Imunologie curs 2

Imunologie Curs 2

Antigen Presenting Cells (APC; celulele prezentatoare de antigen) sunt celule cu rol esenial n generarea unor rspunsuri imune umorale i celulare fa de antigenele timodependente. Au trei funcii importante din punct de vedere imunologic: 1. sunt responsabile direct de declanarea rspunsului imun; 2. au rol esenial n ntreinerea (n timp) a rspunsului imun; 3. particip la controlul rspunsului imun. APC sunt implicate ntr-un fenomen de cooperare celular cu dou categorii de limfocite: I. Limfocite cu rol imunoreglator, clasificate n dou subvarieti: a. T-helper cu rol n amplificarea rspunsului imun; b. T-supressor cu rol n inhibare rspunsului imun. II. Limfocite cu rol efector (care particip la realizarea efectiv a rspunsului imun): a. Limfocite B pentru rspunsul imun umoral; b. Limfocite T citotoxice pentru rspunsul imun celular.

(fig. 1) Legend pentru figura 1: Antigenele timodependente sunt preluate de APC, apoi internalizate i prelucrate. n urma acestei prelucrri rezult fragmente antigenice (epitopi) care vor fi expuse pe membrana APC n complex cu molecule MHC (n. ed. MHC tip II; Major Histocompatibility Complex type II). Sub aceast form epitopii sunt <prezentai> ambelor subvarieti de limfocite cu rol imunoreglator (Th, Ts), apoi epitopii sunt prezentai unei singure subvarieti de limfocite cu rol efector, fie B, fie T (n. ed. nu sunt prezentai ambelor subvarieti). Celulele APC au urmtoarele caracteristici: a) dintre toate celulele participante la cooperare, APC sunt primele i singurele celule ce vin n contact cu antigenele (Ag) native; b) sunt singurele capabile s prelucreze Ag native genernd fragmente antigenice (epitopi); doar aceste fragmente sunt recunoscute de limfocite (i n special de limfocitele T); c) APC sunt substratul morfologic al cooperrii celulare. Clasificarea APC: I. APC profesionale: 1. macrofage;

-1-

Imunologie curs 2
2. celule dendritice; 3. limfocite B (n anumite condiii pot funciona ca APC). APC ocazionale: 1. PMN (dintre acestea sunt mai importante neutrofilele); 2. Celulele endoteliale; 3. Celulele epiteliale.

II.

I.1 APC profesionale macrofagele Macrofagele sunt celule de origine medular; mduva (n. ed. osoas hematopoietic) elimin continuu n circulaia periferic elemente (n.ed. figurate sanguine) tinere, nematurizate (monocite). Dup un scurt tranzit (2436 h), acestea trec n esuturi, fiind atrase de anumii factori (chemotactici). n esuturi se vor maturiza sub influena unor (n. ed. alii?) factori cum ar fi IFN (n. ed. gamainterferon), transformndu-se treptat n macrofage. Macrofagele pot ndeplini funcia de APC (trecnd prin anumite transformri).

(fig. 2) Transformarea macrofagelor n APC a fost mprit (n. ed. didactic) n 5 etape (n. ed notate AE n cursul de fa). A. Captarea antigenelor: 1. macrofagele capteaz antigenele corpusculate (e. g. bacterii, virui, parazii de dimensiuni mici, etc); macrofagele nu capteaz niciodat antigene solubile; 2. captarea este un proces imunologic nespecific; 3. captarea este un proces imunologic mediat receptorial. A.1 Antigenele corpusculare captate de macrofage pot fi mprite n dou categorii: i) Antigene corpusculare opsonizate (adic <nvelite> de factori imunologici solubili); opsonizarea favorizeaz net captarea Ag i endocitarea lor. Opsoninele sunt reprezentate de: I) C3b prezent n mod continuu n lichidul interstiial, n cantitate mic; generarea C3b se face prin funcie continu a cii alternative de activare a complementului; C3b are o foarte pronunat tendin de fixare a oricror suprafee membranare non-self (n. ed. adic C3b, considerat nespecific, se leag specific i preferenial de structuri nonself!).

-2-

Imunologie curs 2
Macrofagele au receptori capabili s lege C3b; aceti receptori se vor nota cu CR (Complement Receptor). II) Ig (mai ales IgG) prezente n lichidul interstiial n concentraii mai mari. Ig se ataeaz pe membrana bacterian datorit recunoaterii unor antigene de suprafa exprimate pe respectiva membran. Poriunea Ig care se leag la determinantul antigenic a fost notat Fab (Fragment antigen-binding). Fragmentul Fc (Fragment constant) al Ig astfel legate este liber n lichidul interstiial. Captarea are loc rapid prin legarea Fc la receptorii Fc R ai macrofagelor (n. ed. spre deosebire de complement, Ig sunt specifice n ceea ce privete Ag legat prin structura Fab, care este complementar cu structura antigenic recunoscut; pentru dou antigene diferite, Fab corespunztor nu poate fi acelai; Fc este acelai indiferent de antigenul recunoscut de Fab). ii) Antigene corpusculare neopsonizate captarea lor este mai puin eficient. Macrofagele au receptori care se leag la oligozaharide ale peretelui bacterian - radicalii fucozil, manozil - de unde i notaia F/MR. A.2 Captarea este nespecific pentru c macrofagele nu au contact direct cu determinanii antigenici de suprafa, contactul fcndu-se (n.ed. exclusiv) prin C3b, Fc i radicali F/M (n.ed. care sunt structuri constante); Endocitarea antigenelor corpusculare captate este un proces energodependent (<activ>); endocitarea presupune modificarea conformaiei membranare cu formare de pseudopode i vezicule de endocitare. Prelucrarea/procesarea antigenelor endocitate. n lizozomi, sub aciunea proteazelor i hidrolazelor are loc o proteoliz parial n urma creia rezult fragmente (epitopi). Ulterior sunt selectai epitopii imunodominani (cei mai imunogeni). O parte din epitopii selecionai sunt conservai n macrofag i servesc la ntreinerea n timp a rspunsului imun. Cantiti mici sunt eliberate i menin stimularea antigenic. Cea mai mare parte din epitopii selectai se cupleaz n macrofag cu molecule MHC I sau MHC II, rezultnd complexe MHC I (sau II) epitop care vor fi expuse pe membrana macrofagului. Primele celule care vin la cooperare sunt limfocitele T (mai exact subsetul Th). Limfocitele Th pot recunoate epitopii doar n complexe MHC II epitop. Capacitatea de prezentare este deci condiionat de capacitatea macrofagelor de a sintetiza molecule de tip MHC II. De exemplu: - 70 % din macrofagele peritoneale sunt capabile s sintetizeze MHC II; - 50 % din macrofagele splenice sunt capabile s elaboreze MHC II; - maxim 25 % din macrofagele hepatice sunt capabile s exprime MHC II. Macrofagele care elaboreaz MHC II sunt implicate n generarea unor rspunsuri imune. Cele care nu au aceast capacitate nu particip la generarea unor rspunsuri imune dar sunt implicate doar n reaciile inflamatorii locale. Etapele limitante ale procesului de transformare macrofag-APC sunt A i E: - rata captrii depinde de numrul de receptori CR, Fc R funcionali; - prezentarea depinde de capacitatea de sintez a MHC II.

B. C. D. E.

-3-

Imunologie curs 2
Funcia de ansamblu a macrofagelor n rspunsul imun: capteaz antigenele i le transport ctre ganglionii locoregionali unde le prezint limfocitelor Th aflate n aria timodependent a ganglionilor (paracortexul ganglionar). I.2 Celulele dendritice (n. ed. n cadrul seciunii I.2 notaia va fi CD) sunt celule de origine medular care n condiii de repaus emit prelungiri citoplasmatice (pseudopode). Ansamblul pseudopodelor are urmtoarele caracteristici: - pseudopodele sunt foarte numeroase; - sunt foarte fine, subiri, efilate; - sunt foarte lungi (lungimea minim este de 56 ori diametrul celular). Aceste caracteristici dau celulei un aspect similar celor dendritice din SNC. n ceea ce privete funcia APC, despre celulele dendritice se poate afirma c: a. n general exprim receptori pentru opsonine, deci pot capta antigene; b. n general pot sintetiza MHC II. Celulele dendritice (CD) sunt o clas foarte heterogen, cu ase subtipuri, grupate n trei subuniti mai importante (n. ed. notate IIII n tabelul de mai jos). Grup/Subtip CD I. CD intratisulare (nelimfoide) CR MHC II Fc R 1. cel. Langerhans + + 2. CD interstiiale II. CD limfoide 3. IDC 4. CD foliculare* III. CD intracirculatorii 5. CD sanguine 6. CD vluroase + +++ + +++ +++++ -

* CD foliculare funcioneaz ca filtre locale pentru antigene. Grupa I 1. CD din subtipul 1 se gsesc: - n submucoasa bucal; - tractul digestiv; - colul uterin. Funcia lor de ansamblu este de a capta antigenele i a le transporta n ganglionii locoregionali, n paracortexul acestora prezentndu-le limfocitelor Th. 2. CD interstiiale au morfologie similar celulelor Langerhans. Sunt foarte larg distribuite (se gsesc n toate spaiile interstiiale). Grupa II este format din celule localizate n organele limfoide secundare. 3. CD interdigitate (engl. IDC) au aspect tipic dendritic i sunt distribuite n ariile timodependente din ganglionii limfatici i splin: - paracortex ganglionar; - pars interna a splinei (strat limfoid periarteriolar intern).

-4-

Imunologie curs 2
4. CD foliculare au aspect tipic dendritic i sunt distribuite n foliculii limfoizi din organele limfoide secundare (foliculi limfoizi= aglomerri de limfocite B), adic n ariile bursodependente din organele limfoide: - cortexul ganglionar; - pars externa a splinei. CD intracirculatorii 5. CD sanguine ca morfologie sunt ovalare (n circulaie). Sunt ntlnite rar. 6. CD vluroase (engl. veiled) sunt aplatizate i ovalare. Pe lateral prezint foarte multe franjuri i ondulaii. Sunt prezente numai n circulaia limfatic, mai ales n limfaticele aferente. Fenotipic sunt CR (-), Fc R (-), MHC II (-). Se consider c toate aceste celule dendritice (16) nu reprezint entiti morfologice distincte, ci sunt principalele etape ale traficului celulelor dendritice n organism. Toate CD au aceeai origine (n.ed mduva osoas hematogen) i n funcie de esutul pe care l parcurg i modific caracterele morfologice i fenotipice. Traficul i filiaia celulelor dendritice n organism se desfoar n patru sectoare: mduva, sectorul tisular, sectorul limfoid i sectorul vascular. CDS I. Calea intratisular: a. n esutul cutanat devin celule Langerhans: CR(+), Fc R(+); se pot activa, caz n care transport antigenele spre ganglionii locoregionali prin limfaticele aferente, unde devin CD vluroase (CDV); n paracortexul ganglionar aceste CDV devin IDC, care sintetizeaz n cantiti mari MHC II prin care prezint antigenele ctre limfocitele T helper (30004000 Th: 1 IDC) inclavate printre prelungirile IDC. b. n spaiile interstiiale din organele limfatice devin CD interstiiale, care exprim CR i Fc R; prin activare migreaz i vor transporta antigenele pe dou ci: i. ctre ganglionii locoregionali CDV- IDC (n maniera descris mai sus la litera a.); ii. migreaz antidromic - n circulaie redevin CDS, trec n splin devenind IDC n PALS interna; IDC coopereaz cu limfocite T. II. Traficul limfoid presupune trecerea direct: i. n ganglioni apoi n cortexul ganglionar, unde are loc transformarea n CDF; ii. prin artera lienal n PALS externa cu transformare n CDF.

-5-

Imunologie curs 2

(fig. 3) I.3 Limfocitele B pot funciona ca APC deoarece exprim receptori de captare a antigenelor (CR, Fc R, BCR) (n. ed. aceasta este formularea dat n curs i trebuie si rmnem fideli, chiar dac este n mod clar un sofism; e.g. dac eu am o undi nu nseamn c sunt pescar). Limfocitele B capteaz doar antigenele solubile. n stadiul de limfoblast, ele elaboreaz cantiti crescute de molecule MHC II. Moleculele prezentatoare de antigen (MHC) MHC I sunt distribuite ubicuitar, cu excepia hematiilor. Ca structur sunt heterodimeri . Lanul are o poriune transmembranar pe cnd este strict extracelular. Aceste lanuri prezint organizare multidomenial datorit unor legturi disulfurice intracatenare. Lanul are trei domenii 1 3 iar lanul are o singur bucl: - domeniile 1, 2 sunt constituite din secvene hipervariabile (difer de la un tip celular la altul) i de aceea sunt numite domenii polimorfe ale MHC I; - domeniul 3 are o structur primar constant fa de tipul celulei (n.ed independent de tipul celulei pe a crei membran este exprimat molecula MHC I analizat); - domeniul are o structur primar constant la toi indivizii unei specii date.

-6-

Imunologie curs 2

(fig. 4) Funcii: Domeniile 1, 2 sunt situate simetric i se asociaz formnd o cavitate de dimensiuni reduse n care este inclavat un antigen (= antigen endogen) = situs combinativ pentru antigene. Domeniul 3 se comport ca un antigen self foarte imunogen, fiind implicat n declanarea unor reacii de respingere a grefelor de organ/ esut. Gena MHC I este situat pe autozomii 6. MHC II sunt distribuite doar pe membranele celulelor ce particip la realizarea rspunsului imun: APC, limfocite B i limfocite T. Ca structur sunt heterodimeri , ambele lanuri fiind transmembranare. Fiecare lan prezint cte dou domenii (<bucle>) iar poziionarea lor simetric fa n fa d moleculei un aspect Ig-like.

Domeniile aminoterminale 1, 1 sunt domeniile polimorfe ale moleculei MHC II (variaz mult de la o clon celular la alta). Domeniile carboxiterminale 2, 2 au structuri primare constante (mai ales 2) i n consecin se numesc domenii monomorfe. Domeniile polimorfe se asociaz formnd caviti n care este inclavat pentru prezentare un antigen exogen= situs prezentator pentru antigen. Domeniile monomorfe (mai ales 2) au rol n declanarea unor reacii de respingere a grefelor i n cooperarea APC-Th. +i genele MHC II sunt situate pe perechea 6 de autozomi. Mecanismele prezentrii selective a antigenelor pe moleculele MHC: dei ambele categorii de molecule MHC sunt sintetizate n acelai subsector celular (RER), ele

-7-

Imunologie curs 2
prezint difereniat antigenele pentru c se cupleaz cu acestea n subsectoare celulare diferite.

n cazul MHC I se sintetizeaz iniial lanul apoi . Prin cuplarea acestora rezult molecula MHC I i are loc modificarea conformaional a lanului , cu deschiderea larg a situsului combinativ pentru antigen. Astfel, moleculele MHC I pot fixa diverse antigene: proteine endogene intracitoplasmatice autoantigene sau neoantigene sau fragmente rezultate din prelucrarea unor microorganisme cu habitat sau dezvoltare intracelular (n.ed. n acest al treilea caz, nu se poate afirma c respectivele proteine au provenien endogen, nefiind biosintetizate pe o matri ARN provenit din transcrierea unei secvene ADN proprii). Prin prelucrarea respectivelor polipeptide n citoplasm, sub influena proteozomilor (n. ed. lizozomi?) rezult epitopi care prin anumite sisteme transportoare (vezi figura mai sus: TAP 1,2= transportor asociat prezentrii de antigen; ABC= casetele de legare a antigenului) ajung n RER (reticul endoplasmic rugos). ncrcarea moleculelor MHC I cu epitopi implic o nou modificare conformaional, MHC I desprinzndu-se de pe perete i migrnd pe membran. n cazul MHC II se sintetizeaz pe lng lanurile i i un lan II inhibitor (IIi) care <astup> (blocheaz) situsul de prezentare a antigenului. Lanul II i trece printr-un dublu clivaj proteolitic: 1) ndeprtarea captului aminoterminal elibereaz situsul combinativ pentru antigen, care poate fixa diverse antigene (e.g. antigene exogene din procesele de fagocitare n endozomi) 2) al 2-lea clivaj ndeprteaz complet lanul IIi iar moleculele MHC II devin neancorate pe pereii endozomali, trecnd pe suprafaa membranar, unde pot fi recunoscute de limfocitele Th.

-8-