MINISTERUL EDUCAIEI I CERCETRII UNIVERSITATEA DIN ORADEA FACULTATEA DE TIINE

CARMEN SORINA CORBU

TEZ DE DOCTORAT
STUDIEREA FENOMENULUI DE ALELOPATIE LA PLANTE

Conductor tiinific: Prof. univ. dr. DORINA CACHI-COSMA

-2007-

CUPRINS PREFA CONSIDERAII GENERALE 1.1. INTRODUCERE ........................................................................................9 1.2. ISTORICUL CERCETRILOR ALELOPATICE ..............................12 1.3. SUBSTANE INHIBITOARE N INTERACIUNILE DINTRE PLANTE .....................................................................................................15 1.3.1. Efectul alelopatic la Parthenium argentatum .................................15 1.3.2. Efectul alelopatic al unor plante din deert .....................................15 1.3.3. Inhibitori hidrosolubili ....................................................................17 1.3.4. Terpene volatile ...............................................................................17 1.4. SUBSTANE STIMULATOARE IN INTERACIUNILE DINTRE PLANTE .....................................................................................................19 1.5. ACIUNEA FIZIOLOGIC A SUBSTANELOR ALELOCHIMICE: IDEI I PERSPECTIVE ........................................19 1.5. 1. Plante modificate genetic (G. M.) ....................................................19 1.5. 2. Legtura genetic .............................................................................20 1.5. 3. Oportuniti genomice ......................................................................21 1.6. METABOLII SECUNDARI CA ALELOCOMPUI N APRAREA PLANTELOR MPOTRIVA MICROORGANISMELOR DIN FILOSFER ..............................................................................................21 1.6.1. Introducere ........................................................................................21 1.6.2. Fitoanticipine i fitoalexine ...............................................................22 1.6.3. Identitatea chimic a metaboliilor secundari cu efect antimicrobian.......................................................................................23 1.7. STRESUL I ALELOPATIA ................................................................26 1.7.1. Introducere ........................................................................................26 1.7.2. Co-stresul i GAS ..............................................................................27 1.7.3. Competiia .........................................................................................28 1.7.4. Adaptarea plantelor la stres ...............................................................29 1.8. AUTOTOXICITATEA - ROLUL CAFEINEI N DECLINUL INTERVENIT N PLANTAIILE DE CAFEA I DE CEAI ..............30 1.8.1. Introducere ........................................................................................30 1.8.2. Prezena autotoxicitii n plantaiile de cafea i de ceai i cauzele producerii acesteia ..............................................................................31 1.8.3. Extractului apos din plantele de cafea i ceai i efectele acestuia asupra germinaiei seminelor i a creterii radicelelor plantulelor de salat ...................................................................................................32 1.8.4. Alcaloizii din ceai i germinaia seminelor ......................................33 1.8.5. Izolarea cafeinei din solurile plantaiilor de cafea ............................33 1.8.6. Modul de aciune al cafeinei asupra celulelor vegetale. Germinaia seminelor de cafea n prezena cafeinei ............................................34 2

1.

1.9. INTERACIUNI ALELOPATICE IN ECOSISTEME FORESTIERE DIN REGIUNILE TEMPERATE ...........................................................35 1.10. IMPORTANA ECOLOGIC A INTERACIUNILOR BIOCHIMICE STABILITE NTRE PLANTELE NVECINATE SAU CARE SE SUCCED, N TIMP, PE UN ACELAI TERITORIU ........37 1.10.1. Introducere ......................................................................................37 1.10.2. Importana practic a interaciunilor biochimice n agricultur ......38 1.10.3. Substanele alelochimice ca erbicide naturale .................................39 1.10.4. Alelocompuii, produi naturali valoroi pentru obinerea erbicidelor sintetice .........................................................................42 1.10.5. Substanele alelochimice ca insecticide naturale ............................44 1.10.6. Utilizarea transgenelor pentru generarea de alelocompui .............45 1.10.7. Utilizarea de plante alelopatice n culturile asociate .......................45 1.11. ROLUL UNOR FACTORI ABIOTICI AI ECOSISTEMILUI ASUPRA BIOCENOZEI ..........................................................................46 2. CERCETRI PROPRII 2.1. SCOPUL LUCRRII ..............................................................................48 2.2. MATERIAL I METOD ......................................................................48 2.2.1. Determinarea germinaiei materialului semincer ..............................50 2.2.2. Biometrizarea creterii n lungime a plantulelor i a organelor acestora ...............................................................................................51 2.2.3. Determinarea greutii proaspete i uscate a biomasei vegetale rezultate din cntrirea ntregii plantule .............................................52 2.2.4. Determinarea fotocolorimetric a activitii peroxidazice din rdcini................................................................................................53 2.3. REZULTATE I DISCUII ...................................................................58 2.3.1. Aspecte privind aciunea alelopatic a extractului apos preparat din frunze de nuc negru (Juglans nigra L.) ..............................................58 2.3.1.1. Introducere ...............................................................................58 2.3.1.2. Particulariti de metodic .......................................................61 2.3.1.3. Rezultate i discuii ..................................................................61 2.3.1.3.1. Efectul extractului apos preparat din frunze de nuc negru (Juglans nigra L.) asupra germinaiei materialului semincer ...........................................................................61 2.3.1.3.2. Creterea plantulelor sub efectul extractului apos preparat din frunze de nuc negru (Juglans nigra L.) .....................70 2.3.1.3.3. Efectul extractului apos preparat din frunze de nuc negru (Juglans nigra L.) asupra acumulrii de biomas vegetal la plantulele supuse biometrizrilor privind creterea .....94 2.3.1.3.4. Activitatea peroxidazic n rdciniele embrionare ale plantulelor biometrizate dup germinarea materialului semincer pe substrat umectat cu extract apos preparat din frunzele tinere de nuc negru (Juglans nigra L.) ............107 2.3.1.4.Concluzii pariale ....................................................................115 3

2.3.2. Aspecte privind aciunea alelopatic a extractului apos preparat din fructe de nuc negru (Juglans nigra L.) ............................................117 2.3.2.1. Introducere .............................................................................117 2.3.2.2. Particulariti de metodic .....................................................117 2.3.2.3. Rezultate i discuii ................................................................118 2.3.2.3.1. Efectul extractului apos preparat din fructe de nuc negru (Juglans nigra L.) asupra germinaiei materialului semincer .........................................................................118 2.3.2.3.2. Creterea plantulelor sub efectul extractului apos preparat din fructe de nuc negru (Juglans nigra L. )....................127 2.3.2.3.3. Efectul extractului apos preparat din fructe de nuc negru (Juglans nigra L.) asupra acumulrii de biomas vegetal la plantulele supuse biometrizrilor privind creterea ..151 2.3.2.3.4. Activitatea peroxidazic n rdciniele embrionare ale plantulelor biometrizate dup germinarea materialului semincer pe substrat umectat cu extract apos preparat din fructe crude de nuc negru (Juglans nigra L.) ................166 2.3.2.4. Concluzii pariale ...................................................................173 2.3.3. Aspecte privind aciunea alelopatic a extractului apos preparat dim pri de plant de pelin alb (Artemisia absinthium L.), respectiv din rdcin, frunze sau flori ..................................................................174 2.3.3.1. Introducere .............................................................................174 2.3.3.2. Particulariti de metodic .....................................................176 2.3.3.3. Rezultate i discuii ................................................................177 2.3.3.3.1. Efectul extractului apos preparat din pri de plant de pelin alb (Artemisia absinthium L.), respectiv din rdcin, frunze sau flori asupra germinaiei materialului semincer..........................................................................177 2.3.3.3.2. Creterea plantulelor sub efectul extractului apos preparat din pri de plant de pelin alb (Artemisia absinthium L.), respectiv din rdcin, frunze sau flori ..........................186 2.3.3.3.3. Efectul extractului apos preparat din pri de plant de pelin alb (Artemisia absinthium L.), respectiv din rdcin, frunze sau flori asupra acumulrii de biomas vegetal la plantulele supuse biometrizrilor privind creterea .........................................................................207 2.3.3.3.4. Activitatea peroxidazic n rdciniele embrionare ale plantulelor biometrizate dup germinarea materialului semincer pe substrat umectat cu extract apos preparat din flori de pelin alb (Artemisia absinthium L.)..................226 2.3.3.4. Concluzii pariale ...................................................................231 2.3.4. Aspecte privind aciunea alelopatic a extractului apos preparat din rdcinile metamorfozate de hrean (Armoracia rusticana L.) ........233 2.3.4.1. Introducere .............................................................................233 4

2.3.4.2. Particulariti de metodic .....................................................235 2.3.4.3. Rezultate i discuii ................................................................235 2.3.4.3.1. Efectul extractului apos preparat din rdcinile metamorfozate de hrean (Armoracia rusticana L.) asupra germinaiei materialului semincer ..................................235 2.3.4.3.2. Creterea plantulelor sub efectul extractului apos preparat din rdcinile metamorfozate de hrean (Armoracia rusticana L.) ...................................................................246 2.3.4.3.3. Efectul extractului apos preparat din rdcinile metamorfozate de hrean (Armoracia rusticana L.) asupra acumulrii de biomas vegetal la plantulele supuse biometrizrilor privind creterea ...................................270 2.3.4.3.4. Activitatea peroxidazic n rdciniele embrionare ale plantulelor biometrizate dup germinarea materialului semincer pe substrat umectat cu extract apos preparat din rdcinile metamorfozate de hrean (Armoracia rusticana L.), recoltate n perioada de nflorire a plantei ..............284 2.3.4.4. Concluzii pariale ...................................................................290 2.3.5. Aspecte privind aciunea alelopatic a extractului apos preparat din rdcinile tuberizate de ridichi (Raphanus sativusL.) ......................292 2.3.5.1. Introducere .............................................................................292 2.3.5.2. Particulariti de metodic .....................................................294 2.3.5.3. Rezultate i discuii ................................................................295 2.3.5.3.1. Efectul extractului apos preparat din rdcinile tuberizate de ridichi (Raphanus sativus L.) asupra germinaiei materialului semincer .....................................................295 2.3.5.3.2. Creterea plantulelor sub efectul extractului apos preparat din rdcinile tuberizate de ridichi (Raphanus sativus L.)....................................................................................304 2.3.5.3.3. Efectul extractului apos preparat din rdcinile tuberizate de ridichi (Raphanus sativus L.) asupra acumulrii de biomas vegetal la plantulele supuse biometrizrilor privind creterea .............................................................328 2.3.5.3.4. Activitatea peroxidazic n rdciniele embrionare ale plantulelor biometrizate dup germinarea materialului semincer pe substrat umectat cu extract apos preparat din rdcinile tuberizate de ridichi de iarn (Raphanus sativus L., convar. niger) ............................................................344 2.3.5.4. Concluzii pariale ...................................................................350 2.4. CONCLUZII GENERALE ...................................................................352 BIBLIOGRAFIE

CONSIDERAII GENERALE n acest lucrare de doctorat sunt prezentate diferite aspecte referitoare la fenomenul de alelopatie n care se trateaz complexitatea interrelaiilor dintre organismele vii, mecanismele biochimice care stau la baza adaptrii plantelor la mediul nconjurtor i la baza interrelaiilor ce exist ntre diferite specii vegetale, rolul biochimic al unor compui secundari de metabolism existeni n plante, precum i felul n care se pot manipula interaciunile alelopatice spre avantajul nostru n practica agricol. Alelopatia nu este altceva dect un domeniu al biochimiei ecologice care studiaz interrelaiile dintre plante prin intermediul mesajelor (semnalelor) chimice (Neamu, 1983). Efectele alelopatice se produc ntre specii diferite de plante, dar i ntre indivizii din cadrul aceleai specii. Compuii chimici care iau parte la interaciunile biochimice dintre plante poart denumirea general de substane alelopatice. Ei sunt compui secundari ai plantelor, cu mas molecular mic, prezeni n diferite organe ale multor specii vegetale cum sunt frunzele, florile, fructele i seminele, dar i n tulpini i n rdcini, mai ales a celor perene (Mir i colab., 1998; Delachiave, 1999). Aceti produi alelochimici nu au rol n procesele metabolice primare, eseniale pentru supravieuirea plantelor, i sunt produi ca i consecine ale cilor metabolice primare. n contrast cu metabolismul primar, care cuprinde mai multe sute de compui moleculari, cu greutate sczut, se cunosc zeci de mii de produi secundari de metabolism, caracteristici speciilor vegetale, dar numai un numr limitat dintre acetea sunt implicai n procesele alelochimice (Rice, 1984), cel puin la actualul nivel al cunotinelor. Efectele alelopatice sunt produse de substanele chimice desorbite n mediul exterior de ctre unele specii de plante. ntre compuii alelochimici predomin alcaloizii, fenolii, terpenoizii i glicozidele. Majoritatea substanelor alelochimice se gsesc, iniial, n corpul plantelor, sub o form inactiv. n urma unor transformri ulterioare (hidroliz, oxidoreducere, metilare sau demetilare, etc.) sunt generai produi noi, cu proprieti alelopatice aparte (Whittaker, Feny, 1971, citai de Neamu, 1983). Compuii alelopatici afecteaz diviziunea celular a plantelor concurente, activitatea fitohormonilor, eficiena funcional a cloroplastelor i a mitocondriilor, dinamica enzimatic, funciile biomembranelor, relaia plant-ap i diferite alte procese ale plantelor (Calera i colab., 1995; Einhellig, 1995, 1999; Blum i colab., 1999; Reigosa, i colab., 1999; Macias i colab., 1999). Alte aspecte importante ale alelopatiei, n afar de producerea i eliberarea n mediu, a unor compui fitotoxici pentru unele specii vegetale, vizeaz absorbia i translocaia substanelor alelochimice n organismul receptor (Ferreira i Aquila, 2000). Fenomenul alelopatiei a existat de mii de ani, dar cercetare tiinific intensiv, de recunoatere i nelegere a alelopatiei, se face doar de cteva decenii. Ideea influenei exercitate de ctre unele substane chimice eliberate n mediu de ctre anumite organisme, asupra altor organisme vecine, a fost emis n 6

anul 1832 de ctre De Condolle (Harborne, 1977). De Condolle a ajuns la concluzia c, toate plantele secret prin rdcini anumite substane care pot s stimuleze sau s inhibe creterea altor plante. Un pas nainte a fost fcut, n anul 1937, de ctre Molisch, atunci cnd acesta i-a publicat cercetrile referitoare la aciunea etilenei asupra unor plante superioare, fenomen pe care l-a numit Allelopathie. El este cel care a definit, pentru prima dat, termenul de alelopatie (Molisch, 1937). Prin alelopatie se nelegea, n acea perioad, interaciunile biochimice stabilite ntre toate tipurile de plante incluzndu-se n aceeai noiune att interaciunile duntoare, ct i cele stimulatoare. Termenul allelopatie deriv de la cuvintele greceti allelon = reciproc i pathos= suferin. El s-a nrdcinat n literatura de specialitate, devenind una din ramurile moderne ale biologiei ecofiziologice. Un real progres n alelopatie s-a produs n anul 1974 cu publicarea crii Allelopathy de ctre Rice. Rice (1974) a definit alelopatia drept efectul duntor exercitat de o plant asupra altei plante, prin producerea unor compui chimici care sunt eliberai i difuzai n mediul nconjurtor. Progresele fcute n chimie, n anatomia i fiziologia plantelor, n biotehnologie i n tehnologie digital, ca i o mai bun nelegere a proceselor ecologice, a contribuit la dezvoltarea cercetrii alelopatice, n ultima perioad Cercettorii contemporani au tins s lrgeasc contextul alelopatiei i s includ n acest fenomen i interaciunile dintre plante i animale (Rizvi i Rizvi, 1992), i au sugerat c alelopatia ar fi o parte a unei ntregi reele de comunicri chimice ntre plante, ntre plante i alte organisme i c o astfel de comunicare poate contribui la aprarea plantelor. Definiia de comun acceptat a alelopatiei este producerea de biomolecule de ctre o plant, aceste molecule constnd mai ales din metabolii secundari care pot afecta o alt plant n mod benefic, sau invers (Rizvi i colab., 1992). Datele acumulate de-a lungul timpului au demonstrat c substanele alelopatice au att un caracter inhibitor, ct i un caracter stimulator. Substanele alelopatice cu caracter inhibitor au o larg rspndire n natur; au fost puse n eviden la plantele din deert, la cele din regiuni umede i la plantele din ecosisteme forestiere din regiunile temperate. Substane alelopatice cu rol stimulator, ndelung studiate, sunt vitaminele. Interaciunile biochimice dintre plante pot avea numeroase aplicaii practice n agricultur. Anumii compui alelochimici s-au dovedit a fi eficace ca erbicide i ca insecticide naturale. Astfel, piretrinele extrase din specii de Chrysanthemum, precum i cineolul, derivat din cinmetilin, extras din plantele de deert, se constitue n modele utilizate pentru elaborarea de noi pesticide. Prin modificarea acestor substane alelochimice, produsul final poate fi mult mai activ, mai selectiv, sau mai persistent dect n plantele care le conin. n urma analizrii alelocompuilor poteniali utilizai ca erbicide, Putnam (1988) a delimitat 6 clase de alelocompui, izolai de la 30 de familii de plante acvatice i terestre. Aceste clase privesc alcaloizi, derivai ai acidului cinamic, compui cianogenici, flavonoizi i etilen. 7

Alelocompuii sunt utilizai pentru obinerea erbicidelor sintetice. Exist mii de fitotoxine naturale, dar puine sunt comercializate ca erbicide pentru c sunt extrem de costisitoarte pentru a fi sintetizate la scar industrial. (Duke i Lydon, 1987); multe fitotoxine naturale au structuri chimice complexe care sunt dificil sau imposibil de sintetizat. CERCETRI PROPRII Obiectul prezentei teze de doctorat const n analizarea efectului alelopatic al extractelor apoase preparate din pri de plante de nuc negru (Juglans nigra L.), pelin alb (Artemisia absinthium L.), hrean (Armoracia rusticana L.) i de ridichi (Raphanus sativus L.) asupra germinaiei materialului semincer, creterii plantulelor, acumularea de biomas vegetal proaspt i uscat i asupra activitii peroxidazice la urmtoarele plante: mazre (Pisum sativum L.), trifoi rou (Trifolium pratense L.), ridichi de lun (Raphanus sativus L. var. sativus), mutar alb (Sinapis alba L.), salat (Lactuca sativa L.), castravei (Cucumis sativus L.), gru (Triticum aestivum L.), zzanie (Lolium perene L.) i obsig (Bromus inermis L.). MATERIAL I METOD Materialul biologic cu care s-a lucrat n experimentele de alelopatie a constat din pri subterane i aeriene proaspete, recoltate n diferite stadii de dezvoltare, de la un numr de patru specii vegetale: nuc negru (Juglans nigra L.), pelin alb (Artemisia absinthium L.), hrean (Armoracia rusticana L.) i ridichi (Raphanus sativus L.). Efectul alelopatic al extractelor apoase preparate a fost studiat asupra germinaiei materialului semincer i creterii plantulelor unor specii de plante, dicotiledonate considerate receptoare ale substanelor fitotoxice prezente n extracte i anume: mazre (Pisum sativum L., soiul Profi), trifoi rou (Trifolium pratense L., soiul Flora), ridichi de lun (Raphanus sativus L. var. sativus, soiul Rotunde timpuriu), mutar alb (Sinapis alba L., populaie local), salat (Lactuca sativa L. var. capitata, soiul Silvia), castravei (Cucumis sativus L., soiul Lord) i a monocotiledonatelor: gru (Triticum aestivum L., soiul Ardealul), zzanie (Lolium perene L., soiul Mara) i obsig (Bromus inermis L., soiul Doina), caz n care germinaia se refer la embrionul fructului de tip cariops. Prepararea extractelor apoase s-a efectuat diferit, n funcie de materialul biologic utilizat. Din frunze i din flori de nuc negru i pelin alb s-au preparat extracte apoase n modul urmtor: - 250g de frunze i de flori au fost fragmentate n buci mici, de aproximativ 0,50cm. i au fost amestecate cu 500 ml ap distilat timp de 30 de minute; materialul vegetal astfel obinut a fost lsat n repaus, la macerat, timp de 12 ore la temperatura camerei, respectiv 22o 2oC, dup care supernatantul a fost decantat, iar extractul a fost filtrat prin hrtie de filtru i pstrat, pn la ntrebuinare, la ntuneric, la temperatura de 4C. 8

Extractele apoase din rdcini i din fructe au fost preparate din speciile de nuc negru, pelin alb, hrean i de ridichi ntr-un mod similar celui descris anterior: - 250g de rdcini i de fructe au fost rase printr-o rztoare din material plastic, iar materialul vegetal astfel obinut a fost acoperit cu 500 ml de ap distilat; amestecul s-a lsat la macerat timp de 12 ore, dup care supernatantul a fost decantat, iar extractul a fost filtrat prin hrtie de filtru i pstrat astfel pn la ntrebuinare, la ntuneric, la temperatura de 4o C. n cazul acestor extracte apoase, soluia obinut a fost considerat ca un extract apos de referin, concentraia obinut evalund-o ca 100%. n momentul utilizrii extractelor, pornind de la soluia mam considerat 100%, s-au fcut diluii cu ap distilat, obinnd-se urmtoarele concentraiile finale: 5%, 15%, 25%, 50% i 75%. Astfel, n afara lotului martor (V0) au fost constituite 6 variante experimentale, dup cum urmeaz: V0 lot martor, material semincer pus la germinat pe substrat umectat cu ap; V1 material semincer pus la germinat pe substrat umectat cu extract 5%; V2 material semincer pus la germinat pe substrat umectat cu extract 15%; V3 material semincer pus la germinat pe substrat umectat cu extract 25%; V4 material semincer pus la germinat pe substrat umectat cu extract 50%; V5 material semincer pus la germinat pe substrat umectat cu extract 75%; V6 material semincer pus la germinat pe substrat umectat cu extract 100%; Pentru evaluarea efectului alelopatic al extractelor apoase preparate din pri subterane i aeriene proaspete de nuc negru, pelin alb, hrean i de ridichi s-au efectuat urmtoarele analize, n raport cu loturile martor, reprezentate de material semincer pus la germinat pe substrat umectat cu ap distilat: - determinarea germinaiei materialului semincer - biometrizarea plantulelor i organelor acestora - determinarea greutii proaspete i uscate a biomasei vegetale - determinri biochimice privind activitatea peroxidazic n rdciniele embrionare Determinarea germinaiei materialului semincer s-a efectuat dup patru zile. Materialul semincer a fost pus la germinat pe hrtie de filtru umidificat cu extract (de diferite concentraii, n ceea ce privete componentele hidrosolubile din materialul biologic utilizat); la lotul martor germinaia s-a desfurat pe hrtie de filtru umidificat cu ap distilat. Hrtia de filtru a fost amplasat n casolete incolore din material plastic transparent, cu lungimea de 18,5cm, limea de 12cm i nlimea de 8cm, suficient pentru a permite creterea nestingherit a plantulelor n primele apte zile de germinaie. n experimente, la toate speciile, materialul semincer a fost aranjat, pe hrtia de filtru, n rnduri drepte, echidistante i s-a urmrit ca boabele s fie amplasate cu zona embrionar n contact direct cu substratul de germinaie. Casoletele au fost pstrate n laborator, la temperatura de 23o - 25o C, la lumin indirect, cu variaii diurne specifice. Umiditatea hrtiei de filtru a fost meninut prin adugarea zilnic - n fiecare germinator - a cte 3ml de lichid, 9

ocazie cu care se efectua i aerisirea germinatoarelor; umectarea iniial s-a fcut cu 20ml de lichid, regim de hidratare egal la toate variantele experimentale. La patru zile de la punerea la germinat a materialului semincer, germinaia a fost apreciat prin numrarea boabelor germinate, n cazul fiecrui tip de extract prezent n substratul de germinaie, respectiv cu care a fost umectat hrtia de filtru. Reaciile seminelor, respectiv a cariopselor (n cazul monocotiledonatelor), la prezena n substratul de germinaie a extractului apos au fost comparate cu rezultatele obinute la lotul martor, semine sau cariopse germinate pe ap distilat. Germinaia a fost raportat ca procent de germinaie la 100 de boabe puse la ncolit, din fiecare specie, n cadrul fiecrui experiment. Biometrizarea creterii n lungime a plantulelor i a organelor acestora s-a efectuat dup apte zile. Creterea plantulelor a fost urmrit n casolete, pe loturi a cte 100 de plantule/variant experimental. A fost determinat creterea n lungime a rdcinielor embrionare i a tulpinielor, respectiv a hipocotilelor (la mazre, trifoi rou, ridichi de lun, mutar alb, salat, castravei) i a coleoptilelor (la gru, zzanie, obsig), Msurtorile biometrice referitoare la creterea medie n lungime a plantulelor martor i a organelor vegetative ale acestora, au fost considerate ca valori de referin, de 100%, date la care au fost raportate procentual determinrile biometrice efectuate la loturile tratate cu extracte apoase preparate din pri subterane i aeriene proaspete de nuc negru, pelin alb, hrean i de ridichi. Determinarea greutii proaspete i uscate a biomasei vegetale a fost efectuat prin metoda gravimetric, la balana analitic. Efectele inhibitoare au fost apreciate procentual, prin raportare la varianta martor. Datele obinute n urma observaiilor i a msurtorilor din diferite etape experimentale au fost interpretate statistic prin analiza varianei, procedeu fundamentat de statisticianul englez Fisher (dup Sulescu, 1967). Semnificaia diferenelor individuale fa de martor a fost calculat prin metoda diferenelor limit, fiind reprezentat de valorile 0 semnificativ, 00 distinct semnificativ i 000 foarte semnificativ Determinarea activitii peroxidazice din rdcini a fost analizat prin metoda colorimetric, care se bazeaz pe reacia de oxidare a reactivului pfenilendiamin; intensitatea coloraiei violet care apare n urma oxidrii a fost apreciat spectofotometric, cu un filtru de 483nm (Lck, 1974, adaptat de ipo, 2006). Materialul vegetal mojarat a fost extras cu tampon fosfat, centrifugat, tratat cu ap oxigenat i soluie de p-fenilendiamin i analizat la un spectofotometru tip Spekol 11, cu un filtru de 483 nm; intensitatea coloraiei violet a fost determinat dup 30 secunde. Valorile fiecrei variante au fost raportate la varianta martor, iar semnificaia statistic a fost stabilit cu ajutorul testului t (Steinback, 1961). REZULTATE I DISCUII Aspecte privind actiunea alelopatic a extractului apos preparat din frunze de nuc negru (Juglans nigra L.) 10

Extractul apos de nuc negru se presupune c acioneaz prin efectul juglonei asupra germinaiei i creterii unor specii vegetale. Materialul vegetal utilizat a constat din frunze (fr peiol) proaspete de nuc negru, recoltate n sezonul de primvar i de toamn, n luna mai i respectiv septembrie, i din frunze senescente (czute), recoltate n sezonul de iarn, luna decembrie, din pdurile Ocolului Silvic Secuieni-Bihor. Extractul a fost preparat din limbul frunzelor. Efectele extractelor au fost examinate pe material semincer provenit de la nou specii vegetale, respectiv pe semine de mazre, trifoi rou, ridichi de lun, mutar alb, salat, castravei i pe cariopse de gru, zzanie i de obsig. Rezultatele obinute atest faptul c extractul apos, de diferite concentraii, preparat din frunze de nuc negru a fost inhibitor asupra germinaiei materialului semincer, creterii plantulelor i acumulrii de biomas vegetal la toate speciile luate n studiu. Efectele alelopatice ale extractului de frunze de nuc negru au diferit n funcie de stadiul de dezvoltare a frunzelor i de concentraia extractului utilizat, fenomenul analizat i specia supus experimentelor. Astfel, cea mai mare influen alelopatic negativ s-a manifestat n cazul utilizrii frunzelor tinere de primvar. Reacia negativ cea mai puternic, la cele trei tipuri de extracte, a manifestat-o salata, la care s-a nregistrat o inhibiie maxim, dovedit - prin analiza varianei - ca fiind foarte semnificativ din punct de vedere statistic, la cele ase variante experimentale. Cele mai rezistente specii la aciunea extractului au fost mazrea, castraveii i grul. Activitatea peroxidazic n rdciniele embrionare a fost intensificat sub aciunea extractului apos preparat din frunzele tinere de nuc negru la toate speciile analizate, cea mai intens activitate fiind nregistrat la ridichile de lun. Intensificarea activitii peroxidazice n rdciniele de mazre, trifoi rou, ridichi de lun, mutar alb, salat, castravei, gru, zzanie i de obsig pare s fie parte a unui mecanism de aprare al plantelor mpotriva stresului indus de substanele alelochimice prezente n extractul de frunze de nuc negru. Aspecte privind aciunea alelopatic a extractului apos preparat din fructe de nuc negru (Juglans nigra L.) Materialul vegetal utilizat a constat din fructe crude de nuc negru, recoltate n sezonul de primvar, (n luna mai), din fructe coapte, recoltate n sezonul de toamn (n luna septembrie), i din fructe czute, recoltate n sezonul de iarn, (n luna decembrie), din pdurile Ocolului Silvic Secueni-Bihor. Extractul apos a fost preparat din epicarp i mezocarp. Rezultatele obinute demonstreaz c extractul apos preparat din fructele de nuc negru a avut efecte diferite asupra germinaiei materialului semincer, creterii plantulelor i asupra acumulrii de biomas vegetal la mazre, trifoi rou, ridichi de lun, mutar 11

alb, salat, castravei, gru, zzanie i la obsig n funcie de starea fiziologic a fructelor, de concentraia extractului utilizat i de specia supus experimentelor. Aciunea alelopatic negativ s-a manifestat mai puternic n situaia utilizrii extractului apos obinut din fructe crude, recoltate n sezonul de primvar, ceea ce sugereaz faptul c, n coaja fructelor crude compusul alelopatic (juglona) se gsete n concentraie mai mare. Cel mai adesea, la concentraii mici, de 5% i 15% a extractului de fructe de nuc negru s-au observat efecte stimulatoare asupra germinaiei materialului semincer, a creterii plantulelor i a acumulrii de biomas vegetal proaspt i uscat. La concentraii ridicate de 25%, 50%, 75% i 100%, efectele nregistrate asupra proceselor fiziologice studiate au fost inhibitoare, concretizate prin diferene negative semnificative, distinct semnificative i foarte semnificative ale valorilor proceselor respective fa de martor. Cele mai afectate au fost speciile de salat i de trifoi rou la care s-a nregistrat o inhibiie foarte semnificativ la toate cele patru concentraii anterior amintite. Mai rezistente la aciunea extractului s-au dovedit a fi plantulele de mazre, castravei i de gru. n general, monocotiledonatele par a fi mai sensibile la aciunea inhibitoare a extractului preparat din fructe de nuc negru, comparativ cu dicotiledonatele. Activitatea peroxidazic n rdciniele de trifoi rou, mutar alb, salat, gru, zzanie i de obsig, plantule crescute timp de apte zile pe substrat umectat cu extract apos de fructe tinere de nuc negru, a fost stimulat la concentraii mici (5-25%) ale extractului; la mazre, ridichi de lun i de castravei, s-a constatat o stimulare la concentraii de 5-50%, n timp ce la concentraii ridicate, de 75% i de 100% activitatea acestor enzime a fost diminuat. Aspecte privind aciunea alelopatic a extractului apos preparat din pri de plant de pelin alb (Artemisia absinthium L.), respectiv din rdcin, frunze sau flori Molecula presupus a fi la originea proprietilor alelopatice ale pelinului este artemisina, n cercetrile efectuate am utilizat acelai design experimental descris n capitolul 2.2. Materialul vegetal a fost reprezentat din diferite pri de plant (n stadiul de maturitate) de pelin alb - rdcin, frunze (lipsite de peiol) i flori - culese, n perioada de var, de pe terenurile deluroase din zona Beiu Bihor. Influena extractului apos obinut din pri de plant de pelin alb a fost urmrit pe ase specii de dicotiledonate, cum sunt: mazre, trifoi rou, ridichi de lun, mutar alb, salat, castravei i pe trei specii de monocotiledonate: gru, zzanie i obsig.

12

Rezultatele obinute privind germinaia materialului semincer, creterea plantulelor i acumularea de biomas vegetal demonstreaz prezena unor reale efecte alelopatice ale pelinului. Potenialul alelopatic al extractelor de pri de plant de pelin alb difer n funcie de tipul de extract utilizat, de concentraia acestuia i de specia vegetal supus experimentelor. Cele mai puternice efecte inhibitoare au fost nregistrate n cazul extractelor apoase preparate din flori i din frunze de pelin alb. Urmrindu-se efectul acestor extracte apoase preparate din pri de plant de pelin alb s-a constatat c, la toate speciile cu care am experimentat valorile procesele fiziologice studiate au fost cu att mai reduse, cu ct a crescut concentraia extractului utilizat, inhibiia cea mai accentuat manifestndu-se la concentraia de 75% i de 100% a extractului. Cu excepia plantulelor de castravei, la care stimularea cea mai accentuat a activitii peroxidazice a fost constatat la concentraia de 50% a extractului de pelin, la toate celelalte specii luate n studiu activitatea peroxidazic a fost intensficat la concentraii mici ale extractului, valoarea maxim fiind nregistrat la concentraia de 25% extract, urmat de o scdere accentuat a activitii acestei enzime. Concentraiile ridicate, de 75-100% ale extractului de pelin au condus la inhibarea n raport cu martorul a activitii enzimatice n rdciniele de mazre, castravei i de gru. Dintr-o analiz comparativ, de ansamblu, a efectelor extractelor apoase obinute din pri de plant de pelin alb, a rezultat faptul c, exist o influen alelopatic mai puternic exercitat de toate cele trei tipuri de extract asupra germinaiei cariopselor i a creterii plantulelor de monocotiledonate, comparativ cu germinaia seminelor i creterea plantulelor de dicotiledonate utilizate n experimente. Aspecte privind aciunea alelopatic a extractului apos preparat din rdcinile metamorfozate de hrean (Armoracia rusticana L.) Potenialul alelopatic al speciilor de Brasicacee este atribuit eliberrii n mediul nconjurtor a izotiocianatului de alil, compus volatil (Choesin, Boerner, 1991), un derivat al sinigrinei. Materialul vegetal din care am extras un preparat cu poteniale efecte alelopatice a fost reprezentat de fragmente proaspete de rdcin de hrean, recoltate din grdina de legume, n diferite perioade de vegetaie, respectiv la nceput de primvar (n luna martie), nainte de apariia primelor frunze, apoi vara (n luna iunie), n perioada de nflorire a plantei i toamna trziu (n luna noiembrie), dup cderea frunzelor, moment n care n rdcini erau acumulate deja substanele de rezerv destinate supravieuirii acestora pe timpul iernii. Cercetrile ntreprinse, referitoare la studierea aciunii alelopatice a hreanului, au permis evidenierea faptului c, n rdcina de hrean exist substane fiziologic active care inhib germinaia materialului semincer, creterea plantulelor 13

i acumularea de biomas vegetal la mazre, trifoi rou, ridichi de lun, mutar alb, salat, castravei, gru, zzanie i la obsig. Rezultatele experimentale relev diferenele dintre extractele apoase preparate din rdcina tuberizat de hrean recoltat n perioade diferite de vegetaie; s-au observat influene intens negative date de extractul preparat din rdcina recoltat n perioada de nflorire a plantelor de hrean, fenomen manifestat chiar i la concentraia minim testat, de 5%. Concentraiile superioare de 75% i de 100% ale extractului apos preparat din rdcin de hrean recoltat n perioada de antez a plantelor au fost total inhibitoare pentru toate speciile vegetale luate n studiu. Efectul fitotoxic al extractelor apoase preparate din rdcini de hrean recoltate nainte de apariia primelor frunze i dup cderea masei foliare a fost mai puin pronunat i s-a manifestat n mod evident abia la concentraiile medii, de 25%, 50%, 75% i la cea maxim (100%). Activitatea peroxidazic n rdciniele de trifoi rou, mutar alb, salat, gru, zzanie i de obsig a fost stimulat la concentraii de 5% i de 15%, urmat de o scdere brusc a activitii acestei enzime. La concentraia de 25% a extractului, activitatea enzimatic la mutar alb, gru, i la zzanie n raport cu parametrul similar determinat la probele preparate din rdciniele plantulelor martor, a fost inhibat, n timp ce la trifoi rou, salat i la obsig a rmas uor crescut. La mazre, ridichi de lun i la castravei, doar la concentraia de 50% a extractului apos de hrean s-a produs o diminuare a activitii acestei enzime. Aspecte privind aciunea alelopatic a extractului apos preparat din rdcinile tuberizate de ridichi (Raphanus sativus L.) Aciunea alelopatic produs de ridiche este determinat, ca i n cazul hreanului, de izotiocianatul de alil (sulfura de alil), compus volatil (Choesin; Boerner, 1991), un derivat al sinigrinei. Materialul vegetal utilizat a fost reprezentat de rdcini tuberizate de ridiche de lun, de var i de iarn, aflate n faza vegetativ al primului an de via, recoltate din grdina de legume. Rezultatele cercetrilor privind aciunea extractelor apoase preparate din rdcin tuberizat de ridiche de lun, de var i de iarn asupra proceselor fiziologice studiate la mazre, trifoi rou, ridichi de lun, mutar alb, salat, castravei, gru, zzanie i la obsig au demonstrat faptul c, extractele utilizate au afectat parametrii urmrii. Speciile dicotiledonate par a fi mai sensibile la aciunea extractelor apoase preparate din rdcinile tuberizate de ridichi, comparativ cu speciile monocotiledonate. n experimentele practicate a existat o deosebire evident ntre efectele extractelor celor trei varieti de ridiche, efectul inhibitor cel mai puternic evideniindu-se n situaia utilizrii extractului de ridiche de iarn. 14

Potrivit rezultatelor obinute, n general, extractele de ridiche de lun i de var, n concentraii de 5%, i 15% nu au avut nici o semnificaie din punct de vedere statistic asupra germinaiei materialului semincer analizat, procentul de germinaie, att a seminelor de dicotiledonate, ct i a cariopselor de monocotiledonate a fost sensibil apropiat de cel al lotului martor. Creterea plantulelor generate din embrionii germinai pe substrat umectat cu extracte de ridiche de lun i de var n concentraii de 5% i 15% a fost uor stimulat. Comparativ cu extractele de ridiche de lun i de ridiche de var, extractul apos preparat din rdcina de ridiche de iarn, n concentraie de 5% i de 15% a condus la o scdere a valorilor puterii de germinaie i ale procesului de cretere al rdciniei i al tulpiniei, respectiv al ntregii plantule. Toate cele trei tipuri de extracte de ridichi, n concentraii ridicate de 25%, 50%, 75%, i 100% au inhibat de la semnificativ la foarte semnificativ parametrii fiziologici urmrii. La concentraii reduse, de 5 i 15%, extractul de ridiche de lun i de var a stimulat uor acumularea de substan proaspt i uscat per ntreaga plantul. Procesul acumulrii de biomas vegetal a fost inhibat o dat cu creterea concentraiei extractelor utilizate n experimente, efectul inhibitor fiind mai puternic la concentraia maxim testat, de 100%. Diferenele dintre martor i variantele experimentale se accentueaz n cazul utilizrii extractului de ridiche de iarn. Inhibarea germinaiei i alungirii plantulelor a fost mai pronunat la castravei, urmat ndeaproape, ca rezultate, de salat, trifoiul rou, zzanie i de obsig. Activitatea peroxidazic n rdciniele de trifoi rou, mutar alb, salat, castravei, zzanie i de obsig, a fost semnificativ stimulat la concentraii mici ale extractului, de 5-25%, pe ct vreme n rdciniele de mazre, ridichi de lun i de gru activitatea acestor enzime a nregistrat creteri semnificative la concentraii de 5-50% a extractului de rdcin de ridiche de iarn. Concentaia de 75% a extractului de ridiche de iarn a condus la inhibarea activitii enzimatice n rdciniele de trifoi rou i de mutar alb, ns nesemnificative raportat la martor, n timp ce n rdciniele de mazre, castravei i de gru au fost surprinse inhibiii nesemnificative la concentraia de 100% extract de ridiche. CONCLUZII GENERALE 1. Dup apte zile de germinaie, extractele apoase proaspete, preparate din pri de plante de nuc negru, de pelin alb, de hrean i de ridiche au exercitat influene alelopatice foarte vizibile asupra celor nou specii de plante luate n studiu (dintre dicotiledonate: mazre, trifoi rou, ridichi de lun, mutar alb, salat, castravei, iar dintre monocotiledonate: gru, zzanie i obsig nearistat). n general, efectul exercitat de extractele preparate din biomasa foliar, radicular, a florilor, dup caz, sau epicarp i mezocarp a fost de inhibare a 15

germinaiei materialului semincer utilizat ca bioteste vegetale, precum i a creterii plantulelor, influennd negativ acumularea de biomas vegetal proaspt i uscat. Aciunea alelopatic, inhibitoare, exercitat de extractele testate, asupra proceselor fiziologice studiate, s-a manifestat diferit n funcie de apartanena speciilor la clasa dicotiledonate sau monocotiledonate, cu efecte mai intense la monocotiledonate, n cazul extractelor apoase de nuc negru, de pelin alb sau de hrean. Comparativ cu monocotiledonatele, dicotiledonatele s-au dovedit a fi mai sensibile numai la aciunea extractelor preparate din rdcina tuberizat de ridiche. 2. Valorile parametrilor experimentali, evaluai n cadrul diferitelor experimente efectuate i a proceselor fiziologice urmrite, au depins de concentraia extractului utilizat, de perioada de vegetaie a plantelor din care s-au pregtit extractele, respectiv de sezonul n care a fost recoltat materialul vegetativ folosit ca obiect de studiu, dar i de reacia speciei vegetale receptoare a substanelor alelopatice coninute n extractele preparate i de fenomenul analizat. 3. n general, n raport cu martorul, concentraiile mici ale extractelor - de 5% i de 15% - au exercitat efecte stimulatoare asupra germinaiei materialului semincer i a creterii n lungime a plantulelor, rezultatele obinute nregistrnd diferene pozitive, nesemnificative, ale valorilor parametrilor biometrizai. La concentraii mijlocii i mari, de 25, 50, 75 i de 100%, efectele nregistrate fa de martor - cel mai adesea, au determinat o descretere a valorilor respectivilor parametri, inhibiiile evideniate la salat, trifoi rou, ridichi de lun, mutar alb, zzanie, i la obsig, fiind foarte semnificative din punct de vedere statistic. 4. Dinamica acumulrii de biomas vegetal, n linii mari, a urmat o aceeai tendin, ca i n cazul urmririi creterii plantulelor, evideniindu-se, totodat, existena unei corelaie ntre concentraia extractelor utilizate i cantitatea de substan proaspt i uscat acumulat n plantulele biometrizate. Pe msur ce s-a mrit cantitatea de compui alelochimici coninui n extracte, creterea n lungime a plantulelor a fost inhibat, sinteza de biomas vegetal scznd. 5. Activitatea peroxidazic determinat n rdciniele plantulelor supuse testrilor, dup apte zile de germinaie pe substrat umectat cu extracte apoase preparate din frunze tinere i din fructe crude de nuc negru, ori din flori de pelin alb, sau din rdcin metamorfozat de hrean (recoltat n perioada de nflorire a plantei), sau din rdcin tuberizat de ridiche de iarn, a fost strns corelat cu creterea sau scderea diluiei compusului alelopatic coninut n extracte. n general, activitatea peroxidazic n rdciniele de trifoi rou, mutar alb, salat, zzanie i de obsig a fost intensificat la concentraii mici (5%-25%) ale tuturor extractelor. La mazre, ridichi de lun, castravei i la gru s-a constatat o intensificare a activitii enzimei peroxidaz la concentraii de 5%-50%. Concentraiile superioare ale extractelor, de 75% i de 100%, au condus la diminuarea activitii peroxidazice, la toate speciile luate n studiu. 6. n privina intensitii efectului inhibitor exercitat de extractele utilizate n experimente, asupra proceselor fiziologice luate n studiu, respectiv asupra germinaiei materialului semincer, a creterii plantulelor, i a acumulrii de biomas vegetal, s-au observat influene intens negative exercitate de extractul 16

preparat din rdcina metamorfozat de hrean recoltat n perioada de antez, fenomen manifestat chiar i la concentraia minim testat, de 5%. Extractele apoase preparate din frunze tinere i fructe crude de nuc negru, recoltate n sezonul de primvar, au exercitat o influen puternic negativ asupra germinaiei i creterii n lungime a plantulelor supuse experimentelor, comparativ cu extractele obinute din frunzele i fructele mature, precum i din frunzele i fructele czute pe sol, recoltate n sezoanele de toamn i de iarn, dar mai puin negativ n raport cu extractul preparat din rdcina metamorfozat de hrean, recoltat n perioada de antez. Se poate afirma c, efectul fitotoxic al extractului apos preparat din flori i din frunze de pelin alb, n ceea ce privete germinaia i creterea plantulelor speciilor utilizate ca modele experimentale, a fost mai pronunat fa de cel exercitat de extractul preparat din rdcin de pelin alb, dar n raport cu extractele preparate din rdcina metamorfozat de hrean, recoltat n perioada de antez i din frunze tinere i fructe crude de nuc negru, a fost mai puin pronunat. Extractul de ridiche de iarn a prezentat o putere alelopatic mai mare dect aceea a extractului apos preparat din rdcina tuberizat de ridiche de lun i de var, dar mult mai redus comparativ cu celelalte tipuri de extracte utilizate n experimente. 7. Pe de alt parte, comparnd reacia plantulelor, respectiv germinaia materialului semincer, creterea i greutatea plantulelor rezultate din embrionii acestora, sub influena extractelor apoase preparate din pri de plante de nuc negru, de pelin alb, hrean i de ridichi, s-a manifestat diferit. Reacia negativ cea mai puternic, la cele cinci tipuri de extracte apoase supuse testrilor, a fost evideniat la plantulele de trifoi rou, salat i zzanie, n timp ce mazrea, castraveii i grul au prezentat o rezisten mai mare la aciunea acestora. 8. n general, la concentraiile de 50%, 75%, i de 100% ale extractelor utilizate n experimente, s-au manifestat evidente simptome alelopatice negative, produse la nivelul plantulelor celor nou specii vegetale supuse testrilor, care au constat n necrozarea zonei de vrf a rdcinielor (cca 3-5mm), i n descreterea numrului de rdcinie secundare formate la nivelul rdcinielor embrionare, preponderent de mazre, ridichi de lun, castravei i de gru; totodat, la trifoiul rou, ridichile de lun, la castravei, zzanie i la obsiga nearistat s-a semnalat prezena unui fenomen particular de torsionare a tulpinielor plantulelor. O alt reacie alelopatic particular, negativ, a fost aceea observat la ridichile de lun, la mutarul alb, la salat, zzanie i la obsig nearistat, ce a constat n clorozarea plantulelor, i manifestarea unui geotropism negativ la nivelul rdcinielor embrionare de mazre, mutar alb i de castravei. De menionat este i faptul c, n general, la toate speciile luate n studiu s-a nregistrat o scdere n greutate uscat a plantulelor. 9. Cunoaterea fenomenelor alelopatice prezint importan practic, mai ales n cazul plantelor de interes economic, la care se pune problema, n cultur, a succesiunii altor specii, pe un acelai teren, compuii alelopatici, respectiv rezidurile vegetale rmase n sol din cultura precedent, exercitnd efecte 17

inhibitoare asupra creterii i dezvoltrii altor specii de plante, n acele zone nregistrndu-se o mai sczut productivitate agricol. De aceea, pentru alternarea culturilor i formarea asolamentelor, factorul alelopatic trebuie luat n considerare, cel puin tot att de atent ca i oricare alt factor de mediu. Alelopatia ofer perspective promitoare pentru gestionarea florei spontane din parcelele cultivate prin instalarea de covoare vegetale alelopatice i de culturi intercalare, prin dezvoltarea unor varieti cultivate capabile s limiteze creterea i dezvoltarea buruienilor. Pe de alt parte, nelegerea i controlarea unor astfel de fenomene creaz, n viitor, posibilitatea folosirii unor alelocompui fie ca regulatori de cretere, fie ca pesticide naturale. BIBLIOGRAFIE SELECTIV 1. 2. 3. 4. Austin, M.P., 1990, Community theory and competition in vegetation. n: Perspectives in Plant Competition. Ed. Grace, J.B., Tilman, D., Academic Press, San Diego, p. 215-238. Bode, H. R., 1940 ber die Blattausscheidungen des Wermuts unde ihre Wirkung auf ander Pflanzen. n Planta 30, p. 567-589. Bohm, P.A.F., Zanardo, F.M.L., Ferrarese, M.L.L., Ferrarese- Filho, O., 2006, Peroxidase activity and lignification in soybean root growth-inhibition by juglone. Biologia Plantarum, p. 315-317. Duke, S.O., Scheffler, B.E., Dayan, F.E., 2002, Allelochemicals as Herbicides, In: Allelopathy, From Molecules to Ecosystems. Ed. Regiosa, M., Pedrol, N., Departamento de Bioloxia Vexetal e Ciencia do Solo, Universidade de Vigo, Vigo, Spain, p. 183-195. Einhellig, F.A., 2002, The Physiology of Allelochemical Action: Clues and Views, In: Allelopathy, From Molecules to Ecosystems. Ed. Reigosa, M., Pedrol, N., Departamento de Bioloxia Vexetal e Ciencia do Solo, Universidade de Vigo, Vigo, Spain, p. 1-17. Gaspar, Th., Penel, Cl., Tran Thanh Van, M., Greppin, H., 1979, Des isoperoxydases comme marqueurs de la diffrenciation cellulaire chez les vgtaux, Edit. Xme Rencontre De Meribel, p. 175-196. Grace, J.B., Tillman, D., 1990, Perspectives on Plant Competition. Academic Press, San Diego. p. 51-65. Lipinska, H., 2005, Allelopathic effects of grasses and biodiversity of plant communities. In: Grassland Science in Europe, Vol 10, p. 380-383. Molisch, H., 1937, Der Einfluss einer Pflanze auf die andere Allelopathie, n: Introducion to Ecological Biochemistry. Ed. Harborne, J.B., 9, Acad. Press, London New York San Francisco, 1977, p. 178-179. Neamu, G., 1983, Interaciuni biochimice ntre plantele superioare. n: Biochimie ecologic. Edit. Dacia, Cluj-Napoca, p. 146-160. 18

5.

6. 7. 8. 9. 10.

11. 12. 13. 14.

Putnam, A.R., Duke, W.B., 1978, Allelopathy in Agroecosystems. Ann. Rev. Phytopath., 16, p. 413-451. Rice, E.L., 1984, Allelopathy 2nd. Edit. Academic Press, New York, p. 421. Smith, A. E., Martin L. D., 1994, Allelopathic characteristics of three coolseason grass species in the forage ecosystem. Agronomy Journal, 86, p. 243246. Waller, G.R., Feng, M., Fujii, Y., 1999, Biochemical analysis of allelopathic compounds: Plants, microorganism, and soil secondary metabolites. In: Principles and practices in plant ecology: Allelochemical interactions. Ed. Inderjit, Dakshini, K.M.M., Foy, C.L., CRC Press. Boca Raton, Florida, p. 75-98.

19