ENZIMELE

1. NOIUNI GENERALE
SUBSTRAT

ENZIMA (E)

PRODUS

Substrat: molecula care este transformat datorit aciunii catalitice a unei enzime
Produs: molecul care apare n urma unei reacii catalizate de o enzim.
Caracteristici ale enzimelor
Sunt de natur proteic
Acioneaz la concentraii mici
Se regsesc neschimbate la sfritul reaciei
Nu afecteaz echilibrul chimic ci grbesc atingerea lui
Diminueaz energia de activare a unei reacii

H2O2 H2O + O2 necesit 18 kcal/mol

Pt col.
H2O2 H2O + O2 necesit 11,7 kcal/mol
Enzima (catalaza)
H2O2 H2O + O2 necesit 2 kcal/mol
Prezint o mare specificitate
Activitatea lor poate fi controlat

Nomenclatura
Denumirea comuna se ataeaz sufixul -az la numele substratului (Ex. Glucozidaz,
ureaz) sau la denumirea reaciei (ex. Lactat dehidrogenaz, adenilat ciclaza). Unele
enzime i pstreaz denumirea empiric care nu are legtur cu reacia catalizat (ex.
pepsina, tripsina)
Denumirea tiinific elaborat de Uniunea Internaional de Biochimie i Biologie
molecular (IUBMB).
Specificitatea de aciune permite denumirea i clasificarearea enzimelor n funcie de reacia pe
care o catalizeaz n 6 clase:
1. Oxidoreductaze catalizeaz reaciile de oxidoreducere celular. Cuprind 13 subclase.
Lactatdehidrogenaza
Succinatdehidrogenaza
2. Transferaze catalizeaz transferul unei grupri de pe o molecul pe alta. Cuprind 8 subclase.
transaminaza
hexokinaza
3. Hidrolaze catalizeaz scindarea substratului sub aciunea apei. Cuprind 9 subclase.
4. Liaze catalizeaz scindarea substratului prin alte mecanisme dect hidroliza (eliminarea unui
compus X-Y cu formarea unei duble legturi). Cuprind 5 subclase.
Aldolaza

5. Izomeraze catalizeaz reaciile de interconversie a izomerilor (optici, cis-trans etc.). Cuprind 5

subclase.
Glucozo-6-fosfat izomeraza
Fosfo-gluco-mutaza
2

6. Ligaze catalizeaz reaciile prin care se formeaz noi legturi C O , C C , C N , C S.

Cuprind 4 subclase.
Piruvat carboxilaza
Fiecare enzim este caracterizat de un cod format din 4 cifre desprite prin puncte:
prima cifr reprezint clasa, a doua cifr reprezint subclasa, respectiv gruparea sau legtura
chimic, a treia cifr reprezint subsubclasa preciznd natura receptorului, a patra cifr arat
poziia enzimei n subclas.
Exemplu: Alcooldehidrogenza ADH : E.C.1.1.1.1. = oxidoredictaz, gruparea CH2 OH,
acceptorul NAD+, prima enzim din subclas.
Structura enzimelor
Un numr de enzime sunt proteine care prezint o activitate catalitic intrinsec. Alte
enzime sunt proteine, numite apoenzime, care nu prezint activitate catalitic dect asociate cu
un co-factor care poate fi de natur anorganic sau organic.
Cnd componenta neproteic este o molecul organic de dimensiuni mici, se numete
coenzim. Activitatea catalitic specific aparine apoenzimei dar cofactorul organic face parte,
de regula, din centrul activ. n plus cele mai multe enzime necesit prezena unui ion metalic
pentru a fi active.
Aminoacizii din partea proteic se pot mpri n 3 categorii:
- aminoacizii implicai n prima etap a catalizei enzimatice cei care constituie centrul de
specificitate si asigur recunoaterea substratului pentru a putea avea loc legarea
substratului de enzim.
- Aminoacizii implicai n a doua etap a reaciei enzimatice care particip la transformarea
chimic a substratului i constituie partea catalitic a centrului activ.
- Aminoacizii care menin conformaia adecvat a centrului ativ, a centrilor alosterici i
poziionarea adecvat a enzimei n interiorul celulei (ex. Formarea complexelor
multienzimatice, poziionarea pe o membran)
Centrul activ este format din primele 2 categorii de aminoacizi.
Co-factori
1. ioni metalici metaloenzime. Cel mai ntlnit este ionul de Zn2+ este cofactor pentru
anhidraza carbonic, carboxipeptidaze, fosfataze alcaline etc. Ali ioni metalici Mg2+,
Ca2+, Na+, K+
2. grupri prostetice molecule organice de natur neproteic legat foarte strns de
molecula proteic. Gruparea porfirinic este legat covalent de partea proteic n
catalaze, peroxidaze i citocromi.
3. co-enzime sunt molecule organice de talie mic foarte strns legate de partea proteic
ele rmn legate de protein pe parcursul operaiilor de purificare.
Exist 2 tipuri de coenzime:
- unele care fac parte din centrul activ ex. Piridoxal-fosfat
- unele care sunt mai degrab cosubstrat ex. NAD+
Specificitatea enzimelor
Fiecare enzim acioneaz asupra unui singur substrat. Modelul cheie-broasc. Acesta
explic specificitatea reaciei dar nu explic mecanismul catalitic. Centrul activ sufer
modificri conformaionale adaptate legrii de substrat adaptarea indus (mn mnu).
I. Specificitate legat de reacia chimic un anumit substrat poate suferi mai multe tipuri
de transformri (reacii). Ex. Un aminoacid poate suferi reacii de oxidare, de decarboxilare,
de transaminare etc.
3

oxidaza

R CH COOH

R C COOH + NH3
O
- cetoacid

NH2
- aminoacid

R CH COOH

decarboxilaza

R CH2 NH2 + CO2

NH2
- aminoacid

amina

transaminaza
R CH COOH

R C COOH

NH2
- aminoacid

O
- cetoacid

R1

C COOH

R1

CH COOH
NH2

O
- cetoacid

- aminoacid

II. Specificitate legat de substrat

A. Specificitate legat de natura legturii: hidrolazele catalizeaz reacii de hidroliz - sunt de
mai multe tipuri in funcie de tipul de legtur hidrolizat. Ex. Esteraze, amidaze etc.
B. Specificitate de grupare.
Ex. Esterazele , enzime care catalizeaz hidroliza gruprii ester, se clasific n carboxiesteraze i
fosfoesteraze
Proteazele (hidrolizeaz legtura peptidic) se mpart n exopeptidaze , endopeptidaze. Anumite
endopeptidaze au o specificitate mai avansat: pepsina hidrolizeaz prefereniallegtura peptidic
la care particip un aminoacid aromatic prin gruparea amino, tripsina hidrolizeaz preferenial
legturile peptidice la care particip un aminoacid bazic prin gruparea carboxil etc.
C. Specificitate absolut pentru un singur substrat: ureaza acioneaz numai asupra ureei,
anhidraza carbonic numai asupra CO2, etc.
D. Stereospecificitatea
- L-aminoacid oxidaza acioneaz numai asupra L-aminoacizilor. Enzimele proteolitice (ex.
Tripsina, chimotripsina) acioneaz asupra legturilor peptidice formate ntre L-aminoacizi.
- alfa-amilaza acioneaz asupra amidonului (legturi alfa-glicozidice)
- fumaraza acioneaz asupra acidului fumaric

Cinetica enzimatic
Viteza unei reacii enzimatice este urmrit, n general, prin msurarea cantitii de
substrat transformat n unitatea de timp. Se poate de asemenea urmri cantitatea de produs
format n unitatea de timp.
Variaia vitezei de reacie n funcie de concentraia enzimei

Pe un anumit domeniu de concentraie, viteza reaciei variaz direct proporional cu concentraia

enzimei.
Variaia vitezei reaciei enzimatice n funcie de concentraia substratului
Leonor Michaelis i Maud Menten au dedus n anul 1913 ecuaia vitezei iniiale de reacie n
funcie de concentraia substratului. Ecuaia se numete ecuaia Michaelis-Menten.
S
v0 Vmax
S KM

KM este egal cu concentraia substratului pentru care viteza este egal cu Vmax/2. Reprezint o
msur a afinitii enzimei fa de substrat valori mari reprezint o afinitate mic, valori mici
reprezint o afinitate mare la concentraii mici de substrat.
KM este specific fiecrei enzime i substrat i este independent de concentraiile enzimei i
sustratului.
O reacie enzimatic parcurge mai multe etape:
- fixarea substratului (S) pe enzim (E) cu formarea complexului enzim-substrat (E-S). Aceast
etap implic recunoaterea substratului de ctre enzim i este caracterizat de KM.
- disocierea complexului E-S n E i produi etap caracterizat de Vmax.

Vmax se obine cnd enzima este saturat cu substrat.

Liniarizarea ecuaiei ecuaia Lineweaver-Burk
1
1
K
1

M
v0 Vmax Vmax S

Variaia vitezei reaciei enzimatice n funcie de concentraia enzimei

Exist o dependen liniar pe un anumit domeniu de concentraie (limitat). Intervine
efectul solubilitii enzimele sunt proteine.
Factorii fizico-chimici care influeneaz viteza reaciilor enzimatice
1. pH
La nivelul enzimei produce modificarea gradului de ionizare a anumitor grupri funcionale care
conduce la modificarea centrului activ.
La nivelul substratului produce modificri ale gradului de ionizare ceea ce conduce la
favorizarea sau mpiedicarea formrii complexului E-S.
Se definete astfel un pH optim pentru pentru transformarea enzimatic a unui substrat ntr-un
mediu cu o compoziie definit.

2. Temperatura
Dac ne situm n yona de temperature sczute (0 - 40C), viteza de reacie crete cu creterea
temperaturii.
La temperaturi mai mari are loc denaturarea enzimei care are ca i consecin scderea vitezei
reaciei enzimatice.
Si n acest caz vorbim de o temperatur optim pentru desfurarea unei reacii enzimatice.

3. Inhibitorii enzimatici se clasific n inhibitori ireversibili i inhibitori reversibili.

Inhibitorii ireversibili realizeaz legturi covalente cu enzima care i pierde capacitatea
catalitic.

La doze mici, acidul acetilsalicilic reduce sinteza de tromboxan, efecte favorabile n

infarctul miocardic sau ischemia cerebral, antiagregant plachetar.
Inhibitorii reversibili formeaz legturi necovalente, slabe care se pot desface relativ uor.
Inhibiia reversibil poate fi de trei tipuri :
- competitiv
- necompetitiv
7

uncompetitiv

In cazul inhibiiei competitive, inhibitorul prezint o analogie structural cu substratul ceea ce

determin o competiie n legarea de centrul activ al enzimei.

n curba Michaelis-Menten se observ creterea valorii KM, deci scderea afinitii enzimei fa
de substrat. Vmax rmne constant n cazul unei concentraii suficiente de substrat.
n curba Lineweaver-Burk se modific panta dreptei i intersecia cu abscisa.
Inhibiia depinde de : concentraia substratului, concentraia inhibitorului, afinitatea enzimei
pentru substrat, afinitatea enzimei pentru inhibitor.

Exemple :
1.

Inhibitori
8

2. Acidul p-aminobenzoic este folosit de bacterii la sinteza acidului folic. Sulfonamidele

acioneaz ca inhibitori competitivi n aceast sintez nlocuind acidul PAB de aici efectul
antibacterian.

3. Acidul uric este produsul catabolismului purinelor. Alopurinolul este inhibitor competitiv, este
analog cu hipoxantina. Se formeaz aloxantina.

4. Etanolul si metanolul sunt metabolizati de aceeasi enzima (alcooldehidrogenaza).

Formaldehida i acidul formic sunt responsabili de efectele intoxicaiei cu metanol. In aceste
situaii se administreaz i.v. etanol i glucoz etanolul inhib metabolizarea metanolului care se
elimin prin urin iar glucoza contracareaz hipoglicemia creat de etanol.

5. Prima etap n sinteza colesterolului este catalizat de enzima HMG-CoA reductaza

(hidroximetilglutaril-CoA reductaza). Statinele care sunt medicamente cu efect
hipocolesterolemiant (ex. atorvastatina, simvastatina) sunt analogi structurali ai substratului
acestei enzime inhibitori competitivi.
n cazul inhibiiei necompetitive inhibitorul nu prezint o analogie structural cu
substratul nu se leag de centrul activ al enzimei. Inhibitorul se leag de o alt parte a enzimei.
Inhibitorul se poate lega att de enzima liber ct i de complexul E-S.
n acest caz KM rmne nemodificat i se modific Vmax (scade).
In diagrama Lineweaver-Burk se modific panta i ntersecia dreptei cu axa Y.
Inhibiia depinde de concentraia inhibitorului i de afinitatea enzimei pentru inhibitor.

n cazul inhibiiei uncompetitive, inhibitorul se leag numai de complexul E-S. n aceast

situaie se modific att KM ct i Vmax.

10

11

Enzimele alosterice
De regul, enzimele alosterice

12