BIOFIZIC CELULAR I SUPRAMOLECULAR

- caracteristic biosistemelor - limite distincte - le separ de

mediul = membranele biologice (si nivel subcelular)
Celula = unitatea de baz morfofuncional a organismelor
vii. ( specializat pentru a ndeplini o anumit funcie fiziologic), Se
caracterizeaz prin parametrii fizici: dimensiune (m), form, timp
de via, grad de difereniere, pH, vscozitate, etc
Celula : nucleu, citoplasm i membran celular.
Nucleul = centrul de control pentru reaciile din celul i
reproducerea ei
Citoplasma = soluie coloidal n care sunt dispersate diferite
macromolecule i organite celulare: mitocondrii, lizozomi, reticul
endoplasmatic, aparat Golgi, corpusculi i vezicule.
Membrana celular = matrice fosfolipidic cu un dublu strat
proteic. D. p.d.v. biofizic este cea mai important component a
celulei ( toate substanele din mediile extra i intracelulare sunt
transportate prin membran).


FUNCIILE I ARHITECTURA SUPRAMOLECULAR A
MEMBRANEI CELULARE

- o barier, - cu rol de comunicare n ambele sensuri; = o punte
de legtur ntre mediul extern i cel intern prin care se transfer
energie i substan.
grosimea : 50-100 . ; separ citoplasma de lichidul interstiial
( mediul de dispersie este apa, iar faza dispersat o constituie
ionii, micromoleculele ,macromoleculele, etc). (dou lichide
izotone cu presiune osmotic de aproximativ 300 de miliosmoli/l)
Structura, funciile membranei se studiaza prin :
- difracie de raze X;
- microscopie electronic prin metode de ngheare i rupere
a stratului;
- metode termodinamice ;
- metode electrochimice, etc.
Celula Unitatea structurala de
baza
Funciile membranei

1. Rol de separare (de barier) fa de mediul extern;
2. Semipermeabilitate, selectivitate; limiteaz, controleaz transportul ionilor,
electroliilor i moleculelor, zon de comunicare controlat intra-extracelulara, n
ambele sensuri;
3. izoleaz celulele din punct de vedere electric, prin meninerea sarcinilor electrice pe
suprafaa exterioar i interioar a membranei (ex; celula nervoas are teaca de mielin
care izoleaz electric neuronul) si transmite impulsurile de-a lungul su;
4. Constituie sediul unor enzime funcionale cu rol n conversia i stocarea unor
energii; n controlul i desfurarea reaciilor biochiomice;
5. sub aciunea unor factori sufer modificri funcionale de adaptare
6. Este implicat n replicarea ADN, n biosinteza proteinelor , n bioenergetica
celular .
Permeabilitatea = principala caracteristic a membranelor celulare. Coeficientul de
permeabilitate P msoar viteza de difuzie cu care ionii i macromoleculele pot traversa o
membran de grosime X bine definit( legea I a lui Fick ) :
Permeabilitatea = principala caracteristic a membranelor celulare.
Coeficienrul de permeabilitate P msoar viteza de difuzie cu care ionii i
macromoleculele pot traversa o membran de grosime X bine definit( legea I a
lui Fick ) :
X
D
P
factor un de depinde P
X
D
P
C C SP C C
X
D
S
dt
dm
m
|
|
=
=
= =
,
) ( ) (
2 1 2 1
dm/dt = viteza de difuziune a subst-lor prin membran, P=permeabilitatea
(cm/s), S=aria de trecere a subst-lor dintr-un compartment n altul, C
1
i C
2

=concentraiile n compartimentele separate de membran.
Compoziia membranei celulare
-Lipide, matricea structural (pot stoca energie) : 65% fosfolipide, 25%
colesterol, 10% alte lipide
-Proteine
-Carbohidrai
-Ioni
-Ap

Molecul amfifil: o zon polar hidrofil (terminaia acid) i una hidrofob (terminaia alchil)

A: micele, molecule discoidale; B: dublu straturi; molecule amfifile cu 1 sau 2 catene hidrofobe

Organizarea materiei vii = biosinteza si asamblarea ordonata a componentilor moleculari.
Autoasamblarea moleculelor biopolimerice = tendinta moleculelor -> energie libera minima.
Efectul hidrofob are rol preponderent in formarea structurilor supramoleculare. In apa,
moleculele amfifile formeaza structuri incat lanturile hidrofobe (alchil) sa evitecontactul cu apa.
Micele = capete polare spre exterior, cele hidrofobe spre interior.
Proteine: 20% - mielin, 75% - n membrana mitocondrial .
Proteinele rol de :- Transportori; - Canale; - Receptori;- Enzime
Proteinele = responsabile pt funciile membranei, organizarea
spaial i funcionalitatea.
Carbohidraii care pot fi imersai n stratul bilipidic sunt :
-Galactoze; Hexoze; Galactozamine;Hexozamine, etc.
Componentele primare se combina in compui compleci ca
lipoproteine, glicoproteine, glicolipide, glicolipoproteine, etc.
Ionii se pot aeza pe faa intern sau extern a membranei i de
asemenea n canalele ionice care traverseaz membrana. (H
+
, Na
+
,
K
+
, Cl
-
, HClO
3
-
, Ca
2+
, Mg
2+
, Fe
2+
, Fe
3+
).
Apa poate fi structurat , legat n jurul ionilor sau al unor
macromolecule i in form liber.
Structura supramolecular a membranei celulare
n 1972 Singer i Nicholson au evideniat experimental -
membrana celulara este un MOZAIC FLUID LIPOPROTEIC (strat
bilipidic n care sunt inserate proteine).
Exist proteine care formeaz canale ionice, pompe ionice i altele
care nu traverseaz stratul bilipidic.
strat bilipidic
Model mozaic fluid al structurii membranelor (seciune transversala). FL=fosfolipide;
C=colesterol; PGI,PGE=proteine globulare intrinseci, extrinseci; MIA: mediu ionic apos;
MIH=mediu intern hidrofob; CP=capete polare; I=ioni; LH:lanuri hidrocarburice

Dup modul de legare al proteinelor : (M=membrana; TRM=transport
transmembranar)
- proteine intrinseci (integrale) - 70% - traverseaz M, implicate n transportul
TRM
- proteine extrinseci (periferice) - 30% - se gsesc la suprafaa M;
au caracterul hidrofil; - pot interaciona cu proteinele din M ( complexe proteice);
au rol important n transportul informaiilor spre interiorul celului.

Interaciunile lipide - proteine nu sunt puternice, se mica independent n planul
membranar, membrana este fluid, moleculele dispun de grade de libertate.

Proteinele sunt foarte libere efectueaz att micri de translaie lateral
prin bistrat, i micri de rotaie in jurul axei perpendiculare pe stratul
bilipidic.
Lipidele au micri de translaie i de rotaie, ele pot trece dintr-un strat lipidic n
cellalt.
Glicoproteinele se afl doar pe faa extern a membranei ( s-a determinat
experimental)

T
Transportul prin membrana celulara

Celula vie = sistem termodinamic deschis
Dup dimensiunile moleculelor ce sunt transportate, se disting 2 tipuri de transfer
:
microtransfer pentru micromolecule, cu pastrarea integritii membranei
celulare
macrotransfer pentru macromolecule transport prin
fagocitoz = nglobarea unor particule solide de dimensiuni mari, prin
pseudopode prelungiri protoplasmatice, sau prin
Pinocitoz=nglobare de picturi de lichid extracelular.

Microtransportul - n funcie de consumul de energie:
Transport pasiv(entropic) = transportul ionilor n direcia gradienilor de
concentraie, presiune, potenial electric, temp i se face fr consum
energetic, prin difuzie, osmoza

Transport activ (antientropic) se face cu consum de energie metabolic cu
ajutorul moleculelor transportoare care au proprieti enzimatice; este n sens
contrar gradienilor de concentraie, potential electric, de presiune osmotic i
de temperatur.
Transportul pasiv : 1) difuzie simpl (medicamente, acizi grasi, alcooli),
prin 2)canale ionice, selective sau neselective
3) difuzie facilitat cu ajutorul unor molecule proteice transportoare, fr
proprieti enzimatice i al unor ionofori transportori difuzabili, formatori de ioni.
Transport pasiv: difuzie simpl; prin canale ionice, influx pt Na
+
, eflux pt K
+
2 1
2
) (
) (
S E
complex
ES
S E
K
K
K
+ +

+

Caracteristici pentru canalele ionice:
- mediaz transportul pasiv cu energie redus de transport
- specificitate pentru un anumit ion
- posibilitatea de saturare la concentraii mari
- posibilitatea de inhibare
n general, ionii transportai prin canale sunt cationii de Na
+
, K
+
, Ca
2+
, iar
anionii mai puin.
Acest tip de transport joac un rol important n transportul substanelor nutritive
i a produilor de catabolism (catabolii).
2 1
2
) (
) (
S E
complex
ES
S E
K
K
K
+ +

+

10
6
10
8
ioni/s. Proteinele canalului ionic sunt mari, 300.000 Da. Transportul prin canale ionice
poate fi folosit ca traductor de semnale ( transportul Ca
2+
- important in meninerea
contractibilitii musculaturii cardiace). Cuplrile cu alt ion reduc consumul de energie. Reduc
bariera energetic cauzat de interiorul nepolar al stratului bilipidic (cca 60 kcal/mol) prin realizarea
unei ci polare apoase mediaz difuzia cationilor. Fluxul ionilor de Na
+
i K
+
prin membrana
celular se realizeaz conform gradientului electrochimic, influx pentru Na
+
, eflux pentru K
+
.
Transportul pasiv - difuzie simpl (medicamente, acizi grasi, alcooli)
prin canale ionice, selective sau neselective
- difuzie facilitat cu ajutorul unor molecule proteice transportoare, fr
proprieti enzimatice i al unor ionofori transportori difuzabili, formatori de ioni.
Transport pasiv:difuzie simpl; prin canale ionice
2 1
2
) (
) (
S E
complex
ES
S E
K
K
K
+ +

+

Difuzia facilitat
Apare efectul ping-pong o protein ataeaz una sau mai
multe macromolecule, i prin fenomenul de modificare
conformaional, o transfer n interiorul celulei.
-transport de 300 molecule/s
-molecule transportate prin difuzie facilitat: glucoz, uree, aminoacizi,
glicerol .a.
Un caz particular: transportul ionilor prin formarea n jurul lor a unor structuri
hidrofobe, care permit difuzia prin stratul lipidic (ionofor); faciliteaz
translocarea ionilor de pe o parte pe alta, cu ajutorul proteinelor cru.
S
(1)
+ C
(1)
SC
(1)
SC
(2)
S
(2)
+C
(2)

S ion transportat (substrat)
C protein cru
Mecanismul de transport cu ionofori mobili, transport pasiv n sensul
gradientului electrochimic, nceteaz cnd substratul are aceeai concentratie
n ambele compartimente desprtite de membran.



proteinelor cru.


), (
2 1
X X KN
dt
dN
=

unde X
1
X
2
fracie de saturare a proteinelor pe cele 2 fee;
N numrul de proteine din membran;
K constant de reacie.

Exemple de proteine cru:
-valinomicina, o tripeptid pentru transportul K
+

-gramicidin, pentru transportul Na
+


Proteinele cru au rol important n transportul pasiv.
S(1) + C(1) SC(1) SC(2) S(2) +C(2)
Difuzia facilitat
Apare efectul ping-pong o protein ataeaz una sau mai
multe macromolecule, i prin fenomenul de modificare
conformaional, o transfer n interiorul celulei.
Transportul activ - n sens opus gradientului, cu ajutorul moleculelor transportoare cu
proprietile enzimatice i cu consum de energie.
Transportul 1)activ primar are loc prin pompele ionice cuplate cu o reacie productoare
de energie. Transportul 2)activ secundar este cuplat cu transportul simultan al unei alte
substane n sensul gradientului.
Exemple:
1. Pompa de Na+/ K+ - pomp prin membran
- este ataat cu o reacie productoare de energie
(prin hidroliz)
ATP + H
2
O > ADP + Pi +W (1)
Pi fosfat anorganic
W energie
G energia liber G = - 7,3 Kcal/mol.
[Na+]int << [Na+]ext
[Ki+] >> [Ke+]
Proteina transportoare - se numete ATP-az i transport
3 ioni de Na din interior i doi ioni de K din exterior. Pentru
175 de cicluri/s , dac rezistena este de 10
12
, iar curentul
ionic este de 10
-15
A, tensiunea este de ordinul mV.
U = RI=10
12
* 10
-15
A =10
-3
V=1mV
ATP-aza este o protein tetrameric, care are 2 subuniti
, cu masa molar de 112.000 Da i 2 subuniti , cu masa
molar de 34.000 Da.
3[Na
+
]i + 2[K
+
]e + ATP > 3 [Na
+
]e + 2[K
+
]i + ADP + Pi
Pompa de Na+/ K+ -
2. Pompa calcic: transport ionul Ca2+.
2[Ca
2+
]
i
+ ATP > 2[Ca
2+
]
e
+ ADP + P
i
Enzima specific reaciei este ATP-aza Ca
2+
, care face
transportul a doi ioni de Ca
2+.
Proteina calmodulin, M=20000Da, leag Ca
2+.

3. Pompa de H
+
/K
+

Transportul realizat de aceast pomp se petrece n mucoasa
gastric, cu o reacie de hidroliz a ATP-ului. Mecanismul de
transfer al cationilor se bazeaz pe modificri conformaionale ale
enzimelor specifice (ATP-aze).
Caracteristici:
Pompele ionice au urmtoarele caracteristici:
- transportul de ioni este cuplat cu reacia de hidroliz a ATP
- mecanismul de transfer al cationilor se bazeaz pe modificri
conformaionale
- n decursul ciclului are loc fosforilarea enzimei, faza n care n
locul fosfatului se leag vanadatul, pompa poate fi inhibat.
Mecanism de transport cu ionofori mobili Mecanism de transport al pompei Na
+
-K
+
ATP-aza Na+/K+ specifica ATP-sintetaza(pompa cu protoni)
Mecanism de transport antiport(contratransport) Mecanism de transport simport(cotransport)

S
1
P
2
=S
2
P
1
S
1
/S
2
=P
1
/P
2
(ex: Na
+
/Ca
2+
) S
1
/S
2
=P
2
/P
1
(ex:Na+/glucoza)
Transport activ secundar.
Mecanism de transport antiport Mecanism de transport simport


Modaliti de transport pasiv


1)Difuzia simpl
2)Difuzia facilitat
Difuzia prin canale i pori

Transport activ


1)primar -pompe ionice

2)secundar -simport
-antiport
Prin hidroliza ATP =>ADP , fosfat anorganic (Pa) i energie:
ATP +H2O ADP +Pa i energie liber: AG=-7,3kcal/mol
ADP + Pi + energie-> ATP