Producia de etanol din suc de sorg zaharat n lot i fermentarea cu alimentare

discontinua de Saccharomyces cerevisiae

Rezumat
Sucul de sorg zaharat suplimentat cu 0,5% sulfat de amoniu a fost utilizat ca substrat pentru
producerea de etanol cu Saccharomyces cerevisiae TISTR 5048. n lotul de fermentatie ,
parametrii cinetici pentru producerea de etanol depindeau de celula embrionara si
concentratiile glucidelor.

Celul i zahr concentraiile iniiale optime n fermentare lot au fost 1 108 celule ml-1 i 24
Bx
respectiv. La aceste condiii, concentraia de etanol produs (P), randament (YPS) i
productivitatea (Qp) erau
100 gl-1, 0,42 gg-1 i 1,67 gl-1 h-1, respectiv. n fermentaie cu alimentare discontinu,
alimentarea optim de substrat
Strategia pentru producia de etanol la concentraia iniial de zahr 24 Bx fost o singur dat
alimentarea cu substrat, unde P, YPS i Qp erau 120 gl-1, 0,48 gg-1 i 1,11 gl-1 h-1
respectiv. Aceste constatari sugereaza faptul alimentare discontinue fermentare
mbuntete eficiena produciei de etanol n ceea ce privete concentraia de etanol i
randamentul produs.
Cuvinte cheie lot fermentare Fermentaie cu alimentare discontinue Producia de etanol
Saccharomyces cerevisiae Sorg dulce

Introducere
Sorg dulce [Sorghum bicolor (L.)] este singura cultur furnizarea de cereale i stem care pot fi
utilizate ca substraturi pentru producia de zahr, alcool, sirop, furaje, combustibil, textile,
acoperisuri, garduri i hrtie (Rajvanshi i
Nimbkar 2005).
Din cauza crizei energetice din anii 1970, materiale de carbohidrati din surse regenerabile,
inclusiv sorg zaharat
au devenit de interes pentru transformarea biologic n etanol utilizrii drept combustibil sau
carburant aditiv (Goksungur i Zorlu 2001). Sorg zaharat a fost remarcat pentru ei potenial
ca o cultur de energie, deoarece acesta poate fi cultivat n aproape toate domeniile de clim
temperat i tropicale.
Mai multe grupuri de cercetare au dezvoltat noi soiuri cu cereale si zahar randamente ridicate
(Zhan et al 2003.;
Anderson 2005). Cu toate acestea, procesul de fermentare dezvoltare a fost, de asemenea,
important pentru etanol eficient producia de suc de sorg zaharat.
Cele mai multe studii privind producia de etanol din sorg dulce Sucul au fost efectuate
utiliznd celule libere din Saccharomyces cerevisiae n procese discontinue (Bulawayo et al
1996.; Bvochora colab. 2000). Alte procese de fermentaie poate duce la o cretere a
eficienei produciei de etanol (Goksungur i Zorlu 2001;. Ogbonna et al 2001). In acest
studiu, suntem interesai n fermentaie cu alimentare discontinu, deoarece ea are mai multe
avantaje n comparaie cu un conventional fermentaie lot cum ar fi evitarea efectelor
represive

concentraia ridicat substrat care duc la o cretere a formarea produsului (Stanbury colab.
1995).
Scopul acestui studiu a fost de a compara eficacitatea producia de etanol din sucul sorg
zaharat n ceea ce privete
concentraia de etanol produs, randamentul etanol i sa productivitate, folosind lot i cu
alimentare discontinu fermentaii de Saccharomyces cerevisiae TISTR 5048. Efectele de
diferite strategii substrat-alimentare n hrnite-lot
fermentare asupra eficienei produciei de etanol au fostDe asemenea, a studiat.
Materiale i metode
Microorganisme i inocul pregtire
Cele fermentative drojdia Saccharomyces cerevisiae TISTR5048 din colecia de cultur de
Thailanda Institutul de
Cercetare tiinific i tehnologic (TISTR), Bangkok,Thailanda a fost crescut n extract de
drojdie mediu extract de malntr-un agitator rotativ la 100 rot / min, 30 C timp de 18 ore.
Celulele active n bulion au fost folosite ca inocul pentru etanol Producia.
Materii prime
Suc de sorg zaharat (tulpina Keller) extrase din ei tulpini a fost obinut de la Departamentul de
Agronomie,
Facultatea de Agricultur, Khon Kaen University, Tailanda. Dup extracie, sucul a fost
meninut la -18 C pn la utilizare.
Mediu producia de etanol
Suc sorg dulce cu o concentraie de zahr de 18 Bx a fost ajustat cu zaharoz pentru a da 21
i 24 Bx. Apoi,
suc ce conine 18, 21 i 24 Bx fost suplimentat cu 0,5% (NH4) 2SO4 i utilizate ca producia
de etanol (EP)
mediu. Mediul PE a fost transferat ntr-o 500 ml blocat-aer balon Erlenmeyer cu un volum de
lucru final
350 ml i s-a autoclavat la 110 C timp de 15 min.

Procese de fermentaie
Fermentat lot, mediul EP steril coninnd 18Bx a fost inoculat cu S. cerevisiae a da celule
final
concentraii de aproximativ 1 106 1 107 i 1 108 celule ml'1. Fermentaia a fost operat la
30 C
n condiii statice. Probele au fost colectate la momentul intervale de analiz i inoculul
optim a fost
selectate pentru urmtorul experiment. Mediul EPconinnd concentraie de zahr de 18, 21
sau 24 Bx a fost
inoculat cu concentraia optim de celule de drojdie i apoi prelucrate aa cum s-a descris mai
sus. n fermentaie cu alimentare lot,au fost studiate dou strategii-alimentare substrat.
Primul strategie a fost hrnire-un timp la lucru iniialvolum de 50 i 75% din volumul total de
lucru desemnate ca 50:50 i respectiv 75:25. Al doilea strategie a fost hrnire dou ori la
lucru iniial volum de 50%, urmat de alimentare de dou ori cu 25% din volumul total de
lucru (50:25:25). In toate fed-batch
experimente, fermentaia a fost efectuat primul n lot

Modul pn totalul zaharurilor reziduale au scazut si rmas aproximativ 20% din valoarea
iniial. Proaspt
Mediu PE a fost apoi adaug cu atenie n vasul auxiliary Strategiile de hrnire a descris mai
sus.
Metode de analiz
Numerele de celule i totalul solidelor solubile ale fermentaiei bulion au fost determinate prin
metoda de numrare directfolosind haemacytometer i refractometrului de mn respectiv
(Zoecklien colab. 1995). Fermentaia bulion a fost centrifugat la 13.000 rot / min, timp de 10
min. supernatant a fost determinat de zaharuri totale reziduale
printr-o metod de acid sulfuric-fenol (Mecozzi 2005). n
De asemenea, concentraia de etanol a fost analizat prin CGL (Shimadzu GC-14B, Japonia, n
faz solid: polietilen
glicol (PEG-20M), gazul purttor: azot, 90 C izotermacoloan cu umplutur, temperatura de
injectare 160 C, flacr
ionizare Temperatura detectorului 230 C; C-R7 Ae plus Chromatopac date Processor) i
izopropanol s-a utilizat drept
un standard intern. Randamentul etanol (YPS) a fost calculatca etanolul efectiv produs i
exprimat n g etanol
per g zahr utilizat (g g-1). Productivitatea etanolului volumetric(PC) i procentul de
eficien de transformare
sau eficiena randament (Ey) au fost calculate prin urmtoarea ecuaii:

unde P este concentraia etanolului real produs(Gl-1)

t este timpul de fermentaie (h) da cea mai mare concentraie de etanol de lot i hrnii-lot
fermentaii
i 0,51 este randamentul maxim de etanol teoreticconsumului de glucoz.

Rezultate i discuii
Efectele celule iniiale i concentraii iniiale de zahr pe producia de etanol n fermentaie lot
Rezultatele au aratat in mod clar ca concentraie celular iniial nu a afectat concentraia
etanolului final care era
aproximativ 80 gl-1 la sfritul experimentelor (date nereprezentat). Cu toate acestea,
aceasta a afectat semnificativ substratul rata de consum i rata producia de etanol. De
aceea, Concentraia celular iniial la 1 108 celule ml-1 a fost folosit n toate
experimentele ulterioare. Profilele de timp din total zaharuri reziduale, solide totale solubile,
etanol, numere de cellule i pH-ul mediului n timpul fermentrii discontinuu la
concentraia iniial zahr de 18 Bx sunt artate n fig. 1.

Nici faz de laten a fost observat dup celule de drojdie au fost inoculat n sucul sorg
zaharat, indicnd faptul c
suc nu conine nici o substan la un nivel care a fost inhibitor la celulele de drojdie.
Concentraia celular i pH
n timpul fermentaiei a fost relativ constant de-a lungul experimentele. Profilele de timp de
la zahr iniial
concentraie de 21 i 24 Bx au fost similare cu cele din 18 Bx (datele nu sunt prezentate).

Tabelul 1 rezum importante

Parametrii cinetici (P, QP i YPS) de fermentaie etanol la diferite concentraii iniiale de zahr
de sorg dulce
suc.
Rezultatele au indicat c concentraie iniial de zahr a avut efecte semnificative asupra
principalilor parametri cinetici n lot fermentaie. Mare concentraia substratului a fost, ct
valorile P, YPS i t au fost (tabelul 1). Qp la diferite concentraii iniiale de zahr au fost
diferite, indicnd ca ratele de producia de etanol au fost diferite. P i
YPS costul distilare afectat semnificativ i eficiena Consumul substrat, respectiv (Krishnan et
al. 2000).
De aceea, concentraia optim de zahr iniial fermentaie lot n acest studiu a fost de 24 Bx.
Totalul zaharurilor au fost aproape complet consumate cu aproximativ 3% rmnnd n
bulionul de fermentaie la
toate concentraiile de substrat (datele nu sunt prezentate), cu toate acestea, eficien de
conversie sau Ey au fost doar 77-82% din randamentul maxim teoretic. Aceasta a sugerat c
alte
subprodusele precum glicerolul, succinat, alfa-ketogutarate, butandiol i diacetil (Zoecklein
colab. 1995) pot

fi produse n timpul fermentaiei.

Efectele strategie alimentare substrat pe etanol producie n fermentaie cu alimentare
discontinu
Altintas colab. (2002) au raportat c strategiile de nutrieni-alimentare s-ar putea mbunti
n mod semnificativ producia n fermentaiile.
Prin urmare experimente Fed discontinu au fost concepute cadescris anterior. Profilele de
timp ale rezidual total
zaharuri i concentraia de etanol n timpul fermentaiei etanol la concentraia iniial de
zahr din 24 Bx folosind
Timp (h)
0 20 40 60 80
l la oT seri l g (agusl sr RON 1 na) d
t E ah nu-l art necnocl o (n gl 1)
0
50
100
150
200
250
Pentru l la sol (sdil os el bu xB)
ec gol ll ne sreb m SLL ec (l m 1)
0
5
10
15
20
Smochin. 1 cinetica de fermentare n timpul produciei de etanol din dulce suc de sorg la
concentraia de zahr iniial de 18 Bx S. cerevisiaeTISTR 5048 n fermentaie lot: zaharuri
totale reziduale (n), total
solide solubile (d), etanol (h), numrul de celule (e) i pH (.)
Tabelul 1 Parametrii cinetici de producia de etanol din suc dulce de sorg la diferite
concentraii iniiale de zahr de S. cerevisiae TISTR 5048n fermentaie lot
Concentraiile iniiale de zahr (Brix)

Parametri (medie SD) a

P (gl-1)

YPS (-gg 1)
18
0,39 0,01
21
0,40 0,01
24
0,42 0,01

Ey (%)
76.47
78.43
82.35

Qp (gl-1-h 1)

t (h)
73.57 1.62b

2.04 0,05

89.47 2.10

1,87 0,05

100.37 2,97

1,68 0,05

36
48
60

a P, concentraie net etanol produs; Qp, productivitatea volumetric de etanol; YPS,

randamentul etanol; Ey, eficien randamentul i t, timp de fermentare
b Experimentele au fost realizate n triplicate

Smochin. 2 Efectele strategiei hrnire privind consumul de zahar (a) i producia de etanol (b)
din suc de sorg zaharat de S. cerevisiae TISTR 5048 n fermentaie cu alimentare discontinu,
la concentraia iniial de zahr
de 24 Bx: 50:50 (d), 75:25 (s), 50:25:25, de control sau de lot (.)fermentare (h). Timp de
alimentare indicat sgeile
strategii diferite de hranire n fermentaie cu alimentare discontinue sunt artate n fig. 2.
Profile de concentrare de celule i pH din mediul au fost similare cu cele ale fermentaiei lot
(Datele nu sunt prezentate). Smochin. 2 a indicat faptul c nu a existat nici diferenta
semnificativa in ratele de consum substrat i
Ratele de producie de etanol din lot i cu alimentare discontinue fermentaiile timpul primului
33 h. Sistemul fed-batch comportat ca un sistem lot nainte de nutrieni proaspt a fost
adugat, indicnd faptul c aceste rate au fost independent pe volum de lucru iniial.

n fermentaie cu alimentare discontinu, primul i al doilea mese au fost efectuate la 33 i 49

h, respectiv ca
Strategiile de hrnire substrat descris anterior. Era observat c suma de zaharuri totale
acumulate a fosta crescut dup hrnirea. Ca volumul meselor iar volumul de lucru iniial au
fost diferite, total zaharuri reziduale dup prima hrnirea au fost, de asemenea, diferite
Printre strategiile de alimentare. Tabelul 2 rezumrezultatele obinute n experimentele cu
alimentare discontinu la diferiteStrategiile de hrnire substrat.
Rezultatele au aratat ca, la acelai zahr iniialconcentrare, strategia de alimentare substrat
nu au n mod semnificativ afecteaz P, YPS i Qp. n ceea ce privete operare cost, strategia
optim pentru producia de etanol n fermentare cu alimentare discontinu a fost o singur
dat la alimentarea cu substrat volumul iniial de lucru de 50%, deoarece un mic a fost nevoie
de suma de inocul.
Compararea producia de etanol ntre lot ifermentaiile alimentare discontinu
Rezultatele au artat c cantitatea de zaharuri totaleconsumate la sfritul experimentelor a
fost similar n ambele
lot i cu alimentare discontinu fermentaii. Cu toate acestea, maximul concentrare etanol i
randamentul etanol n lotfermentaie au fost mai mici dect cele ale Fed-lotfermentaie.
Aceasta a sugerat c mai multe produsi care
nu au fost cuantificate n acest studiu ar putea fi produs n fermentaie lot.
Rezultatele au artat c concentraia de etanol irandament etanol fermentaiei cu alimentare
discontinu a crescut
aproximativ 18% i, respectiv, 14%, n comparaie cu cele ale fermentaiei lot. Aceasta a fost
de acord cu Date de Altintas et al. (2002), care a constatat c maximulrandament etanol de
amidon de drojdie recombinant n fed-batch
Culturile (0,49 g etanol-suport 1 g) a fost mai mare dect cea n lot-culturi (0,44 g etanolsubstrat 1 g).
Concluzii
Rezultatele obinute n urma acestui studiu au demonstratc producia eficient de etanol din
suc de sorg zaharat
Este posibil atunci cnd suplimentat cu o cantitate mic dintr-unsurs de azot. Fermentaie cu
alimentare discontinu a crescut eficienei produciei de etanol din punct de vedere al
concentraiei de etanol
i randamentul de produs, productivitatea sczut ns a fost obinut. Alte sisteme de
fermentare, cum ar fi repetat
fermentare de lot sau n sistem continuu, utiliznd celuleimobilizare trebuie investigate n
continuare, deoarece acestea potduce la mbuntirea productivitii de etanol (Amutha
iGunasekaran 2001; Goksungur i Zorlu 2001; Ogbonnacolab. 2001).
L. Laopaiboon (&)? P. Thanonkeo? P. Laopaiboon Departamentul de Biotehnologie, Facultatea
de Tehnologie, Khon
Universitatea Kaen, Khon Kaen 40002, Tailanda
e-mail: lakcha@kku.ac.th
L. Laopaiboon
Fermentare Centrul de Cercetare pentru valoarea adugat agricol Produse, Khon Kaen
Universitatea, Khon Kaen 40002, Tailanda
P. Jaisil

Departamentul de Agronomie, Facultatea de Agricultur, Khon Kaen Universitatea, Khon Kaen

40002, Tailanda

Mulumiri Aceast cercetare a fost susinut financiar de ctre Consiliul National de Cercetare a
Thailandei (NRCT), Thailanda. Ne-ardori s le mulumesc elevilor notri, doamna Suparat
Meekhun, doamna Wannapa
Glangsoom i doamna Angkana Narongkasemsuk, pentru tehnic lor asisten.

Bibliografie
Altntas MM, U lgen KO , Kirdar B, O nsan ZI, Oliver SG (2002) Improvement of ethanol
production from starch by recombinant yeast through manipulation of environmental factors.
Enzyme Microb Technol 31:640647
Amutha R, Gunasekaran P (2001) Production of ethanol from liquefied cassava starch using
co-immobilized cells of Zymomonas mobilis and Saccharomyces diastaticus. J Biosci Bioeng
92:560564
Anderson IC (2005) Ethanol from sweet sorghum. http://
www.energy.iastate.edu/renewable/biomass/cs-anerobic2.html. Cited 5 Oct 2005
Bulawayo B, Bvochora JM, Muzondo MI, Zvauya R (1996) Ethanol production by fermentation
of sweet stem sorghum juice using various yeast strains. World J Microbiol Biotechnol 12:357
360
Bvochora JM, Read JS, Zvauya R (2000) Application of very high gravity technology to the
cofermentation of sweet stem sorghum juice and sorghum grain. Ind Crop Prod 11:1117
Goksungur Y, Zorlu N (2001) Production of ethanol from beet molasses by Ca-alginate
immobilized yeast cells in a packed-bed bioreactor. Turk J Biol 25:265275
Krishnan MS, Taylor F, Davison BH, Nghiem NP (2000) Economic analysis of fuel ethanol
production from corn starch using fluidized-bed bioreactor. Biores Technol 75:99105
Mecozzi M (2005) Estimation of total carbohydrate amount in environmental samples by the
phenol-sulphuric acid method assisted by multivariate calibration. Chemom Intell Lab Syst
79:8490
Ogbonna JC, Mashima H, Tanaka H (2001) Scale up of fuel ethanol production from sugar beet
juice using loofa sponge immobilized bioreactor. Biores Technol 76:18
Rajvanshi AK, Nimbkar N (2005) Sweet sorghum R&D at the Nimbkar Agricultural Research
Institute (NARI). http://nariphaltan.virtualave.net/sorghum.htm. Cited 5 Oct 2005
Stanbury PF, Whitaker A, Hall SJ (1995) Principles of fermentation technology. Pergamon
Press, Oxford
Zhan X, Wang D, Tuinstra MR, Bean S, Seib PA, Sun XS (2003) Ethanol and lactic acid
production as affected by sorghum genotype and location. Ind Crop Prod 18:245255
Zoecklien BW, Fugelsang KC, Gump BH, Nury FS (1995) Laboratory procedures. In: Wine
analysis and production. Chapman & Mall, New York