12.11.

2010
1
BIOLOGIA VIRUSURILOR.
DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL VIROZELOR.
Particularitile virusurilor
1. Reprezint structuri acelulare cu potenial
infecios
2. Dimensiuni de rangul nm (20-400 nm)
3. Genomul viral este constituit dintr-un singur tip de
AN (ADN sau ARN)
4. Sunt lipsite de metabolism propriu, fiind parazii
obligai intracelulari
5. Nu cresc i nu se divid, se reproduc n celule vii
6. Nu pot fi cultivate pe medii artificiale
7. Rezisten natural la antibiotice


CLASIFICAREA VIRUSURILOR
Dup tipul AN (cu genom ARN/ADN)
Dup dimensiuni (mici 20-50 nm, medii
50-150 nm, mari peste 150 nm)
Dup tipul de simetrie a capsidei
(helicoidal, cubic, mixt)
Dup compozitia chimic (simple,
complexe)
Dup gazd (om, animal, insect, bacterie)
Dup sensibilitatea n mediul extern,
substane chimice, etc
Ordin (-virales)
Familie (-viridae)
Subfamilie (-virinae)
Gen (-virus)
Specie (Virusul gripal,
poliomielitic, al hepatitei B,
etc)
12.11.2010
2
Virion unitate structural infecioas a
virusului
Viroid ARNm.c., circular, asociat cu boli
la plante
Prion protein termostabil infecioas,
cauzeaz la om boala Kuru, Creutzfeldt-
Jacob, sindromul Gerstmann-Straussler,
scrapie la oi


COMPOZIIA CHIMIC I STRUCTURA
VIRIONULUI
Virusurile simple acid nucleic (AN) i
nveli proteic capsida (ansamblu numit
nucleocapsid)
Virusurile complexe nucleocapsid i un
nveli extern, lipoglicoproteic
(supercapsid, peplos)
Acidul Nucleic ADN sau ARN, mono- sau
bicatenar, liniar, circular sau
fragmentat.
ARN monocatenar : ARN+ (caten cu sens,
funcie de ARNm) sau ARN- (caten
fr sens, este necesar prezena
enzimei polimeraza)
Funcia AN asigurarea replicrii AN i
expresia genomului pentru sinteza
proteinelor virale

Virusuri ADNd.c.: Hepadnaviridae,
Adenoviridae, Herpesviridae, Poxviridae
Virusuri ADNm.c.+: Parvoviridae
Virusuri ARNm.c.+: Picornaviridae,
Caliciviridae, Togaviridae, Flaviviridae,
Coronaviridae, Retroviridae
Virusuri ARNm.c.- : Rhabdoviridae,
Paramyxoviridae, Orthomyxoviridae,
Bunyaviridae, Arenaviridae, Filoviridae
Virusuri ARNd.c. : Reoviridae
12.11.2010
3
I: Double-stranded DNA (e.g. Adenoviruses,
Herpesviruses, Poxviruses)
II: Single-stranded (+) sense DNA (e.g.
Parvoviruses)
III: Double-stranded RNA (e.g. Reoviruses)
IV: Single-stranded (+) sense RNA (e.g.
Picornaviruses, Togaviruses)
V: Single-stranded (-) sense RNA (e.g.
Orthomyxoviruses, Rhabdoviruses)
VI: Single-stranded (+) sense RNA with DNA
intermediate in life-cycle (e.g. Retroviruses)
VII: Double-stranded DNA with RNA intermediate
(e.g. Hepadnaviruses)
Capsida format din uniti proteice, capsomere,
aranjate simetric.
1. Simetrie helicoidal capsomerele se fixeaz
pe catena de AN, form de bastona
2. Simetrie cubic (icosaedric) capsomerele se
aranjeaz n jurul AN, formnd un icosaedru
(poliedru regulat cu 20 fee triunghiulare i 12
vrfuri), eikos=20
3. Simetrie mixt (bacteriofagii, poxvirusurile)
Funcia capsidei protecia AN, rol antigenic,
adeziune
12.11.2010
4
Supercapsida structur glucido-lipido-proteic,
derivat din membrana celulei gazd. Lipidele
provin din membrana celular, iar glicoproteinele
sunt de origine viral (ex.: hemaglutinina,
neuraminidaza)
Funcie protecie, antigene de suprafa, adeziune
Unele virusuri conin enzime polimeraze,
transcriptaze, etc.
Aciunea factorilor fizici, chimici
Virusurile sunt foarte sensibile la cldur, desicare,
raze UV. Detergenii i solvenii inactiveaz
virusurile cu supercapsid.
Pot fi conservate prin liofilizare sau la -80 C
REPRODUCEREA VIRUSURILOR
I ADSORBIA virusului la celula-gazd prin intermediul
receptorilor specifici (tropism)
II PENETRAREA virusului n celul
a) Pinocitoz (viropexis)
b) Fuziunea membranelor
c) Translocare
d) Injectarea AN n citoplasm (bacteriofagii)
III DECAPSIDAREA ( cu enzime celulare). Din acest
moment urmeaz faza de eclips.
12.11.2010
5
IV BIOSINTEZA (sinteza proteinelor i replicarea AN)
Are loc n citoplasm (virusuri cu ARN) sau n nucleul
celulei (virusuri cu ADN)
Biosinteza virusurilor ADN
ADNdc transcrierea ARNm replicarea,
translaia (precoce, tardiv) sinteza proteic
Biosinteza virusurilor ARN
ARN+ replicare, translaie sinteza proteic
ARN- transcriere ARNm replicare, translaie
sinteza proteic
Retrovirusuri (ARN+) transcriere ADN- ADNdc
transcriere ARNm replicare, translaie,
sinteza pr. (sau integrare n cromosom)

12.11.2010
6
RNA VIRUSES THAT DO NOT HAVE A DNA PHASE
Genome
RNA-dependent
RNA polymerase
(=transcriptase)
in virion
Infectivity of
RNA
Initial event in
cell
RNA + No Infectious Translation
RNA - Yes Non-infectious Transcription
RNAd.c. Yes Non-infectious Transcription

RETROVIRUSES
Genome
RNA-dependent RNA
polymerase
(=transcriptase) in virion
Infectivity of
RNA
Initial event in cell
RNA + Yes
Non-
infectious
Reverse
transcription



V. MORFOGENEZA (asamblarea) i maturizarea
virionilor
Proteinele capsidale particip la formarea
nucleocapsidei (n nucleu sau citoplasm) iar
glicoproteinele sunt inserate n MCP, substituind
proteinele celulare. n aceast faz apar
incluziunile virale sau corpusculii elementari.
VI. ELIBERAREA virionilor (liza celulei, nmugurire,
exocitoz). Nr lor poate atinge 100.000 per/celul
Ciclul reproductiv viral are durata variabil de la
cteva ore pn la cteva zile (ex.: 8h poliovirus,
72h citomegalovirus).
Interferena viral fenomen n care, consecutiv
infeciei unei celule cu 2 virusuri, multiplicarea
unuia este inhibat (virus interferat / virus
interferent)
12.11.2010
7



12.11.2010
8
RELAII VIRUS-CELULA GAZD
Infecie viral productiv, citocid
Virusul este infecios iar celula permisiv (receptiv). La
nivelul ma/o corespunde infeciilor acute, aparente
sau inaparente (grip, rujeol ...)
Infecii virale persistente
Celulele infectate supravieuiesc, cu producerea
permanent sau intermitent a virusului.
1. Infecii abortive (cu virioni defectivi) infecia nu se
exprim, are loc transformarea celulelor prin proteine
virale. Ele devin int pentru efectorii imunitii
(macrofage, T-limfocite) n cursul unor infecii cronice
(ex.: Panencefalita Sclerozant Subacut (PESS) post-
rujeolic)
2. Infecii integrate (virusuri ADN sau copii de ADN ale
Retrovirusurilor). Consecine:
- Transformarea malign a celulei gazd
- Infecii lente - manifestarea infeciei dup o
perioad de incubaie ndelungat cu expresia
integral a genomului viral (ex.: HIV-SIDA)
- Infecii latente - reactivri ocazionale, repetate ale
infeciei cu exprimarea integral a informaiei
genetice virale (ex.: infecia herpetic)
- Infecii cronice perioade de remisie i acutizare,
virusul este prezent permanent, chiar n absena
simptomelor (ex.: hepatita viral B)
CULTIVAREA VIRUSURILOR
Virusurile sunt cultivate pentru:
- Stabilirea diagnosticului etiologic
- Testarea infeciozitii virusurilor
- Testarea preparatelor antivirale
- Producerea vaccinurilor
SISTEME DE CULTIVARE
1. Culturi de celule
2. Ou embrionat de gin
3. Animale de laborator

Animalele de laborator se utilizeaz limitat
(receptivitate selectiv, preexistena
infeciilor, cost avansat). Se recurge numai
cnd nu exist alte posibiliti (VHB, HIV,
Coxsackie, etc). Constituie modele de
cercetare sau de control al vaccinurilor.
Animale utilizate curent oriceii albi nou-
nscui, dar pot fi utilizai obolani, cobai,
maimue, etc.
Regulile de lucru cu animalele de laborator
(selectare, inoculare, examinare) sunt
identice cu cele din infeciile bacteriene.
Oul embrionat de gin (5-13 zile) reprezint un
mediu de celule nedifereniate, cu multiplicare
activ, steril i lipsit de mijloace de aprare
antiinfecioas. Se utilizeaz n prepararea unor
vaccinuri virale (ex.: gripal)
- Iniial se verific viabilitatea embrionului la ovoscop
n camera obscur.
- Prelevatul se inoculeaz steril cu seringa n
cavitatea amniotic sau alantoidean, sau pe
membrana chorioalantoidean (utiliznd metoda
deschis sau nchis).
- Orificiul se parafineaz i se incubeaz la 35-37 C
timp de 48-72 ore

12.11.2010
9
Culturile de celule (1949 - Enders, Weller, Robbins).
Celule provenite din esuturi adulte sau embrionare, normale sau
tumorale. Plasate ntr-un mediu adecvat (nutrieni, pH, t)
rmn viabile i se multiplic. Pentru cultivarea virusurilor se
utilizeaz culturile n monostrat celular.
Tipurile de culturi de celule (CC):
Culturi primare (primar tripsinizate). Sunt obinute din esuturi
adulte sau embrionare de origine animal sau uman. Suport
4-6 pasaje (subcultivri)
Culturi diploide. Obinute din esut embrionar (MRS5,
fibroblaste umane). Pot fi subcultivate 40-50 generaii
Linii continui de celule. Obinute din esut tumoral. Pot fi
subcultivate nelimitat.
HeLa carcinom de col uterin
KB tumoare a rinofaringelui
Hep-2 tumoare canceroas a laringelui

Obinera culturilor de celule primar tripsinizate:
- Prelevarea esutului (ex.: rinichi de maimu)
- Fragmentarea i splarea cu sol. fiziologic
- Dezagregarea tisular cu enzime proteolitice
(tripsina)
- Separarea celulelor prin centrifugare
- Dozarea suspensiei - 10
5
10
6
celule/ml
- ntroducerea celulelor n mediu nutritiv i repartizarea
n recipiente sterile
- Incubarea pn la formarea monostratului celular
(inhibiie de contact)
- Monostratul poate fi infectat cu virus sau servete
drept surs de celule pentru o nou cultivare (pasaj)

Mediile de cultur pentru culturi de celule (Eagle,
Hanks, 199, hidrolizat de lactalbumin, etc),
conin AA, Vit, factori de cretere, sruri
minerale, rou fenol pentru monitorizarea pH
(vireaz n galben n mediu acid). Varietati:

1. Mediile de cretere (pentru cultivarea CC) sunt
mbogite cu ser sangvin (uman, animal)
2. Mediile de ntreinere se utilizeaz pentru
meninerea monostratului n procesul
reproducerii virale. Nu conin ser.
CC reprezint sistemul virus-gazd predilect n
virologia clinic i cercetare.
Inocularea CC
- Se aleg tuburi cu monostrat bine format
- Se nltur mediul de cretere, se spal cu
sol. Hanks
- Se inoculeaz 0,1 0,2 ml de prelevat
- Peste 30-60 min n tuburi se toarn cte
1 ml mediu de ntreinere
- Se ntroduc n termostat la temperatura
adecvat 3 - 4 zile
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL VIROZELOR
Indicaii:
- Boli cu msuri terapeutice sau profilactice speciale
(SIDA, hepatite, rubeola, etc)
- Elucidarea etiologiei virale a unor izbucniri
epidemice (meningite, gastro-enterite, pneumonii,
etc)
- Supravegherea epidemiologic
Prelevate: LCR, snge, exsudate, secreii nazale, rino-
faringiene, mase fecale, urin, coninutul veziculelor
i ulceraiilor cutaneo-mucoase, bioptate, etc.

12.11.2010
10
Eficacitatea diagnosticului este condiionat
de:
1. Examinarea precoce (la debutul bolii)
2. Alegerea corect a prelevatelor, calitatea
lor
3. Transportarea rapid a probelor sau
utilizarea mediului de transport
4. Respectarea regulilor de autoprotecie i
de protecie a anturajului la recoltarea,
transportarea i examinarea probelor

METODELE DE DIAGNOSTIC AL VIROZELOR
METODE DIRECTE
- Examenul virusoscopic (evidenierea direct a
virionului sau a componentelor lui n prelevate)
- Examenul virusologic (izolarea i identificarea
virusului)
- Detectarea Ag virale n prelevat
- Identificarea genomului viral (hibridizarea AN,
amplificarea genic PCR)
METODE INDIRECTE
- Serodiagnosticul (creterea de cel puin 4 ori a titrului
Ac n dinamic)
EXAMENUL VIRUSOSCOPIC
1. Microscopia optic depistarea n prelevat a
incluziunilor virale specifice (corpusculii Guarnieri
n variol, Babe-Negri n rabie) sau nespecifice,
citoplasmatice sau nucleare. Se prepar frotiuri
sau frotiuri-amprente colorate Romanovschi-
Giemsa, cu hematoxilin-eozin sau cu
fluorocrom
2. Microscopia electronic
3. Imunoelectronomicroscopia mai sensibil, mai
specific. Se examineaz complexele imune
virus Ac
4. Imunofluorescena (direct i indirect)
utilizat n diagnosticul rapid al virozelor
12.11.2010
11
EXAMENUL VIRUSOLOGIC
Prelucrarea prealabil a prelevatelor:
- Omogenizarea (dup necesitate)
- nlturarea elementelor celulare, inclusiv
bacteriene (centrifugare, ultrafiltrare)
- Tratarea cu antibiotice pentru prevenirea
creterii bacteriilor i fungilor contaminani
(penicilin - 500 UA/ml, streptomicin
500 UA/ml, nistatin - 20 UA/ml)
ETAPELE DIAGNOSTICULUI VIRUSOLOGIC
1. Izolarea virusului
2. Evidenierea (indicarea) reproducerii virale
3. Identificarea virusului
Izolarea virusului se realizeaz prin inocularea cu
material de examinat a animalelor de
laborator, embrionilor de gin sau a
culturilor de celule. Alegerea sistemului de
cultivare se efectueaz n funcie de
particularitile biologice ale agentului
etiologic probabil i posibilitile
laboratorului.
Indicarea virusului
n culturi de celule
1. ECP (efect citopatic) modificri
degenerative i distrugere celular, rezultat
al multiplicrii virale (rotunjire sau retracie
celular, citoliz, apariia vacuolelor sau
granulelor n citoplasm, picnoza nucleului,
fuziunea membranelor, etc). ECP poate fi
studiat la microscopul optic pe celule
necolorate sau colorate cu hematoxilin-
eozin, Giemsa, fluorocrom.
2. Formarea plajelor
Reprezint focare de celule alterate n
monostratul celular acoperit cu agar.
Numrarea plajelor permite cuantificarea
virusului infectant.

3. Incluziuni virale
Reprezint acumulri paracristaline de
virioni sau de componente virale n locul
de replicare i asamblare a virusurilor
(citoplasm, nucleu). Coloraia Giemsa,
hem-eozin, fluorocrom.
Localizarea, forma i afinitatea tinctorial
(bazofile, acidofile) sunt particulariti
diagnostice pentru unele viroze.

12.11.2010
12
4. Hemaglutinarea (Reacia de HA)
Unele virusuri posed n componena capsidei, n
special a supercapsidei, glicoproteine care pot adera
la suprafaa hematiilor hemaglutinine (HA).
RHA este caracteristic pentru virusurile cu HA
acumulate n mediul de ntreinere. n acest caz
mediul de ntreinere aglutineaz eritrocitele unor
specii de mamifere sau psri.
5. Hemadsorbia (Reacia de HAd) RHAd este
caracteristic virusurilor cu HA care se afl
intracelular. n procesul asamblrii acestor virusuri,
HA lor se afl deja nserate n MCP a celulei-gazd la
nivelul viitorului mugure. Dac la aceast etap n
recipientul cu monostrat celular se adaug suspensie
de hematii i se menine 15-20 min la temperatura
caracteristic fiecrui virus, la microscop pot fi
urmrite hematiile fixate la suprafaa celulelor
infectate (RHAd).

12.11.2010
13
6. Proba culorii
- Metabolismul celular neafectat virajul culorii
mediului din rou n galben (pH acid)
- Metabolismul celular inhibat culoarea
mediului nu se modific

7. Interferena
Ex.: V.rubeolic nu produce ECP, dar determin
fenomenul de interferen. Pentru detectarea
V.rubeolei se infecteaz CC cu virus
citopatogen. Lipsa multiplicrii acestui virus
confirm prezena V.rubeolic

Indicarea virusului n oul embrionat de
gin
Oule se rcesc 18 ore la +4 grade C pentru
vazoconstricie maxim, apoi aseptic se
taie coaja, se recolteaz lichidul alantoic
sau amniotic, iar MCA i embrionul se
ntroduc n cutii Petri sterile. Se observ:
1. Moartea embrionului
2. Apariia modificrilor (hemoragii, pustule)
pe MCA
3. Acumularea de HA n lichide
Indicarea virusului pe animale de
laborator
1. Boala manifest a animalului, deces
2. Urmrirea virusului n organele-int:
- Hemaglutinare
- Infeciozitatea omogenatelor
- Examene histopatologice (leziuni
inflamatorii, degenerare, incluzii virale
specifice: corp. Babe-Negri n neuronii
infectai cu V.rabic, etc)
Identificarea virusurilor
Determinarea genului, speciei i serotipului de virus prin
stabilirea structurii antigenice.
Se efectueaz cu ajutorul serurilor imune specifice
antivirale n diferite reacii serologice:
- RN
- RLA
- RIHA/RIHAd
- RFC
- RIF
- RIE (ELISA)
- ARI, etc

DETECTAREA AG VIRALE N PRELEVATE
Avantaje: simplitatea i rapiditatea examenului,
nu necesit meninerea infeciozitii virusului
Dezavantaje: sensibilitate direct proporional cu
cantitatea virusului din prelevat
Se utilizeaz Ac policlonali de origine uman
(seruri imune) sau Ac monoclonali (de origine
murin)

Reacii: RHAI, RLA, RIF, RIE (ELISA), Western-blot,
ARI, etc.
12.11.2010
14
IDENTIFICAREA GENOMULUI VIRAL
(punerea n eviden a AN virali din
prelevate n cursul infeciilor virale acute
sau cronice i monitorizarea
tratamentului).
Pot fi examinate toate esuturile i lichidele
biologice
Hibridizarea acizilor nucleici fr
amplificare
Hibridizarea dup amplificare (PCR i
variantele ei)
DIAGNOSTICUL SEROLOGIC
Esena: depistarea Ac sintetizai de gazd n
rspuns la o infecie viral.
Dup o primo-infecie are loc inducerea
formrii Ac, iar dup o reinfecie sau
reactivare titrul Ac crete n dinamic.
n serodiagnosticul virozelor este obligator de a
examina 2 probe de ser de la bolnav (seruri-
perechi): prima prelevat la debutul bolii, a
doua prelevat peste 15 zile.
Ac sunt depistai n ser, uneori n LCR,
exsudate, lichid articular, etc.
Pentru depistarea Ac se utilizeaz Ag virale de
referin (suspensie viral inactivat,
proteine virale native sau recombinante,
oligopeptide sintetice).
Tehnici utilizate: RFC, RIHA, RHAI, RN, RIFI, ARI,
AIE (ELISA), etc.
Semnificaie diagnostic prezint trecerea
titrului de Ac de la 0 la pozitiv (seroconversie,
primo-infecie) sau creterea titrului Ac de cel
puin 4 ori n cursul infeciei. Ambele seruri
vor fi testate n aceeai zi, prin tehnici
identice i n acelai laborator.

TERAPIA ANTIVIRAL
Dificulti:
- Toxicitate (imposibil de a distruge virusul fr
afectarea celulei!)
- Apariia mutantelor rezistente
- Activitate asupra virusului n faz de multiplicare
- Costul avansat al tratamentului
Primele preparate antivirale anticanceroase.
Preparatele antivirale contemporane:
- Nu manifest activitate virucid, doar inhib
reproducerea viral
- Sunt dirijate contra etapelor reproducerii virale
Adeziunea virusului la celul
Mecanismul blocarea receptorilor celulari (HIV-
oligopeptidul T, care reproduce gp120; CD4 solubili)
Dificulti: afinitate redus, degradare rapid
Fuziunea, penetrarea
Reprezint peptide sintetice (pentafuzida-T20, T1249)
blocheaz fuziunea virusului HIV cu membrana
celular (dificultate injecii s/c zilnice)
Decapsidarea
Amantadina, rimantadina inhib decapsidarea
virusului gripal A
Utilizare limitat dezvoltarea rezistenei


Replicarea
Mecanismul blocheaz activitatea enzimelor virale de
reproducere (transcriptaze, polimeraze, replicaze)
Avantaj nu influeneaz componentele celulei-gazd
1. Analogi nucleozidici
Se disting de nucleozidele naturale prin modificarea
componentului glucidic sau a bazei purinice sau
pirimidinice. Blocheaz elongarea catenei de ADN n
curs de formare.
- Antiherpetice (aciclovir, ganciclovir, penciclovir,
idoxuridin)
- Anti-HIV (zidovudin, didanozin, zalcitabin, stavudin,
lamivudin, etc)
- Anti-HBV (entecavir, LdT, LdC faz de cercetare)

12.11.2010
15
2. Analogi nucleotidici
- Cidofovir - CMV, HSV
- Adefovir - HIV, HBV, HSV, CMV
- Tenofovir HIV, HBV
3. Analog al pirofosfatului
- Foscarnet HSV, CMV (HIV, HBV -?)
4. Inhibitori nenucleozidici ai RT HIV
(nevirapin, delavirin, efavirenz)

Blocarea activitii polimerazelor virale se
realizeaz prin:
1. Competiie cu substratul natural al
enzimei
2. ngrmdirea steric a centrului activ al
enzimei
3. Incorporarea n catena de ADN n curs de
sintez
4. Blocarea procesului de elongare a
catenei de ADN prin incapacitatea de a
fixa un alt nucleozid pe analogul su
artificial
Asamblarea, eliberarea
- Inhibitori ai proteazei HIV (sanquinavir,
ritonavir, indinavir, amprenavir,
lopinavir, nelfinavir, etc) toxicitate,
rezisten
- Inhibitori ai neuraminidazei virusurilor
gripale (zanamivir, oseltamivir). Activ
contra gripei A i B (efect preventiv,
curativ, rezisten rar)

INTERFERONII (IFN)
IFN ansamblu de proteine capabile s
confere celulelor o stare de rezisten la o
infecie viral.
IFN tip 1 (clasic, antiviral):
1. IFN-alfa (leucocitar)
2. IFN-beta (fibroblastic)
Inductori ai IFN 1: virusuri, LPS, ARN bicatenar
IFN-gamma, tip 2, imun, produs de LT activate,
NK. Manifest activitate munomodulatoare
- IFN acioneaz asupra ciclului de replicare viral prin
intermediul celulei: interaciunea IFN-alfa cu receptorul
su induce sau stimuleaz expresia unor gene celulare,
rezultnd o activitate antiviral (blocarea translaiei
ARNm viral, degradarea ARNm viral). Este posibil i
blocarea asamblrii i nmuguririi virusului (HIV)
- IFN mresc expresia moleculelor clasa I a CMH, iar IFN-
gamma i a celor de clasa II
- IFN mresc activitatea macrofagelor i manifest
activitate antiproliferativ
- IFN-gamma activeaz celulele NK

Utilizarea terapeutic a IFN hepatite B i C cronice,
infecii herpetice, sarcomul Kaposi, limfome, leucemii
Alte citokine (TNF-a, IL-2, IL-4, IL-10, IL-12) sunt la etapa
de testare in vitro.
12.11.2010
16
TERAPIA CELULAR (CMV, EBV)
Fondat pe administrarea CTL (limfocite Tc)
autologe.
- Prelevarea sngelui de la bolnav
- Izolarea CTL specifice
- Clonarea i proliferarea CTL in vitro
- Reinjectarea la pacient
VIITOR: fototerapia, imunizarea intracelular
(introducerea unei gene ce codific un anticorp
antiviral)