Activarea limfocitelor T; Limfocitele B; Organizarea sistemului imun

CURSUL IX
1

 Activarea Ly T este momentul central al marii majoriti a RI;aceast activare nu se realizeaz n orice condiii. Activarea are loc n condiii diferite in vitro fa de in vivo.Pt activarea in vivo, sunt mai importante 3 condiii: 1. Ly T pot fi activate doar de Ag timodependente 2. Activarea LyT se realizeaz doar n cadrul unei cooperri celulare la care este obligatorie prezena APC (Antigen Presenting Cells)
2

 Ly T pot activa alte Ly T prin APC. APC au din abunden receptori pt opsonine i pot capta Ag. timodependente opsonizate, pe care le endociteaz i le prelucreaz. n urma acestei prelucrri rezult epitopi,iar dintre aceti epitopi sunt selectai epitopii imunodominani, care sunt expui pe APC n context MHC (Major
Histocompatibility Complex)

Un alt motiv pt care prezena APC este obligatorie l constituie faptul c Ly T recunosc doar determinani antigenici liniari.
4

3.Cooperarea celular i activarea care rezult pt generarea unui RI eficient sunt bidirecionale. Cele 2 celule se stimuleaz reciproc. Din acest pdv distingem 2 tipuri de activri: a.Activarea anterograd se realizeaz dinspre APC spre Ly T fiind urmat de activare metabolic a Ly T. Se numete anterograd pt c ea se exercit n acelai sens cu prezentarea i recunoaterea Ag. Activarea anterograd presupune transmiterea spre Ly T a unor semnale. Dou ci sunt mai importante pt aceast transmitere:
5

I. Calea TcR-CD3 este utilizat n cazul

recunoaterii antigenice; semnalele transmise pe aceast cale determin activarea metabolic a Ly T i stimularea diviziunii mitotice a LyT antigenspecifice, cu nr de cel al clonei antigen-specifice
(expansiune clonal);

II. Calea accesorie CD80-CD28 de activare

anterograd se realizeaz prin CD28. Receptorul CD28 de pe membrana Ly T se activeaz n urma legrii cu CD80 de pe membrana APC. Realizarea complexului CD80-CD28 costituie semnalul activator, care iniiaz maturarea funcional a LyT, n urma creia rezult LyT activat. Ly T activate: produc cantiti crescute de interleukine (subsetul T helper); produc cantiti de mediatori citotoxici(subsetul T citotoxice)
6

 Rezultatele activrii anterograde asupra Ly T sunt: 1. activarea metabolic; 2. expansiunea clonal; 3. maturarea funcional. b. Activarea retrograd (AR) se realizeaz dinspre Ly T activate metabolic spre APC; la sfritul ei are loc activarea metabolic a APC. Activarea retrograd decurge n sens opus prezentrii i recunoaterii Ag. AR se realizeaz prin intermediul unor citokine produse de Ly T helper.
7

Dintre acestea sunt mai importante IL-4 i IFN avnd ca aciune comun stimularea receptorilor de suprafa ai APC . Aceast stimulare duce la intensificarea expresiei MHC pe suprafaa acestor celule (mai ales a MHC II), cu expresiei de epitopi pe suprafaa celular.

Ca urmare rezult o stimulare antigenic suplimentar a LyT i cascada se poate relua pn la atingerea valorii prag a declanrii RI
(fenomen de amplificare prin feedback pozitiv).
8

Activarea n sens anterograd se realizeaz doar n cadrul cooperrii celulare APC- LyT. Se descriu 2 etape: I. Etapa antigen-independent a activrii LyT presupune contactul intim ntre membrana APC i membrana LyT, constituindu-se cupluri de adeziune intercelular:

a) de linia I: CD2 (de pe LyT) se leag f eficient i rapid cu CD58 (LFA3 de pe APC);
b) de linia II: LFA1 (de pe LyT) cu molec. ICAM.
Formarea legturilor de linia I precede i favorizeaz

formarea legturilor de linia II; afinitatea LFA1 pt ICAM este mai mic.
9

10

 Rolurile etapei antigen-independente sunt:

A. Favorizarea net a recunoaterii antigenice;

B. Se realizeaz pregtirea declanrii activrii Ly T.
Cnd CD2 stabilete legturi cu LFA3 are loc o modificare conformaional a molec CD2(mai ales n segmentul intracelular) care permite alunecarea PLC (fosfolipaza C) dinspre citoplasm spre membran. Aceast etap Ag-independent are loc n permanen: 1. n situaia n care APC nu prezint Ag expune molecule MHC vide sau goale. LyT realizeaz aceste contacte pt c sunt molecule intens recirculante. La captul circuitului este obligatorie stabilirea de legturi cu APC. Prin aceste contacte (CD2-CD58/LFA3; LFA1-ICAM) se realizeaz o supraveghere imunologic a APC de ctre LyT (dei MHC este vid). 2. Cnd APC prezint un epitop ce nu a fost nc recunoscut prin TcR: complexele TcR-MHC-epitop sunt situate la distan 11 pe membran.

 II. Etapa Ag -dependent a activrii LyT presupune expunerea de ctre APC a unui epitop (sau Ag) pe MHC II. n urma recunoaterii antigenice (asociative) sunt generate 2 categorii de semnale pe calea TcR: 1.Datorit recunoaterii CD4/CD8 a domeniilor monomorfe MHC transmitere prin segmentul intracitoplasmatic CD4/CD8 spre PTK a unui semnal inhibitor care se soldeaz cu modificri conformaionale ale PTK ce contribuie net la exteriorizarea Tyr din poziia 5aS. Pe suprafaa moleculei aceast tirozin se autofosforileaz. Efectul fosforilrii este inhibiia de moment a activitii PTK.
12

Semnalul inhibitor reprezint un mecanism de protecie prin care se evit activarea LyT cnd acestea au contact cu APC cu MHC <vide> sau <goale>: i. evit activarea policlonal a limf T (unele clone activate pot
avea efecte negative prin recunoaterea unor autoantigene;)

ii. evit reacia LyT (subset Tc) fa de propriile APC. 2. Al 2-lea semnal activator apare cnd APC prezint un epitop. Se transmite pe cale TcR din aproape n aproape pn la lanul zeta: a. O parte din semnale sunt transmise la CD45 via lanul zeta; are loc o activare a CD45, care capt proprieti enzimatice de PTP (protein-tirozin-fosfataz). PTP preia P de pe PTK. Survine o defosforilare a PTK cu activarea ei. Activarea PTK iniiaz cascada de activare metabolic a LyT.
13

 O alt enzim asociat la lanul zeta (ZAP 70 <proteina asociat lanului zeta>; mas 70 kDa) primete i ea semnal activator de la lanul zeta, apoi preia P (fosfatidil) de pe CD45, l transmite PLC(fosfolipaza C).Rezult un complex PLC-Pcare constituie forma activat a fosfolipazei C. PLC-P st la baza cascadei inozitoltrifosfatului: PLC hidrolizeaz fosfatidilinozitolul membranar la inozitoltrifosfat (IP3) i diacilglicerol. Inozitoltrifosfatul este hidrosolubil i va difuza n toat citoplasma, venind astfel n contact cu reticulul endoplasmic neted, care prezint receptori pt IP3. n urma legrii IP3 de aceti receptori se elibereaz n Ly T Ca2+ depozitat n reticul.
14

Concentraia citoplasmatic a Ca2+ crete (hipercalciie). Hipercalc. activeaz indirect unele funcii nucleare: Ca2+ n concentraie stimuleaz calcineurina citoplasmatic (fosfataz calmodulin-dependent) care la rndul ei stimuleaz unele funcii nucleare prin activarea unui factor transcripional ce ptrunde n nucleu. Acest factor este notat NF-AT (factor nuclear al Ly T activate). NF-AT este un polipeptid aflat n citoplasma LyT; n mod N este inhibat datorit fosforilrii. Calcineurina defosforileaz NF-AT, activndu-l. Dup activare trece din citoplasm n nucleu unde stimuleaz transcrierea unor gene, cu 2 efecte majore: I. Stimuleaz divizunea mitotic a LyT; II. Stimuleaz moderat expresia genelor pt interleukine/ citokine.
15

 Diacilglicerolul (DAG) este o subst liposolubil

i nu va difuza n citoplasm,rmnnd la nivelul

membranei,unde activeaz PKC(proteinkinaza

C).

PKC

activeaz la rndul ei anumite seturi de enzime, care realizeaz o amplific a activrii metabolice
a LyT i influeneaz indirect unele funcii nucleare ale LyT,prin factori transcripionali,cum este NF-kB

NF-kB este factorul transcripional al LyB pt lanurile uoare k ale Ig. (a fost evideniat n Ly B mielomatoase)
16

 NF-kB se afl n mod N n citoplasm n stare inactiv datorit cuplrii cu un inhibitor proteic; activarea lui are loc prin fosforilarea acestui inhibitor sub aciunea PKC. Inhibitorul fosforilat se desprinde de pe molec NF-kB, care ajunge astfel n stare activat i migreaz n nucleu.La nivelul nucleului aciunile NF-kB sunt de stimulare intens a expresiei genelor pt interleukina 2 i pt receptorul acesteia (CD25). Acest efect st la baza autoactivrii autocrine <TcR-like> a LyT prin propria interleukin 2 (alt ex.
de amplificare prin feedback pozitiv).
17

b. semnalele de pe calea accesorie: CD28 se activeaz prin stabilirea de legturi cu CD80 (de pe APC). CD28 activat n acest mod are efecte pe nucleu. CD28 RC sau complexul receptorial CD28 activeaz CD28 RE (elementul receptorialpt CD 28 RC) care la rndul su activeaz genele promotoare pt majoritatea interleukinelor(n Th) sau mediatorii citotoxici (n Tc). Morfologic: prin stimulare LyT aflate n stare de repaus (G0) trec n limfoblaste T (interfaz:G1SG2).

Limfoblastul T, celul aflat n interfaz, are dimensiuni > dect LyT de repaus, aspect neregulat, citopl abundent, o reprezentare mai bogat a mitocondriilor (activare metabolic) i reticul endoplasmic abundent; de asemenea se modific expresia fenotipic, crescnd expresia
TcR, CD4, CD8 i a receptorilor de adeziune (LFA-1)
18

 Dup interfaz urmeaz diviziunea mitotic. Majoritatea celulelor rezultate din aceast diviziune devin LyT efectorii. LyT efectorii sunt de 2 tipuri: 1. Productoare de interleukine, cu rol n amplificarea RI (subsetul Th); 2. Product. de mediatori citotoxici (subset Tc). Un nr f mic de celule rmn <de rezerv> ca celule T cu memorie, adic celule T preactivate. Acestea nu mai revin la G0 i la un nou contact cu Ag rspund f repede.
19

Limfocitele B
Caracterele generale ale LyB (LB): 1. LyB reprezint o minoritate de 2025 % din totalul Ly mici din sngele periferic; 2. Sunt celule cu o durat de via mai mic, de ordinul sptmniluni; 3. Sunt cel. puin recirculante, fiind distribuite mai ales n organele limfoide, unde staioneaz un timp mai ndelungat (cortex ganglionar i pals externa a splinei).
Receptorii de suprafa ai LyB se mpart n 3 categorii:

I. Receptori de recunoatere antigenic; II. Receptori cu rol accesor n activarea LyB: CD 45 III. Receptori de adeziune intercelular - cel mai important este LFA-1
20

I. Receptori de recunoatere antigenic Caracteristicile principale ale recunoaterii antigenice la nivelul LyB sunt: 1. LyB recunosc Ag numai dup conformaia spaial a determinantului antigenic, nu dup str. primar a acestuia (conformaia este determinat de mai muli factori,
printre care se numr str. primar, pH-ul mediului, temperatura; n sensul recunoaterii, conformaia este o caracteristic mai restrictiv dect str. primar, aceeai str. primar putnd prezenta o multitudine de conformaii, de exemplu n funcie de pH);

2. LyB (spre deosebire de LT) recunosc doar Ag solubile, nefiind niciodat necesar prezentarea Ag
21

 n cazul LyB, la recunoaterea Ag-ic particip

un complex receptorial format din 3 componente:

1. BCR
(B-Cell Receptor )

este o Ig. transmembranar.

n ordinea descresctoare a frecvenei aceast Ig poate fi: IgM, IgD, IgG, IgA, IgE
ntlnite ca BCR). (ultimele 3 tipuri sunt rar

BCR este format din 2 perechi de

un tetramer H2L2).

lanuri

(este

Lanurile grele H sunt

22

transmembranare cu captul aminoterminal la exteriorul cel; sunt asociate prin leg. disulfurice.

 Lanurile uoare sunt extramembranare.

Cele 2 perechi de lanuri se asociaz prin capetele aminoterminale, formnd 2 caviti de dimensiuni reduse (situsuri combinative pentru Ag, notat SCAg). SCAg poate recunoate determinani antigenici conformaionali prezeni la supraf. molec. de Ag nativ. Cele 2 SCAg au aceei structur i recunosc acelai tip de determinant antigenic. Prin urmare BCR este un receptor antigenic monospecific.

Prin capetele carboxiterminale lanurile contribuie la activarea LyB, fiind n contact fizic cu o proteinkinaz
(proteinkinaza are alt struct. dect cea gsite la LT).

2. Ig (CD 79 ) 3. Ig (CD 79 )
23

 Cele 2 molecule CD 79 sunt glicoproteine transmembranare codate de gene diferite. Ambele au n segmentul extracelular cte un domeniu. Cele 2 domenii extracelulare ale unei perechi CD 79 - CD 79 sunt dispuse simetric (asemntor cu Ig). Rolul CD 79 este de a transmite unele semnale BCR (rol CD-3 like). Prin legturi disulfurice au contact cu lanurile grele din BCR; sunt asociate i la CD 45, tot prin legturi disulfurice. Mecanismele activrii LyB:Activarea LyB este rezultatul recunoaterii prin BCR a diferitelor Ag Stimulii activatori se transmit pe 2 ci:
24

a. calea scurt const n activarea direct a PTK. PTK preia P din citopl. i l transmite unor struct. cum ar fi de ex. segmentul
intracitoplasmatic al Ig i Ig .Prin fosforilare

CD 79 sufer transformri conformaionale. Semnalul se transmite apoi pe calea lung;

b. calea lung: de la CD 79 semnalul ajunge la CD 45, care activat are funcie de PTfosfataz, prelund P de pe CD 79 i transmindu-l PLC. Prin fosforilare PLC este activat, iniiind cascada fosfatidilinozitolilor.
25

 Expresia fenotipic se modific:

- crete expresia LFA 1;

- crete f mult expresia molec. MHC II.

n stadiul de limfoblast, ca urmare a acestor modificri, LyB i comut funcia de la recunoatere antigenic la APC.
Celulele care trec de stadiul G2 intr n diviziune mitotic. n urma mitozei majoritatea celulelor rezultate sunt celule B efectorii (plasmocite). Un nr. mic de celule devin LyB cu memorie (LyB preactivate), ntre stadiile G0-G1.
26

Organizarea sistemului imun

Sistemul imun(SI) are 2 compartimente: 1. Compartimentul central este format din:

mduva hematogen, unde se produc LyB i LyT i unde se matureaz LyB;

timus loc de maturaie a limfocitelor.

2. Compartimentul periferic estre format din ganglionii limfatici i splin. n splin i ganglionii limfatici periferici sunt distribuite majoritatea clonelor limfocitarea T i B; aici ajung f frecvent toate APC i aici au loc rspunsurile imune.
27

 Splina este alctuit din capsul i parenchim splenic. Parenchimul este format din pulpa roie(care nu are rol imunologic) i din pulpa alb. Pulpa alb prezint 3 manoane concentrice de populaii limfocitare distincte nfurate n jurul unei arteriole centrale. Splina genereaz RI fa de Ag. circulante: RIU se desfoar integral n splin; RIC este iniiat la nivelul splinei; se desfoar n esutul antigenic. Principalele etape ale RIU intrasplenic Ag din circulaie pot fi: Ag solubile (libere); Ag (solubile) transportate de cel. dendritice sanguine.
28

 n pals externa Ag solubile sunt captate de CD (care au rol de filtru); rezult o concentrare local de Ag. Datorit recunoaterii Ag, LyB se activeaz trecnd n limfoblaste B care ncepe s migreze.

Ag transportat ajuns n splin se cantoneaz doar n pals interna, unde are loc tranziia CDS IDS.

IDS prezint Ag n context MHC II. Pt unele Ly (T) are loc activarea limfocitar i transformarea n limfoblaste T. Limfoblastele T migreaz n pals externa. n pals externa, prin stimulare are loc definitivarea activrii LyB, care se transform n plasmocite. Plasmocitele migreaz la distan de Ag i produc/ secret Ac.
29

 Ganglionii - Parenchimul ganglionar are 3 zone:

1. Corticala este B-dependent i este format din LyB dispuse n grupuri numite foliculi limfoizi. Cnd LyB sunt neactivate, aceti foliculi se numesc foliculi limfoizi primari;
2.Paracorticala este format din LyT distribuite uniform; 3. Medulara are celularitate mixt, fiind format din Ly B, T, monocite i macrofage. Funciile ganglionului sunt aceleai cu ale splinei
30

 Etapele celulare ale RIU intraganglionar RIU intraganglionar este declanat de drenarea prin limfatice aferente a unor Ag tisulare, concentrate mai ales subcapsular (aduse de CD). Dac Ag sunt recunoscute foliculii primari trec n foliculi secundari (prin activare antigenic). Foliculii secundari sunt de dimensiuni mari i se extind f mult spre interiorul parenchimului (n urma stimulrii antigenice LB se
divid i migreaz).

Celularitatea foliculului se modific - histologic zona subcapsular este format din LyB mici (aflate n repaus; nestimulate antigenic), zona central este clar i alctuit din puine LyB mici iar zona densa este alctuit din LyB mari (limfoblati provenii din zona clar, care au recunoscut Ag i au migrat).
31