SISTEMUL COMPLEMENT

Cursul Nr. 3
1

SISTEMUL COMPLEMENT
Este un sistem multienzimatic format
din 15-20 componente, prezente in ser,

care se activeaza succesiv n cascad

Istoric
Descoperit 1894 - Bordet = un grup de aproximativ 15 proteine serice cu rol in imunitate. locuri de producere: C3-ficat, C4 macrofag dispare prin inclzire la 56C/30 min activarea are loc in cascada pe cale clasica sau pe cale alternanta

Proteinele din sistemul complementului

(nomenclatur)

C1(qrs), C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9 factori B, D, H, I, properdina (P) Lectina de legare a manozei (MBL), proteaze serice asociate MBL (MASP-1 MASP-2)

C1 inhibitor (C1-INH, serpina), C4-binding protein (C4-BP), decay accelerating factor (DAF),
C1 receptor (CR1), proteina-S (vitronectina)

FUNCIILE COMPLEMENTULUI FAVORABILE:

Opsonizare favorizeaz facocitoza Atragerea i activarea fagocitelor Liza bacteriilor i a celulelor infectate Reglarea rspunsului prin anticorpi Clearance al complexelor imune Clearance al celulelor apoptotice

DEFAVORABILE:
Inflamaie, anafilaxie

Rolul sistemului complement

1.

Definitiveaz aciunea Ac. asupra Ag. Functia Ac. este aceea de a recunoaste Ag. declansatoare, fara s aib un efect decisiv asupra Ag. (distrugerea,indepartarea Ag.) Realizeaza recunoaterea imunologic nespecific a structurilor nonself. Rezistena organismului fa de infecii prin liza microorganismelor patogene, opsonizarea bacteriilor, chemotactism pentru celule.
Dif. reacii imunologice si imunopatologoce Clearance-ul complexelor imune
6

2.

3.

4. 5.

Distrugerea Ag. corpusculare este rezultatul recunoasterii antigenice specifice exercitate prin Ac si necesit prezena si activarea C. Vor fi parcurse urmtoarele etape:

Ag corpusculate (bacterii, virui, parazii, celule somatice devenite antigenice) prezente in lichidele interstiiale, exprim pe suprafaa lor diveri Ag conformaionali recunoscui n prima etap de IgM i IgG. Recunoaterea se realizeaz prin captul Fab al IgG sau IgM care angajeaz legturi cu structurile antigenice de suprafa care duc la apariia unor modificri conformaionale transmise de la Fab ctre Fc cu exteriorizarea situsului activator de C al acestor Ig i cascada C
7

ndeprtarea Ag solubile necesit particip. C.

La finele rspunsului imun umoral (RIU) normal, Ac rezultai difuzeaz n ntregul organism, venind n contact cu Ag declanator
Ca urmare a recunoaterii Ag specifice, se formeaz complexe imune (CI) cu dimensiuni mari, fiind organizate ca un fel de plase/nvoade, care fixeaz n ochiuri diverse elemente solubile printre care componenta C3b generat prin funcia continu i la un nivel sczut de activitate a cii alterne a C.
8

Fiind ncrcate cu C3b,CIcomplexe imune pot fi ndeprtate prin 2 mecanisme n funcie de locul formrii lor i locul ptrunderii Ag n organism. Dac Ag a ptruns direct intratisular i CI s-au format aici,ele pot fi ndeprtate de macrofagele rezidente care au pe membranele lor receptori CR pt C Dac Ag a ptruns direct n circulaie, niar CI s-au format aici,ele sunt fixate sau ataate n prima etap pe membranele eritrocitelor care exprim CR(receptori pt.C) pe membr. lor , pt ca ulterior sub aceast form s fie transportate la SRE din splin sau ganglioni unde sunt preluate i distruse de macrofagele de la acest nivel.
9

A 2 funcie major a C recunoaterea imunologic nespecific a structurilor nonself, functie bazat pe

proprietatea componentei C3b de a se ataa de membranele

celulare n mod selectiv,adic dependent de natura lor

C3b se depoziteaz numai pe membrane nonself ntruct acestea, fa de cele self, nu sunt protejate anticomplement. Deoarece membranele nonself sunt prin definiie structuri antigenice aceast depozitare echivaleaz cu o recunoatere imunologic nespecific.
10

Funcia de ansamblu a sist.C are 4 caracteristi generale: 1. C funcioneaz pe principiul cascadei.

n mediile lichidiene fiecare factor al C se afl sub form de enzim inactiv sau de zimogen; acesta ,o dat activat ntr-o etap anterioar, este convertit n enzim activ care acioneaz asupra altui zimogen cu activarea enzimei corespunztoare, care la rndul su acioneaz asupra altui zimogen.
2.

Conversia zimogenului n enzim activ se face prin proteoliz limitat, rezultnd 2 fragmente:
1. Un fragment mic notat convenional cu a

2. Un fragment mare b care n cadrul reaciei C poate funciona ca enzim sau cofactor.
11

Majoritatea reac. C se desfoar pe suprafaa membranelor celulare acceptoare de C. n timp ce fragmentele mici a rmn n faz fluid cu sau fr functii biologice (vasodilataie, permeabilitii capilare,chemoatracia), fragm mari b se depoziteaz pe membr celulare, unde prin
3.
depuneri succesive formeaz complexe macromoleculare.

O parte din reac.C se desfoar comutarea specificitii enzimatice

4.

prin

prin modificarea specificitii de substrat aceleai enzime acioneaz asupra unor noi zimogeni cu continuarea reaciilor din cascada c.

12

Nomenclatura componentelor C reflect ordinea de activare n cascada enzimatic. Fiecare component este desemnat prin litera C urmat de un numr. Complexul C1 este alctuit din 3 proteine diferite C1q, C1r, C1s. Formele activate sunt marcate cu asterix (C1r*). Adugarea unei litere mici desemneaz un fragment activ generat prin proteoliza precursorului inactiv (C3a). Multe fragm. active sunt foarte instabile i se degradeaz spontan sau sub aciunea proteazelor din ser, notate cu i (iC3b)
13

Complementul : rol biologic

Lizare si neutralizare

Rolul C3
C3a : anafilatoxina
C3b : opsonina (termolabila) dupa fixarea pe CR1

14
ING 2003-4-305

Complement : rol biologic

Alti factori
C4a si C5a : anafilatoxina (inflamatie)

C3a, C567 : Chimiotactism

C3a si C5a activeaza leucocitele : distrugeri microbiene si cresterea inflamatiei

15
ING 2003-4-307

Evenimentul central al cascadei C este reprezentat de conversia sub ac. C3 convertazelor a zimogenului C3 n C3b, aceste enzime fiind generate pe ambele ci. Calea clasic a C are o funcionalitate episodic fiind declanat de prezena de complexe imune CI ataate membranelor celulare. Calea altern are funcionalitate continu de intensitate sczut. Ea se amplific ca urmare a prezenei membranelor celulare activatoare (bacteriene,virale,parazii) care, permind depozitarea pe suprafaa lor a factorilor C, permit derularea reaciilor lor.
16

Complement : rol biologic

Cale clasica
Inflamatie (C5a, C3a, C4a)

Opsonizare si Fagocitoza (C3b)

Cale alterna
Inflamatie (C5a, C3a, C4a) Opsonizare si Fagocitoza (C3b)
17
ING 2003-4-309

Cile activrii complementului

CALEA CLASIC
anticorp dependent

CALEA LECTINEI

CALEA ALTERN
anticorp independent

Activarea C3
generarea C5 convertazei

activarea C5
ATACUL LITIC

ATACUL LITIC:
inseria complexului litic la nivelul membranei celulare

C6 b

C7 CC C C C9 9 9 9C 9 C C C9 9 9 9

COMPLEMENT

Calea clasic (comun)

Activarea C este iniiat prin formarea unor complexe Ag-Ac ,sau prin legarea Ac pe Ag situat pe o structur int, cum ar fi celula bacterian. Pe de alt parte, unele Ig (IgM,IgG subclasele IgG1,IgG2,IgG3) pot activa calea clasic a C. Exist i unii activatori nonimunologici (prot. lizozomale). Primul pas al activrii implic fraciunile C1, C2, C3i C4 prezente n plasm sub form inactiv. Formarea complexului Ag-Ac induce schimbri conformaionale la nivelul captului Fc al molec de Ac care este expus legrii de componenta C1 a Fc.
21

Activarea complementului
Activarea caii clasice
Etapele recunoasterii

1. Formarea complexelor imune cu imunoglobuliele IgM, IgG1, IgG2, IgG3 IgG2 <IgG1 < IgG3 < IgM
Activare
IgM solubil IgG solubil

Activare

NU

NU

IgM fixat (la Ag)

IgG fixat (la Ag)

DA
Ag tisular

DA
22

ING 2003-4-290

C1 exist n ser ca un complex macromolecular constnd din C1q, C1r i C1s, formnd un agregat, stabilizat de ionii de Ca, denumit C1qr2s2 . Molecula C1q este compus din 18 lanuri polipeptidice care se asociaz pentru a forma 6 ramuri helicoidale triple de tip colagenic, fiecare dintre acestea fiind expuse la situsurile de legare pt C1q aproape la nivelul fragmentului Fc (la nivelul CH2 al moleculei de Ac). Complexul C1r2s2 poate exista sub 2 forme alosterice. Cnd acest complex este liber i nelegat de complexul C1q, el se gsete sub form de S; n cazul legrii de C1q, complexul C1r2s2 capt o form destins.
23

Activarea complementului
Activarea pe cale clasica
Etapele activarii (continuare)
2, 3, 4 i 5. Formarea C3 si C5 convertazei
2. EAC1s 3. EAC1s4b

4. C4b2a

5. C4b2a3b

24
ING 2003-4-292

Fiecare monomer C1s i C1r conine cte un domeniu catalitic i domeniu de interaciune, ultimul facilitnd interrelaiile C1q sau ntre ele. Fiecare molecul C1 trebuie s se lege prin capetele globulare C1q, de cel puin 2 situsuri Fc pt a se stabili o relaie C1-anticorp stabil. Legarea subfraciunii C1q pe situsurile Fc induce o modificare conformaional la nivelul subfraciunii C1r care se convertete autocatalitic ctre forma de proteaz seric activ

C1r activat cliveaz fraciunea C i subfraciunea C1s ctre o enzim activ similar (forma de C1s activat).
25

C1s activat poate aciona pe 2 substrate: C4 C2. Componenta C4 este format dintr-o glicoprotein care conine 3 lanuri polipeptidice (alfa,beta,gama). C4 este activat cnd subfraciunea C1s activat hidrolizeaz un mic fragment (C4a) aflat pe AA terminal al lanului alfa, care este expus ca situs de legare pt un fragment > C4b. Fragm.C4b se ataeaz de suprafaa int din vecintatea frac. C1, iar proenzima C2 se ataeaz ulterior de situsul aflat la nivelul fragm. C4b care este de asemenea clivat i de ctre subfraciunea vecin C1s activat.
26

Fragmetul mai mic al subfraciunii C2 (C2a) difuzeaz i iese din lanul reactiv. Complexul activ rezultat din cuplarea fragm C4b i C2a, denumit C4b2a sau C3 convertaz, acioneaz enzimatic prin virarea proenzimei C3 ctre forma sa activ. Componenta C3 nativ const din 2 lanuri polipeptidice, alfa i beta. Hidroliza unui fragment scurt C3a de la nivelul aminoac. terminal al lanului alfa, de ctre C3 convertaza, genereaz subfraciunea C3b. O molecul de C3 convertaz poate genera peste 200 mol. de C3b, ceea ce are drept consecin o 27 amplificare puternic a acestei etape a secvenei.

Unele molec de C3b se leag de complexul C4b2a, pt a forma un complex trimolecular, denumit C4b2a3b sau C5 convertaz Componenta C3b a acestui complex leag fraciunea C5 i i altereaz conformaia allosteric, astfel nct componenta C4b2a poate cliva mai departe frac. C5 cu formarea subfra. C5a i C5b. Subfraciunea C5a difuzeaz i iese din lanul reactiv, pe cnd subfrac. C5b se ataeaz de suprafaa antigenic.

Subfrac. C5b legat iniiaz formarea complexului de atac al membranei CAM .

Unele dintre mol. C3b, aprute datorit activitii C3 convertazei, nu se cupleaz cu C4b2a, ci acoper complexele imune i Ag particulate, funcionnd ca factori opsonizani.

28

Activarea complementului
Activarea pe cale clasica
Formarea complexului de atac a membranei
6, 7, 8. Formarea MAC

6. C4b2a3b5b

7. C5b67

8. C5b6789

29
ING 2003-4-293

Este iniiat n absena Ac, aparinnd imunitii nespec Calea altern implic 4 proteine serice:
C3, Factorul B FactorulD Properdina.

Calea altern de activare a C

Componentul pivot al acestei ci este factorul C3, care este cel mai abundent n plasm(1,2Mg/ml) i are o gr.mol. de 195Kda C3 are o legtur intern tip tioesteric ntre un reziduu de cistein i unul de glutamin care permite reacia formei solubile a C3 cu apa care duce la clivarea prin hidroliz ntre cele 2 subfraciuni: C3a i C3b. Componenta C3b se poate lega de dif. Ag de suprafa nonself sau chiar de unele celule self.
30

Activarea complementului
Activarea pe calea alternativa
Formarea unei convertaze alterne Boucla de amplificare a C3b Etapa finala
Boucla de amplificare a C3b

Convertaze alterne initiale Etapa finala

31
ING 2003-4-296

Membrana majoritii cel. de mamifere au niveluri nalte de acid salicilic care duce la inactivarea rapid a moleculelor de C3b legate de celulele organismului. Subfraciunea C3b legat poate intra n relaie cu o protein seric numit factorul B , pe calea legturii dependente de ionii de Mg. Legarea C3b este urmat de exprimarea unui situs al fact. B care servete drept substrat ptr. aciunea enzimatic a altei proteine serice, numite factorul D. Acesta cliveaz complexul C3b - fact. B, cu eliberarea unui fragment mic Ba

fragment Ba difuzeaz ieind din lanul reactiv i formeaz complexul C3bBb activat.
Complexul C3bBb are o activitate de C3 convertaz, fiind 32 analog compl. C4b2a activat din calea clasic de activare.

Activarea complementului
Activarea pe calea alternativa
Formarea unei convertaze alterne Boucla de amplificare a C3b Etapa finala

33
ING 2003-4-297

Activitatea C3 convertazic a complexului activat C3bBb prezint o durat de via de numai 5 min, dei o alt protein seric numit properdin se poate lega de acest complex, stabilizndu-l si prelungind durata de via pn la 30 min. Complexul C3bBb, aprut n cursul cii alterne de activare poate activa fraciunea C3 nehidrolizat, n sensul de a produce mai multe molecule C3b autocatalitice.

Momentele iniiale se repet i sunt amplificate n aa fel nct mai mult de 2x106 molec de C3b pot fi depozitate pe suprafaa antigenic n mai puin de345
min.

Activarea pe calea MBL sau calea lectinelor

Proteine plasmatice Mannose Binding Protein sau Mannose Binding Lectin (MBL). Activarea proteazelor serice asociate la MBL, MASP-1 si MASP-2 prezinta omologii cu respectivele C1q, C1r i C1s. MASP-1 activ C4 de unde formarea unei C3 convertaze Independente de C1q

Activarea complementului

ING 2003-4-298

35

Activitatea de C3 convertaz a complexului activat

C3bBb genereaz formarea altui complex denumit

C3bB3b complexul C3bB3b prezint la rndul su activitate de C5 convertaz, asemntoare celei proprii complexului C4b2a3b din calea clasic de activare. Pe de alt parte, componenta neenzimatic C3b leag fraciunea C5, iar componenta C3bBb activat hidrolizeaz ulterior fraciunea C5 legat, cu apariia subfraciunilor C5a i C5b. Subfraciunea C5b se leag de

suprafaa antigenic.

36

Formarea complexului de atac al membranei CAM

Secvena terminal a activrii C, n ambele ci implic subfrac C5b, precum i activarea n lan a fraciunilor C6, C7, C8 i C9. ntreaga suit de evenimente legate de acest proces poate fi sintetizat ntr-o noiune structural i funcional numit complexul de atac al membranei (CAM).

CAM dezagreg fosfolipidele de membran formnd un canal transmembranar, care dilacereaz membrana i faciliteaz difuzarea ionilor i a moleculelor mici dinspre celul spre mediul extracelular
37

Att n calea clasic, ct i n cea altern de activare a sist. C , o C5 convertaz cliveaz fraciunea C5, care conine 2 lanuri proteice (alfa i beta). Dup legarea fraciunii C5 de componenta neenzimatic C3b a convertazei, aminoacidul terminal al lanului a este clivat, genernd un fragment mic C5a, care difuzeaz i nu mai are rol n procesul ulterior, precum i un fragment mai mare C5b, care funcioneaz ca un situs de legare ptr. secvenele urmtoare ale CAM. Componenta C5b este extrem de labil i suport inactivarea n timp de 2 min, dei fraciunea C6 o leag i i stabilizeaz activitatea.
38

Cnd complexul C5b6 se leag de fraciunea C7, se produce o tranziie structural de ordin hidrofilic-amfifilic, la nivelul regiunilor hidrofobe, care servesc ca situsuri de legare ptr. fosfolipidele de membran. Dac reacia are drept int membrana celular, situsurile de legare hidrofobe permit complexului C5b67 s se insinueze n dublul strat fosfolipidic. Dac reacia are drept int un complex imun sau alte suprafee activate necelulare, situsul de legare hidrofob nu poate s se ancoreze i pe suprafaa respectiv i redevine liber.
39

Complexul C5b67 liber poate s se fixeze pe alte celule din vecintate i s determine aa numita citoliz de tip inocent. ntr-un nr. de boli cu formarea de complexe imune, leziunile tisulare au la baz acest tip de citoliz. Legarea fraciunii C8 de complexul membran- C5b67 induce o modificare conformaional n molecula C8, astfel nct are loc tot o tranziie structural hidrofiloamfifilic, cu expunerea regiunii hidrofobe a acestei fraciuni care interacioneaz cu membrana celular.

Complexul C5b678 creeaz un mic por n membran, a crui formare duce la liz eritrocitat, dar nu a celulelor nucleate.
40

Ultimul moment din realizarea CAM este legarea i polimerizarea fraciunii C9 pe complexul C5b678. C9 este o molecul de tip perforinic. ntre 10 -16 mol de C9 pot s lege i s polimerizeze o singur molecul de C5b678. n timpul polimerizrii, moleculele C9 sufer i ele o tranziie de tip hidrofilic-amfifilic, astfel nct ele se pot insera pe membrana celular. Dpv infrastructural, n procesele CAM se constat o form tubular i un por cu diametrul de 70100 A, format din complexul C5b678, acoperit cu policomplexe C9. Celula nu-i poate menine stabilitatea osmotic, este lizat prin influx de ap i pierdere de electrolii
41

Defecte ale sistemului complement

La om au fost descrise deficiene congenitale ale tuturor componentelor complementului , cu excepia fact. B, defecte care duc la susceptibilitii pt inf bacteriene sau la boli autoimune, produse prin complexe imune circulante.
1. 2.

Deficien sever sau absena C3 duce la infecii cu piogeni Deficiena ereditar n factorul inhibitor al C1 (C1Inh) duce la exces de C2a i se caracterizeaz prin episoade recurente de edem localizat fiind numit edem angioneurotic ereditar Hemoglobinuria paroxistic nocturn (incapacitatea celulelor de a exprima proteine membranare legate prin ancore de glicofosfoinozitol, inclusiv DAF i CD59 datorit deficienei unei enzime
42

3.

Complement : regularizare
Activarea C1INH

Inhibitor a proteazelor serice, fixeaza C1r si C1s si disociaza C1q

43
ING 2003-4-301

Reglarea Complementului
Controlul nivelelor de C3b se realizeaz prin formarea unui complex, n urma interveniei factorilor de reglare, cum este inactivatorul lui C3b (C3bINA) -numit i factor I, prezent n ambele ci de activare, precum i a globulinei B1H (factorul H).
Factorul H se leag de C3b i mpiedic unirea sa cu B i Bb. n acest fel este mpiedecat consumul mare de C3. La reglarea activrii C pe cale clasic mai contribuie i inactivatorul lui C1, care blocheaz activitatea enzimatic a acestuia legndu-se de situsul activ al lui C1s. 4 dintre aceti reglatori se gasesc n snge, ca de altfel i componentele menionate.

44

Inhibitorul C1 (C1INH) blocheaz proteoliza lui C2 i C4 de ctre C1s* (un component al unitii de recunoatere) n calea clasic Inactivatorul C3b (C3bINA sau factorul I ), inactiveaz C3b mpreun cu un cofactor: proteina care leag C3
(C3BP,C3-binding protein, factor H sau 1H).

Legarea factorului H de C3b din complexe iniiaz disocierea acestora n subuniti inactive.

Factorul I genereaz iC3b i ali produi de degradare din care unii au i alte aciuni biologice n sist imun.
Proteina care leag C4 (C4-BP, C4 binding protein) se leag de C4b fiind distrus de factorul I .

45

Unele componente membranale au rol de protecie a celulelor fa de liza prin complement.

1.

DAF (factorul accelerator al disocierii) sau CD55 este fixat n membrana celular a eritrocitelor, leucocitelor, trombocitelor i celulelor endoteliale. Aceast protein interacioneaz cu complexele complementului depozitate pe suprafaa celular, grbind disocierea lor, prin prevenirea formrii C3 convertazei.

2.

MCP (Membrane cofactor protein) sau CD46 se gsete pe leucocite i trombocite i leag C3b i C4b, favoriznd inactivarea lor prin creterea activitii factorului I
46

Actiunea asupra C3 convertazei

Complement : regularizare

47
ING 2003-4-302

Complement : regularizare
Clivarea C3b prin factorul I

48
ING 2003-4-303

Complement : regularizare
Inhibarea MAC

Inhibarea MAC

Inhibarea MAC

49
ING 2003-4-304

3.

HRF (Homologus restriction factor) leag C8 i C9 i inhib formarea unei uniti litice eficiente

3.

CD59 - factorul inhibitor al complexului de atac membranal, protectin sau MIRL(Membrane inhibitor of reactive lysis) are o activitate similar cu a HRF.

50

Receptorii pentru complement

Primii identificai au fost receptorii ptr. C3b i fragmentele acestuia. Acetia au fost denumii CR 1-5 (receptor ptr. C.)
1.

CR1 (CD35) de pe eritrocite, leucocite, limfocitele B i T, celulele fagocitare i dendritice, este un receptor pt C3b, C4b i iC3b care mediaz aciunile de opsonizare ale acestora .

2.

CR2(CD21) de pe limfocitele B, timocite i celule dendritice, este un receptor pt C3d care stimuleaz proliferarea limfocitelor B, cnd este imobilizat pe suprafaa cel, dar n form solubil inhib funciile limfocitelor T i B. Este receptorul ptr. Virusul EpsteinBarr
51

Receptorii pentru complement

3.

CR3 i CR4 se gsesc pe celulele fagocitare i se leag de iC3b.

CR3 i CR4 sunt compui din cte 2 lanuri.

Lanul numit CD11b i CD11c;

Lanul numit CD18.

Acetia sunt membrii unui grup de proteine de suprafa leucocitare, molecule de adeziune cunoscute sub numele de integrine
52