1. Determinarea vitezei de sedimentare a hematiilor 2. Determinarea rezistentei osmotice a eritrocitelor 3.Determinarea hematocritului 4.Dozarea hemoglobinei 5.

Numarul normal de eritrocite 6.Constante eritrocitare: V !" C# ! $. %amenul &rotiului de s'nge (eri&eric ).Numararea reticulocitelor

1. D * +!,N-+ - V,* . , D / D,! N*-+ - # !-*,,01+ 2V/#3 4+,N ! *1D- 5 /* +6+ N Principiu: #ematiile se sedimenteaza in vitro din s'ngele tratat 7n (realabil cu un anticoagulant. Materiale necesare: 8/olutie izotonica sterila de citrat trisodic 3") g91:: ml 84i(ete de stative 5estergreen 8*uburi gradate de 5 sau cel mult 1: ml 8!aterial necesar (entru (unctie venoasa Tehnica: 8/e re(artizeaza :"4 ml solutie izotonica de citrat trisodic. 84este solutia de citrat se recolteaza 1"6 ml s'nge venos (roas(at 2('na la nivelul de 2 ml3 si )4)n1315i se 8 mesteca. 8/e as(ira s7ngele citratat 7n (i(eta 5estergreen ('na la diviziunea : mm. 8/e aseaza (i(etele 5estergreen 7n stativ 7n (ozitie strict verticala.

8+ezultatul se citeste du(a 1h si du(a 2h. +ezultatul este re(rezentat de distanta ('na la care a cobor't coloana de eritrocite e%(rimata 7n mm. Erori de tehnica: /olutie de citrat in&ectata cu bacterii sau ciu(erci. !aterialul de recoltat sau (i(etele nu au &ost bine uscate. Cantitatea de s'nge si de solutie de citrat nu au &ost res(ectate. De(asirea a 485h de la recoltare V/# cu 2:; *uburile nu se aseaza (er&ect vertical. <nclinarea lor duce la cresterea V/#.

Interpretarea rezultatelor: -Valori normale: =: 181: mm9h >: 1813 mm9h co(ii: 1811 mm9h 8VSH creste:a.3 &iziologic: sarcina b.3 (atologic: boli hematologice: 8 leucemia acuta 8 anemie hemolitica autoimuna 8 (lasmocitom tumori maligne in&ectii acute si cronice boli de colagen in&lamatii acute 2cresterea concentratiei de globuline si &ibrinogen" care se de(un (e hematii3 necroza tisulara 2,!-" etc.3 $815 mm92h 1281$ mm92h ?812 mm92h

 8 VSH scade: (atologic:

anemii

(olicitemii 2&actor cantitativ3 he(atita" cc. he(atic 2nu se sintetizeaza &ibrinogen3 boli alergice" soc ana&ilactic medicamente: corticoizi" salicilatul

Factori care influenteaza VSH-ul: a3 @actori cantitativi: legat de numarul de eritrocite b3 /arcina electrica a (articolelor c3 @actor (roteic: necroze" in&lamatii: anumite (roteine aAung 7n circulatie V/# 2. DETET MI!E" E E#ISTE!$EI %SM%TI&E " E IT %&ITE'%

Principiu: /e urmareste com(ortarea eritrocitelor 7n solitii hi(otonede NaCl de di&erite concentratii si se indica: 1. concentratii la care a(ar (rimele semne de hemoliza B rezistenta minima

2. concentratii la care hemolizeaza toate eritrocitele B rezistenta maxima Tehnica: 2ser &iziologic :":?;3 8 8 8 8 12 e(rubete numerotate de la 25 la 14 solutie NaCl :"5; at'tea (icaturi c't indica numarul e(rubetei com(letam cu a(a distilata la 25 de (icaturi concentratia solutiei din e(rubeta se calculeaza 7nmultind numarul e(rubetei cu :":2.

8 8 8 8 8

o (icatura de s'nge (roas(at 7n &iecare e(rubeta omogenizarea latem(eratura camerei 3: min. Centri&ugare Citirea rezultatului: +ezistenta minima: (rima e(rubeta cu su(ernatant hemolizat +ezistenta ma%ima: (rima e(rubeta &ara sediment eritrocitar

Erori de tehnica: neres(ectarea e%acta a cantitatilor tem(eratura scazuta &olosire de s'nge vechi

Interpretarea rezultatului: -Valori normale: +ezistenta minima: :"46 8 :"42; NaCl +ezistenta ma%ima: :"3) 8 :"34 ; NaCl -Scaderea rezistentei osmotice: hematii 7mbatr'nite anemii hemolitice 2autoimuna si maAoritatea3 eritroblastoze 2hemat. (rod. tumoral3 s&erocitoza he(atita e(idemica

-Cresterea rezistentei osmotice: hematii tinere

corectarea anemiilor hemoragice du(a s(lenectomii (olicitemii talasemie anemie &eri(riva (.DETE MI!" E" HEM"T%& IT)')I

Definitie: #ematocritul re(rezinta &ractia elementelor &igurate din volumul total de s'nge. Indicatii: 4ermite a(recierea starii de anemie res(ectiv (oliglobulie. Principiul *etodei: Du(a centri&ugarea s'ngelui ('na ce hematiile ating un volum minim" 7naltimea coloanei celulelor este com(arata cu 7naltimea totala a coloanei de s'nge si &ractia celulelor e%(rimata 7n (rocente. Tehnica: 8/'ngele se recolteaza (rin 7nte(area (ul(ei degetului sau a lobului urechii 7n ca(ilare he(arinziate ('na la 495 din din lungime. 8/e astu(a ca(atul cu (lastilina.

8/e introduc 7n centri&uga cu ca(atul liber s(re a%" asezate simetric (entru echilibrare. 8Centri&ugare 384 minute la (este 1: ::: rotatii9 minut. 8Citirea rezultatului se &ace du(a o nomograma. Interpretarea rezultatului: a3 Valori normale: =: 45 C 5 ; b3 Valori crescute: policitemii: a.) 4olicitemie absoluta: 4olicitemie absoluta (rimara: 84olicitemia vera VaDuez81sler. 4olicitemia absoluta secundara: (rin stimularea secretiei de eritro(oetina: 8-ltitudine 8Eoli cardiace congenitale 8Eoli (ulmonarrre 8,nto%icatii cu substante chimice: anilina" (lumb" etc. 8/(lenectomie 81bezitate 8Eoli renale b.) 4olicitemie relativa: >: 4: C 5 ;

Deshidratare: 8diaree 8 varsaturi 8 arsuri 8 a(ort scazut de lichide

c) Valori scazute: a.) /caderi absolute ale hematocritului: anemii: la valori mai mici de 24 ; ale hematocritului anemia este &oarte severa. -nemii (rin de&icit de &ormare a eritrocitelor: 8-nemii a(lastice: radiatii" into%icatii" medicamente 8-nemii hi(ocrome: &eri(rive" hi(ersideremice 8-nemii megaloblastice 2de&icit de vitamina E12 si acid &olic3 -nemii hemolitice 8-nemii hemolitice de cauza intraeritrocitara: s&erocitoza" hemoglobini(atii" etc. 8 -nemii hemolitice de cauza e%traeritrocitara: cel mai &recvent autoimune -anemii (osthemoragice 2normocroma" normocitara3

b.) /caderea relativa a numarului de hematii: hemodilutie:

Consum crescut de lichide 2(olidi(sie3 4er&uziii #emodilutia din tim(ul sarcinii *rans&uzii de (lasma +.D%#" E" HEM%,'%-I!EI

Metode de dozare ase he*o.lo/inei: 4.1. Dozarea hemoglobinei ca o%ihemoglobina 4.2. Dozarea &otometrica a hemoglobinei ca cianhemiglobina si cianmethemoglobina 4.3. Dozarea s(ectro&otometrica a hemoglobinei 4.4. Dozarea electro&oretica a hemoglobinei +.0. Dozarea he*o.lo/inei ca o1ihe*o.lo/ina:

Principiul *etodei: /olutia diluata de amoniac (roduce hemoliza s'ngelui si totodaata 7m(iedica trans&ormarea hemoglobinei 7n methemoglobina. 1%ihemoglobina se dozeaza 7n &unctie de densitatea o(tica a solutiei la 54: nm2&iltru verde3. Tehnica: :":2 ml s'nge se omogenizeaza cu 5 ml solutie hidro%id de amoniu :"1;. /e citeste e%tinctia amstecului si se calculeaza concentratia hemoglobinei (rin inter(olare (e curba de calibrare. Valori normale: =: 13 8 1$ g9 1::ml

>: 12 8 15 g9 1::ml +.2. Dozarea foto*etrica a he*o.lo/inei ca cianhe*i.lo/ina si cian*ethe*o.lo/ina:

-ceasta determinare este metoda standard (e (lan mondial (entru dozarea hemoglobinei. Principiul *etodei: @ericianura de (otasiu o%ideaza &ierul &eros din hemoglobina 7n &ier &eric" iar acesta &ace ca toate &elurile de hemoglobina sa se trans&orme 7m methemoglobina sau hemiglobina" care (e masura ce se &ormeaza" se tran&orma 7n cianmethemoglobina sau cianhemiglobina" care se vor doza &otometric. Tehnica: :":2 ml s'nge venos sau ca(ilar se amasteca cu 5 ml reactiv Fam(en8 .Glstra" se omogenizeara si se lasa 7n re(aus 3: de minute. %tinctia se va citi la 54: nm. Concentratia hemoglobinei se calculeaza (rin inter(olare (e curba de calibrare. +.(. Dozarea spectrofoto*etrica a he*o.lo/inei:

-ceast este o metoda cantitativa de dozare a hemoglobinei. Principiul *etodei: Derivatii hemoglobinei" &iind substante colorate 2(rin com(onenta (or&irinica3" (ot &i usor deosebite (rin s(ectrul lor de absorbtie. Deri2atii he*o.lo/inei: a3 #b12 2o%ihemoglobina3: are doua s(ectre de absorbtie 7n zona galben8 verde 25$:8545nm3. +e(rezinta ?$; din hemoglobina 7n s'ngele arterial si $:8$5; 7n s'ngele venos. b3 #b# 2hemoglobina redusa3 c3 #bC1 2carbo%ihemoglobina3:7n mod normal re(rezinta :"582; din hemoglobina" iar la &umatori 7n Aur de 6.5;.

d3 !et#b : 7n mmod normal re(rezinta :"281;. e3 #bC12 2carbhemoglobina3" concentrtia acestuia variaza 7n limite largi" este mai mare 7n s'ngele venos si mai mic 7n s'ngele arterial. +.+. Dozarea electroforetica a ho*o.lo/inei: Principiul *etodei: #emoglobina si derivatii sai migreaza 7n c'm( electrostatic" datorita com(onentei lor (roteice. <n com(aratie cu (roteinograma e&ectuata din (lasma" la (roteinograma e&ectuata din ser hemolizat a(ar benzi 7n (lus 7n &ractiunile 7n care migreaza di&eritele ti(uri de hemoglobina" 7n s(ecial 7n H 2. Concentratia hemoglobinei se (oate determina densitometric. Tipuri de he*o.lo/ina: a3 #b-1: migreaza 7n &ractiunea I2" H2 si re(rezinta ?68?) ; din hemoglobina. b3 #b-2: migreaza 7n &ractiunea I2" J2" re(rezinta 183; din hemoglobina. c3 #b@: migreaza 7n &ractiunea I2" K2 si re(rezinta :"58 :"); din hemoglobina.

3. !)M4 )' DE E IT %&ITE

Valori nor*ale: =: 4.5::.::: 8 5.:::.:::9mm3 >: 4.2::.::: 8 4.5::.:::9mm3 nou nascuti: 5.:::.::: 8 6.:::.:::9mm3 "ne*ie: =: < 4.5::.:::9mm3 >: < 4.:::.:::9mm3

5. &%!ST"!TE E IT %&IT" E
0. &onstanta de *ari*e: VEM 2volumul eritrocitar mediu3 Interpretare: 8 )$ 5 3 B normocitoza

8 8

V ! L ): 3 B microcitoza V ! >1:: 3 B macrocitoza 2megalocitoza3 &HEM 2concentratia de #b eritrocitara medie3

2. &onstanta de culoare:

Definitie: C# ! re(rezinta hemoglobina din 1:: ml masa eritrocitara. Interpretare: 8C# ! B34 2 g91:: ml masa eritrocitara : normocromie 8C# ! < 3: g; : hi(ocromie 6. E7"ME!)' F %TI)')I DE S8!,E PE IFE I& @rotiu (eri&eric se studiaza du(a colorare cu colorant 6iemsa. /e vor urmarii: $.1.4arametrii de marime $.2.@orma eritrocitelor $.3.Colorabilitatea eritrocitelor $.4.4rezenta sau absenta incluziunilor celulare 6.0.Para*etrii de *ari*e /e masoara diametrul eritrocitar 7n micrometrul ocular. Diametru eritrocitar normal este de $8) metrii"aceste celule numindu8se normocite. 6.0.0. "no*alii de *ari*e: 8 macrocite: )81: metri. /e 7nt7lnesc 7n insu&icienta he(atica. 8 megalocite: 1:815 metri. -(ar 7n anemia (ernicioasa. 8 microcite: 58 6 metri. -(ar 7n anemia &eri(riva hi(ocroma si 7n icter hemolitic. !aG 8 6rMnNald 8

8 anizocitoza: eritrocite de marimi di&erite. /e 7nt7lnesc 7n a&ectiuni cu hemato(oeza crescuta 2corectarea anemiilor hemolitice" (osthemoragice" tratamentul e&icient al anemiei &eri(rive si anemiei (ernicioase3. 6.0.2. &ur/a Price 9ones /tabilirea mai e%acta a variatiilor diametrului eritrocitar se e&ectueaza (rin determinarea diametrului eritrocitar mediu si realizarea curbei 4rice Oones sau curba de distributie a diametrelor eritrocitare medii: Tehnica: 8 8 /e masoara (e &rotiu" cu aAutorul micrometrului ocular diametrul a 25: 8 5:: de eritrocite. /e gru(eaza eritrocitele numarate (e di&erite valori de diametru si 7nscriind valorile 7ntr8un sistem de coordonate.

Interpretarea rezultatului: 8v'r& B diametrul eritrocitar mediu 2D !3 8baza B grad de variatie a diametrului eritrocitar 2anizocitoza3 curba normala: v'r& B $"5 baza 5 8 )"5

;3:

$"5 4atologic:

4 4"5 5 5"5 6 )"5 ? ?"5 1:

6"5

a.3 Devierea la st'nga: v'r&ul curbei la 6 se numeste microcitoza. 8 8 icter hemolitic congenital anemii hi(ocrome &eri(rive b.3 Devierea la drea(ta: v'r&ul curbei la ? este macrocitoza. 8 8 6.2. For*a eritrocitelor: <n mod normal ertrocitele au &orma unui disc biconcav. "no*alii de for*a: a.) Sferocitoza 8 hematii de &orma s&erica cu diametru mic icter hemolitic congenital anemie megaloblastica macrocitara ciroze

b.)Celule n tinta 2&orma discoidala cu (unct central3 anemia CooleG s(lenectomie

c.3 !repanocite 2eritrocite &alci&orme3 hemoglobinoza /

d.3 "oi#ilocitoza 2&orme di&erite de hematii: as(ecte de (ara" de racheta de tenis3 anemia megaloblastica

talasemie

e.3 Corpi n semiluna 2resturi de eritrocite distruse3 anemii hemolitice

6.(.&olora/ilitatea eritrocitelor: "no*alii de colora/ilitate: a.3Hipocromie 2eritrocite (alide3 anemie &eri(riva

b.3Hipercromie 2imagine &alsa data de cresterea 7naltimii hematiei3 anemie megaloblastica s&erocitoza

c.3$nizocromie 2eritrocitonormocrome si hi(ocrome3 anemii grave regenerative

6.+.Prezenta sau a/senta incluziunilor celulare: Cor(usculii intraeritrocitari cel mai &recvent 7nt'lniti sunt: 13 Corpusculii Heinz: granule mici rotunde" asezate la (eri&eria celulei. /e coloreaza cu albastru de Nil. into%icatii cu substante methemoglobinizante

23 Corpusculii %oll&: resturi de cromatina nucleara cu as(ect rotund. anemii grave 7n s(ecial megaloblastice

33 'nele Cabot: &ormatiuni subtiri" &ilamentoase 7n &orma de inel sau de ci&ra ). anemii grave din neo(lasme" anemii a(lastice

:. !)M4 " E"

ETI&)'%&ITE'%

ste un test (entru diagnosticul di&erential al anemiilor care evalueaza ca(acitatea medulara de (roductie a eritrocitelor. Principiu: du(a trecerea 7n circulatie reticulocitele (astreaza 7nca tim( de 182 zile com(le%e ribonucleo(rotidice care nu se coloreaza cu !66 dar a(ar ca un reticul de coloratie albastruie cu albastru de crezil. Interpretarea rezultatului: -Valori normale: 5815; sau 2:.::: 8 ):.:::9mm3 8Cresterea numarului de reticulocite: 7nseamna hi(erreactivitate medulara: anemii hemolitice anemii (osthemoragice tratament e&icient cu @e" E6" E12.

8/caderea numarului de reticulocite: <nseamna inhibitie medulara: anemii hi(o sau aregenerative