NUCLEUL

N U C L E U L Caracteriza Caracterizare re general general

 Este cel mai voluminos organit al celulei EK (6-10% din volumul celulei)  ndeplinete funcii fundamentale pentru viaa celulei: Stocarea i transmiterea informaiei genetice de la o celul la alta, pe parcursul diviziunilor celulare succesive Controlul activitii celulare (nucleul controleaz funciile metabolice ale celulei prin reglarea expresiei genelor)  Nucleul prezint dou tipuri de organizri distincte, corespunztoare celor dou faze majore ale ciclului celular: n interfaz nucleul este bine individualizat, delimitat de nveliul nuclear, nucleolii sunt vizibili, cromatina este dispersat. n mitoz nucleul sufer modificri complexe: condensarea cromatinei sub form de cromozomi, dezorganizarea nveliului nuclear i dispariia nucleolilor.

Structura nucleului n interfaz

nveliul nuclear
Este format din dou membrane concentrice:  membrana nuclear nuclear extern extern  membrana nucler nucler intern intern ntre cele dou membrane este delimitat spa aiul perinuclear. Spaiul perinuclear comunic cu lumenul reticulului endoplasmic (RE). Membrana nuclear extern are ataai ribosomi pe faa sa citoplasmatic (la fel ca i membrana RE).

Porul nuclear

- Porii nucleari au fost identificai n nveliul nuclear al tuturor

celulelor eucariote. Numrul de pori nucleari din nveliul nuclear al celulelor de mamifere variaz ntre 3.000 i 4.000.

- Porul nuclear este un edificiu multimolecular cu structur

complex, cu masa molecular de 125x106 daltoni, alctuit din 100 de tipuri diferite de proteine numite nucleoporine.

1 nveli nuclear

2 componenta inelar extern 3 componenta anular 4 fibrile convergente 5 fibrile paralele

Complexul porului nuclear prezint la microscopul electronic aspectul unui poligon cu opt laturi organizat n jurul unui canal central.

Imagini de microscopie electronic i modele computerizate ale structurii complexelor porilor nuclear.

 Dispunerea componentelor n complexul porului nuclear are o simetrie octogonal. Principalele componente din structura porului nuclear sunt: (a) subunitile dispuse sub form de coloane ce formeaz peretele porului, (b) subunitile centrale, fixate de peretele porului, ce delimiteaz deschiderea porului (numite subuniti anulare), (c) subunitile transmembranare ce ancoreaz complexul n membrana nuclear (numite subuniti lumenale) (d) subunitile inelare, dispuse circular pe cele dou fee ale complexului, faa nuclear, respectiv faa citosolic, i care sunt plasate la capetele coloanelor.

Porul nuclear
- Imagini de microscopie electronic (A) i (B). - Reprezentarea schematic a structurii porului nuclear: vedere de sus (C) i n seciune transversal (D).

(C)

(B) (A) (D)

Structura porului nuclear

De pe cele dou fee ale complexului porului nuclear se extind o serie de fibrile, cele dinspre citosol cu dispoziie paralel, iar cele de pe faa nuclear cu dispoziie convergent (ce seamn cu un co). n regiunea central a porului exist o reea fibrilar ce blocheaz difuzia pasiv a macromoleculelor de dimensiuni mari.

Transportul prin porii nucleari

Fenomenele de transport ce se desfoar la nivelul porilor nucleari sunt de dou tipuri: difuzia pasiv pentru moleculele mici, transportul activ (proces care necesit energie) pentru moleculele de dimensiuni mari.

Fiecare por nuclear poate transporta pn la 500 de macromolecule per secund, n ambele sensuri. Modul n care se realizeaz coordonarea acestui trafic bidirecional al macromoleculelor, astfel nct s se evite coliziunile i colmatarea porilor este nc neelucidat. ntruct controleaz traficul moleculelor ntre nucleu i citoplasm, porii nucleari joac un rol fundamental n controlul funciilor celulare.

 Transportul macromoleculelor este selectiv i se desfoar ntr-un singur sens, dinspre citoplasm spre nucleu (import) sau dinspre nucleu spre citoplasm (export). Importul este mediat de semnale de localizare nuclear (NLS, nuclear localization signal or sequence), n timp ce exportul este mediat de semnale nucleare de export (NES, nuclear export signal). Secvenele de aminoacizi ce funcioneaz ca semnale de localizare nuclear formeaz bucle sau aglomerri pe suprafaa proteinei pentru a fi accesibile interaciei cu receptorii specifici. Primul semnal de localizare nuclear descifrat a fost cel al antigenului T al virusului SV40 (protein viral necesar pentru replicarea ADN-ului viral n nucleul celulei infectate) i const ntr-o secven de aminoacizi bogat n Lys, n urmtoarea succesiune:

Pro-Pro-Lys Lys-Lys Lys-Lys Lys-Arg-Lys Lys-Val

Vizualizarea importului proteinelor nucleare sintetizate n citoplasm, la nivelul porilor nucleari

Imagine de microscopie electronic prezentnd ptrunderea n nucleu a unor particule sferice de aur coloidal nvelite cu proteina nuclear numit nucleoplasmin (porii nucleari sunt marcai cu rou).

In a test of T antigens of the SV40 virus, if the sequence is altered by even one amino acid (see figure below), the peptide is no longer transported to the nucleus. This is shown in this figure. The studies used immunofluorescence to detect either the native or the altered sequences which were conjugated to fluorescein. Note that only the native peptide could enter the nucleus. The light, fluorescence micrograph on the left (A) shows entry of the native peptide into the ovoid nuclei. The micrograph on the right (B) shows no entry into nuclei. The altered peptide stays in the cytoplasm.
Figure was taken from Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, Garland Pub., N.Y. 1994, Fig 12-13.

 Lamina nuclear
Lamina nuclear este o reea de natur proteic cu aspect fibros situat sub membrana nuclear intern, ce formeaz suportul structural al nucleului (menine forma i d stabilitate nveliului nuclear). Ataarea laminei de nveliul nuclear se realizeaz prin intermediul unor proteine integrale din membrana nuclear intern i prin ataare de complexele porilor nucleari. Lamina nuclear interacioneaz direct i cu cromatina, funcionnd astfel ca punte de legtur ntre ADN i nveliul nuclear. Reeaua de filamente este alctuit din proteine numite lamine nucleare, ce reprezint o clas special de proteine aparinnd filamentelor intermediare. Lamina nuclear este o structur dinamic ce se dezorganizeaz la intrarea n mitoz i se reorganizeaz la sfritul mitozei, odat cu refacerea nveliului nuclear.

Matricea nuclear
Studiile privind organizarea intern a nucleului au condus la identificarea unei reele de natur proteic numit matrice nuclear, alctuit din proteine nehistonice numite proteine scaffold. Filamentele matricei nucleare sunt dispuse ntr-o reea tridimensional ce formeaz n interiorul nucleului o structur cu rol analog citoscheletului. Matricea nuclear reprezint sediul unor procese importante ca replicarea ADN i procesarea ARN heterogen nuclear (hnARN), precursorul mARN. Macromoleculele de ADN se fixeaz de proteinele scaffold prin intermediul unor secvene polinucleotidice numite regiuni de ataare la scaffold (SAR, scaffold associated regions) sau MAR (matrix-attachment regions). Dei rolul secvenelor SAR nu este foarte bine precizat se consider c particip la organizarea cromozomilor i la reglarea transcrierii i replicrii ADN.