cu acestea n 23 subsectoare celulare diferite.

24

n cazul MHC I se sintetizeaz iniial lanul apoi . Prin cuplarea acestora rezult molecula MHC I i are loc modificarea conformaional a lanului , cu deschiderea larg a situsului combinativ pt Ag. Astfel, moleculele MHC I pot fixa diverse Ag : proteine endogene intracitoplasmatice - autoAg sau neoAg sau
fragmente rezultate din prelucrarea unor microorganisme

cu habitat sau dezvoltare intracelular

( n acest al treilea caz, nu se poate afirma c respectivele proteine au provenien endogen, nefiind biosintetizate pe o matri ARN provenit din transcrierea unei secvene ADN proprii).

Prin prelucrarea respectivelor polipeptide n citopl, sub influena proteozomilor rezult epitopi care prin anumite sisteme transportoare (vezi figura mai sus: TAP 1,2= transportor asociat prezentrii de antigen; ABC= casetele de legare a Ag) ajung n RER (reticul endoplasmic rugos).
25

ncrcarea moleculelor MHC I cu epitopi implic o nou modificare conformaional, MHC I desprinzndu-se de pe perete i migrnd pe membran. n cazul MHC II se sintetizeaz pe lng lanurile i i un lan II inhibitor (IIi) care <astup> (blocheaz) situsul de prezentare a Ag. Lanul IIi trece printr-un dublu clivaj proteolitic: 1. ndeprtarea captului aminoterminal elibereaz situsul combinativ pt Ag, care poate fixa diverse Ag (Ag
exogene din procesele de fagocit. n endozomi)

2. Al 2-lea clivaj ndeprteaz complet lanul IIi iar moleculele MHC II devin neancorate pe pereii endozomali, trecnd pe suprafaa membranar, unde pot fi recunoscute de limfocitele Th.
26