1

Curs 2

Proceduri

de baz

n
laboratorul

clinic

Colectarea probelor, variabile
preanalitice

Reactivi

Conservarea probelor
2
Colectarea

probelor

de snge

Colectarea i prepararea probelor necesit msuri de
protecie pentru personal

Colectarea

sngelui

pe nemncate sau nu (ex. Glucoza i
colesterolul se determin pe probe colectate de la pacieni
dimineaa, pe nemncate)
Se fac analize pe probe de:

Snge total

Ser

Plasm
3
Analiza sngelui

Testele se realizeaz pe snge total, ser sau plasm n funcie de mai muli factori

Analit cele mai multe teste hematologice necesit snge total

Instrumentaia utilizat

Procedura de analiz (validare pe ser sau plasm)

Viteza de analiz cele mai rapide testele pe snge total; separarea de plasm
sau ser necesit centrifugare sau coagulare/centrifugare

Multe teste se refer la analii dizolvaispeciment de analiz ser sau plasm

Excepii: analiza de hemoglobin, folat

n RBC, gaze din snge

Electroforeza proteinelor ser (fibrinogenul modific tablou proteic)

Multe teste se pot realiza fie pe ser fie pe plasm
4
Tuburi de colectare
Vacutainere

Presiunea sczut uureaz colectarea

Conin diferii anticoagulani pentru
colectarea sngelui total.

Pot conine aditivi pentru teste specifice

(glucoz, metale)

Sterile

Codificare universal de culori a capacelor
5

Nu conine anticoagulani sau ageni de
pstrare

Se folosete pentru preparare de ser

10-15 min

necesare pt. coagulare nainte
de centrifugare
Rou
Galben

Conine un

gel care formeaz

o barier
fizic ntre ser i masa celular dup

centrifugare

Nu conine aditivi
Gri
argintiu

Msurarea glucozei

Conine NaF, Caox

pentru stabilizarea
glucozei prin inhibarea enzimelor
glicolitice

Conine heparinat

de

Na/K/Li.

Nu se folosesc la msurri de Na, K, Li

Po afecta

mrimea i forma celulelor;
nerecomandate pt. msurri
hematologice
Verde
6

Conine EDTA ca sare de K

Nepotrivit pt. teste de K i Ca

Conine EDTA citrat de Na

Folosit la teste de coagulare
deoarece r. este reversibil

Test de Pb

Teste de alte elemente n urme
violet
albastru
deschis
maro
albastru
nchis
7
Sampling
Sampling
Primul pas: colectarea adecvat a probei
Unless the complete history of any sample is known
with certainty, the analyst is well advised not to spend
his time analyzing it
(R.E.

Thiers, Methods

of Biochemical

Analysis. 1957)
8
Variabile
Variabile

preanalitice
preanalitice

Controlabile
Fiziologice (poziie, ex. fizice, variaia circadian)
Cltorii
Diet
Stil de via (fumat, consum de alcool)
Medicamente

Necontrolabile
Biologice (vrst, sex, ras)
De mediu (altitudine, climat, etc.)
Condiie fizic proprie (obezitate, febr, traume,
transfuzii, stres, sarcin, intervenii chirurgicale, etc.)
9
Prepararea probei de snge
Prepararea probei de snge
Snge
Cheag (fraciunea
celular+fibrinogen)
Coagulare, Centrifugare
Ser
Hemoliza: ruperea membranei celulelor roii cu eliberarea Hb

i a altor
constitueni celulari n fluidul nconjurtor; serul devine din incolor roz
colectat ntr-un tub curat i
uscat pentru a preveni
contaminarea i hemoliza
O substan poate fi prezent n concentraii diferite n ser i n fraciunea
celulal Hemoliza poate introduce erori semnificative
Ex.: K, Fe, Mg, Zn, uree, proteine
Centrifugarea trebuie realizat ct mai repede dup separarea serului
!
10
Prepararea probei de snge
Prepararea probei de snge
Cnd la analiz este necesar snge total sau
plasm, proba se colecteaz n tuburi
coninnd anticoagulant.
Snge
Anticoagulant
Fraciunea
celular
Centrifugare
Plasm
(Ser+fibrinogen)
11
Anticoagulani
Heparina

(sare de Na/K/Li); este scump; d unele interferene
Oxalat de potasiu

(1 mg/mL) precipit Ca din snge, ceea ce perturb
coagularea; nu se determin n prob Ca sau alte metale care precipit
ca oxalai
Procedeu: se adaug n tubul de colectare o soluie ce conine
cantitatea necesar de Ca, apoi tubul se usuc la 110
0

C pentru a evita
diluarea probei
Citrat , EDTA, NaF
Tem: ce este warfarina?
12
Interferen
Interferen

e
e

Hemoliza (teste colorimetrice)

Lipemia i proteinemia (teste
turbidimetrice)

Anticorpi umani +HAMA (teste
imunologice)
13
Conservarea probei

Probe pstrate n condiii anaerobe (determinarea CO
2

)

colectarea probei pe ulei mineral

NaF+anticoagulant

-

conservarea probelor de snge pentru analiza
glucozei;
- este un inhibitor enzimatic al glicolizei; deoarece inhib i alte
enzime, nu se adaug, de ex. la analiza ulterioar a ureei (este
inhibat ureaza)

Refrigerare (ser, plasm)

procesele enzimatice i bacteriene sunt
ncetinite; se recomand analiza ct mai rapid dup colectare

ngheare (ser, plasm)

pstrare mai ndelungat: nu se aplic la
snge total deoarece se distrug celulele roii
Serul (plasma)

sunt fracionate n timpul ngherii i trebuie
omogenizate dup dezgheare

Filtrat liber de proteine (PFF)

precipitarea proteinelor n mediu
acid i filtrare (centrifugare)
14
Filtrat liber de proteine (PFF)
Proteinele din fluidele biologice interfer cu muli analii

i trebuie
ndeprtate fr a fi distruse
Reactivi de precipitare (coagulare): acid tricloracetic, acid

fosfowolframic
V
ser

+ V
reactiv

filtrare (fr splare) sau centrifugare
PFF n acest caz sunt acide dar adecvate pentru cele mai multe analize.
Reactivi de precipitare (coagulare): Ba(OH)
2

+ZnSO
4
PFF neutru
Avantaj: sunt eliminai muli interfereni pentru analiza glucozei; glucoza
este stabil n PFF deoarece enzimele glicolitice

sunt ndeprtate
10 min
15
Liofilizare
Liofilizare
(1) ngheare (ntre 50 C i 80 C) . (etapa critic)
(2) Uscare primar
presiunea este cobort lent i proba este nclzit
pentru sublimarea apei
Aprox. 95% din apa prezent este ndeprtat
(3) Uscare secundar
ndeprtarea moleculelor de ap nengheat
Coninutul final al apei este 1-4%.
16
Probe de urin
Probe de urin
Colectare uoar

Proba recoltat dimineaa

Proba recoltat /24 ore (conservare cu HCl, HNO
3

, H
3

BO
3

, HAc, Na
2

CO
3

, timol,
toluen, xilen, CHCl
3

, etc.)

Rolul

conservanilor : reduc activitatea bacterian i mpiedic descompunerea
probei ori precipitarea anumitor constitueni

Factori care afecteaz analiza:
Variabile preanalitice- afecteaz probele nainte de efectuarea
analizelor
Controlabile
Necontrolabile (influene biologice, de mediu, ciclice pe termen lung)
17
Alte
Alte

probe
probe
biologic
biologic
ice
ice

analizate
analizate

esuturi

Pr

Unghii

Saliv

Calculi

Dini
18
Pr
Pr
(analiza de urme
(analiza de urme
elementale
elementale
)
)
Sngele i urina

cele mai obinuite probe pentru

analiza de urme n
studii de nutriie, evaluarea polurii, medicina muncii, etc.
Pr

poate furniza indicaii despre expunerea la metale
Uor de colectat
Uor de conservat
Uor de pregtit pentru analiz
19
Limitri
Limitri

n analiza urmelor
n analiza urmelor
elementale
elementale

n pr
n pr

Lipsa de metode standardizate n colectarea, prepararea
i analiza probelor

Lipsa de valori de referin

Probleme datorate contaminrii
Totui, analiza Pb, As, Hg

n pr este o metod acceptat
pentru evaluarea expunerii la aceste elemente.
20
S
S
urse de
urse de
contamin
contamin
are
are

n analiz
n analiz
Analist
Reactivi
Echipament
Ustensile
21
ntrebri

Care sunt principalele fraciuni ale sngelui?

Ce este hemoliza i ce importan prezint?

De ce se adaug adesea HF probelor de snge
colectate pentru determinarea glicemiei?

Ce este filtratul liber de proteine?

Ce este liofilizarea?
22
Identificai codul de culori al flacoanelor !